用于避免材料腐坏或微生物污染的长链糖脂的制作方法
【专利摘要】本发明涉及如下文详细定义的且具有防腐或抗微生物性质的某些糖脂化合物的用途和应用它们的使用方法、糖脂类的新的化合物和相关的发明实施方案。所述化合物具有下式和/或其生理学上、尤其药学上或营养品上或美容上可接受的盐或酯，为本身或呈组合物的形式，其中m为3-5，n为2-5，o为0或1，且p为3-17，条件是m+n+o+p的和不小于14；和R为通过其碳原子之一与结合氧结合的糖类部分，其中所述化合物可以开链形式和/或以内酯形式存在。
【专利说明】用于避免材料腐坏或微生物污染的长链糖脂
[0001]发明概沭
本发明涉及如下文详细定义的且具有防腐或抗微生物性质的某些糖脂化合物的用途和应用它们的使用方法、糖脂类的新的化合物及相关的发明实施方案。
[0002]在下文和权利要求书中描述的这些和相关的发明实施方案通过引用结合到本说明书中。
[0003]发明背景
细菌和其它微生物有机体引起食品和饮品、化妆品和家居护理产品以及其它产品变质，从而降低这类产品或商品的保存期限或有效期。因此，在食品和饮品、化妆品、绷扎材料和其它材料(例如植入物等医疗装置)方面，已进行了大量努力以减少微生物污染物的有
害作用。
[0004]其它食物防腐剂例如盐、糖和醋已经使用了数代，虽然使用相对安全，但其防腐作用在作用的持续时间和它们可用于的食物和饮料的类型两者方面受到限制。另外，在较高水平下，防腐剂例如盐和醋可能影响产品的味道。
[0005]化妆品通常所用的防腐剂包括抗微生物剂，例如季铵化合物、醇类、氯化酚类、对羟基苯甲酸酯类和对羟基苯甲酸盐类、咪唑烷基脲、苯氧乙醇、对羟基苯甲酸酯、小的羧酸如苯甲酸、山梨酸、水杨酸、甲酸、丙酸或相应的盐。还可使用甲醛释放剂和异噻唑啉酮类。
[0006]然而，这些材料通常可能是不耐受的，或者例如在甲醛的情况下可能甚至是有毒的和甚至是致癌的，或者 它们可能引起变态反应或食物不耐性。
[0007]例如用于食物和尤其饮料的另一种防腐剂是硫酸，而肉制品(例如香肠、咸肉和肉)中，常常加入降低水活度的稳定剂，例如亚硝酸钾和/或钠和硝酸钾和/或钠。此外烟熏常常用来保存肉制品，其含具有致癌性质的多环芳香烃形成的不期望的副作用。
[0008]食物和饮料对微生物腐坏有不同程度的敏感性，这取决于食物或饮料的内在因素，例如pH、养分含量(例如汁液、维生素或微量营养物含量)、碳酸饱和水平、白利糖度(Brix)( 一种含糖量的指示剂)、水质(例如碱度和/或硬度)和防腐剂。
[0009]在微生物能够克服产品的内在保护因子并生长时便发生腐坏事件。微生物克服这些障碍的能力尤其可受初始污染水平、温度、含水量(例如水活度)和包装完整性的影响。特别重要的还有化妆品的复发性污染，例如在正常使用时因手接触发生的污染。
[0010]多种生物是造成多种饮料材料(包括冷灌装饮料)变质的原因。酵母例如酵母属(SaccAan謂Fees)、接合酵母属焊ces)、念珠菌属{Candida)和德克酵母属酵母iPekkera spp.)最为常见。此外，嗜酸细菌例如乳杆菌属{Lactobacillus)、明串珠菌属(Zewcoflo1Sioc)、葡糖杆菌属{Gluconobacter)和发酵单胞菌属细菌{Zymomonas spp.)及霉菌如青霉属iPenicillium)、曲霉属{Aspergillus)和毛霉菌属霉菌(Mucor spp.)可使多种含水物质变质。
[0011]其它材料及其它类型的饮料易被微生物腐坏。嗜酸、嗜热细菌(例如脂环酸芽孢杆菌属细菌iAlicyclobacillus spp.))的孢子和丝衣霉属(Pyssochlamys')的耐热霉菌孢子、其变形(无性)期、拟青霉属(Paecilomyces)和新萨托菌属霉菌{Neosartorya spp.)可经历巴斯德灭菌法而存活，并可破坏未充碳酸气的热灌装产品，例如运动饮料和茶。此外，包装水易被霉菌污染。
[0012]在化妆品、个人护理和家居护理产品中，腐坏因多种微生物而发生，微生物的范围为从革兰氏阳性菌(例如葡萄球菌属细菌{Staphylococcus spp.))、革兰氏阴性菌(例如大肠杆菌{Escherichia co/i)、假单胞菌属细菌(Pseudomonas spp.))至酵母(例如白色念珠菌{Candida albicans))和普通霉菌(例如黑曲霉(Aspergillus niger')')。在这些产品中或在这些产品上的微生物生长取决于若干内在因素，例如制剂的水活度(生长或繁殖最低水活度要求的范围，从对于不动杆菌属iAcinetobacter)菌种的0.99下至对于某些真菌菌种的0.61)、制剂组成、pH值(例如对于大多数酵母和霉菌生长的最佳pH介于4.0和
6.0之间)和加工条件(例如温度)。虽然在加工期间高温(例如80°C ) 20分钟可减少微生物污染，但重要的是防止制剂中的防腐剂失活或降解。此外，产品包装、防腐剂的溶解度及其抗微生物敏感性特征将影响防腐效能，因此影响产品的保存期限。
[0013]可采用化学防腐剂和/或加工技术例如热灌装、隧道式巴斯德灭菌法、超高温(UHT)或巴斯德灭菌法接着无菌包装和/或巴斯德灭菌法接着使饮料冷却，来实现保护敏感产品免于微生物腐坏。一般而言，PH < 4.6的饮料可经化学防腐、热处理和充入包装，使得产品不被再污染。例如，加工技术例如冷灌法接着化学防腐剂或巴斯德灭菌法伴随冷灌法，可用来保存冷灌装饮料。以类似方式，可采用不加防腐剂技术例如热灌装、隧道式巴斯德灭菌法、巴斯德灭菌法接着无菌灌装或需要使饮料冷却(即在巴斯德灭菌步骤后在冷藏下)，来加工这种相同饮料。PH为2-4.6的饮料必须加工使得使用超高温接着无菌装入包装或通过使用曲颈甑，来杀死孢子。
[0014]酸性的存放稳定的充碳酸气和未充碳酸气的食物或饮料(例如软饮料)的现有防腐系统一般依赖于弱酸防 腐剂(例如苯甲酸和/或山梨酸)。苯甲酸和山梨酸(及其盐)有效抑制酵母、细菌和霉菌(有些除外)。饮料中的弱酸在其解离和未解离形式之间平衡存在，这取决于酸的解离常数(PKa)和饮料的pH。苯甲酸的pKa为4.19，山梨酸的pKa 4.76。低于所用酸的PKa的饮料pH将平衡推向未解离形式。未解离形式针对微生物更有效；因此，弱酸防腐剂在低pH范围最有效。
[0015]可通过将防腐增强剂(例如螯合化合物)加入待防腐的材料(例如食物、饮料或美容制品)中，来提高弱酸的防腐性质。例如，所加入的通用螯合化合物包括乙二胺四乙酸(EDTA)钙二钠或一种或多种多磷酸盐例如六偏磷酸钠(SHMP)。
[0016]在高营养未充碳酸气的产品中，例如含有果汁、维生素和/或矿物质的那些饮料，如果与防腐增强剂联用，弱酸更可能发挥抑制作用。然而，弱酸防腐系统也有局限性:
微生物的遗传适应性和随后的抗性是最大的顾虑之一(参见Piper等，Microbiol.(2001) 147: 2635-2642)。某些酵母例如拜耳接合酵母及^7ii)、二孢接合酵母
、克鲁斯念珠菌{Candida krusei)和酿酒酵母(51 cererisiae),具有使其能够抵抗弱酸防腐剂并生长的特殊基因。尽管存在防腐剂且不论EDTA或SHMP共同存在与否，这都会发生。一些细菌例如葡糖杆菌属细菌{Gluconobacter spp.)也被视为耐防腐剂的。已表明克服这种抗性所需弱酸的水平远远超过使用水平的规定限度。保存茶(preservedteas)、含果汁饮料和充碳酸气饮料的腐坏最通常是由于防腐剂抗性微生物所致。
[0017]发现中链饱和脂肪酸及其与寡羟基化化合物的酯具有针对几种细菌和真菌的抑制作用。用约8-12个碳原子的链长,最小抑制浓度值达到最大(Varvaresou, Int.J.Cosmetic Sci (2009) 31: 163-75)。
[0018]另外，低酸饮料(即pH≥4.6)的其它加工技术具有局限性。所述低酸饮料应经热处理以充分杀死肉毒梭菌{Clostridium botulinum)和芽孢杆菌属iBacillus)菌种(腊样芽孢杆菌{B.Cerew1S)、枯草芽孢杆菌{B.subtil is)等)的孢子。所述加工的实例包括UHT和曲颈甑。甚至在所述加工后，饮料产品应按防止加工后污染的方式处理。然而，研究表明仍可有经过不同加工技术还存活的多种微生物株。这些加工技术最后不能排除腐坏的潜力。
[0019]其它化学防腐剂在消费时也可引起不良副作用。因此，许多现有防腐剂必须受控制，并且在使用时有法律强制性上限。另外，许多防腐剂，例如苯甲酸钠、丙酸盐类、芳族苯类、有机酸、丙二醇和甘油，例如在以充分的抗微生物作用的水平使用时，使饮料或食物有不好的味道，在某种程度上掩蔽或改变消费者所预期的味道。当以高水平使用时，弱酸可能使咽喉或口腔灼伤。虽然存在其中这种属性可能是可接受的某些存放稳定的饮料，但这种感性知觉常被视为负面的。类似地，用于弱酸防腐系统的多磷酸盐类可能具有某些局限性。例如，多磷酸盐类可能使饮料有异味。[0020]如WO 03/034994 (其通过引用以其整体结合到本文中)所述，某些润肤溶剂(emollient solvent)当与精油或针对微生物的成分组合时显示协同作用。用作化妆品中的防腐剂的润肤溶剂通常不产生皮肤反应，并另外使皮肤柔滑光泽。
[0021]在一系列出版物中，Nishida等人报道了产生糖脂的“担子菌(Basidiomycetessp.)”的未鉴定株的化合物，其被认为显示针对革兰氏阳性菌的抑制活性(Nishida，Tetrahedron Lett 1988, 29(41): 5287-90 ;Chem Pharm Bull 1990, 38(9): 2381-9;J Antibiot 1991， 44(5): 541-5 ；Chem Pharm Bull 1991， 39(11): 3044-7 ；Proc“Symposium on the chemistry of natural organic compounds，，1987, 29: 729-36;同上1990，32: 253-9)和针对脊髓灰质炎病毒和疱疹病毒感染的抑制活性(J Chrom 1994，664(2): 195-202 ；J Mass Spectrom Soc Jpn 1995，43(1): 27-36 ;同上 37-44)。在结构解释方面进行了大量努力，在上述出版物中详细给出了结果；然而作者没有提供所提议的抗微生物活性的任何数据。其后，由Nishida等人(Glykenin IVA)分离的化合物之一被报道为来自花耳属真菌Wacrymyces sp.)的抗真菌剂(Wunder, A., Diss.1995, Univ.Kaiserslautern, Germany)。Mierau (Z Naturforsch 2003 ；58c: 541-6)提到该项研究。所述出版物中无一报道了有关生产者生物的生物学数据和特性的详情。
[0022]JP 2006-176438 A 和 J.Antibiot.2007，60，633-639 公开了 F-19848 A，一种获自真菌菌株花耳属真菌SANK 20204的发酵液的糖脂，作为透明质酸结合受体CD44的抑制剂，以及作为可用于治疗或预防变性关节炎或由变性关节炎引起的疾病。
[0023]生物表面活性剂在胞外产生或作为各种生物(例如细菌和真菌)的细胞膜的部分。其结构通常含有疏水非极性部分和亲水组分，疏水非极性部分由不饱和的、饱和的和/或氧化脂质或脂肪酸组成，亲水组分可由氨基酸、糖类、磷酸盐或环肽组成。根据其化学结构，一般将其归类为糖脂、脂肽、磷脂、脂肪酸和聚合物。生物表面活性剂由多种微生物产生，因此在其化学结构上不同。一些生物表面活性剂具有针对细菌、酵母、霉菌或病毒的抗微生物活性。此外，它们可通过其破坏表面(例如植入医疗装置的表面)上的生物膜的能力，来防止这些表面上的微生物群集。
[0024]槐糖脂、鼠李糖脂和甘露糖基-赤藓糖醇脂是化妆品中最广泛使用的糖脂生物表面活性剂。
[0025]已知鼠李糖脂在除去生物膜上的医院(nosocomial)微生物中的功效。生物膜的特征是所涉及的微生物的强粘附活性。具有抗粘附或生物膜破坏活性的已知生物表面活性剂由嗜酸乳杆菌(Lactobacillus、发酵乳杆菌(Z.、乳酸乳球菌 ilactococcus Jacii1S)、嗜热链球菌 ^Streptococcus 、枯草芽抱杆菌(Bacillus 仰况/7/5.)、地衣芽胞杆菌{B.7icA<9/7i/br?i5.)、金黄短杆菌(Brevibacteriumaureuin)、铜绿假单胞菌iPseudomonas aeruginosa)和恶臭假单胞菌(P.putida)产生。
[0026]乳杆菌属{Lactobacillus)产生脂肽表面活性肽(surlactin),芽孢杆菌属(Bacillus)产生属于次级代谢产物的fengycin样和表面活性肽样家族的脂肽。另一种脂肽自金黄短杆菌分离。嗜热链球菌是又一未鉴定的糖脂的生产者，该糖脂含有大量的氮(Rodrigues, Colloids & Surfaces B: Biointerfaces (2006) 53: 105-112)。显不针对与生物膜有关的微生物的活性的生物表面活性剂的其它已知生产者为产生鼠李糖脂的铜绿假单胞菌和产生脂肽的恶臭假单胞菌。尚未鉴定出由缓症链球菌{Streptococcusmi Hs)产生的含氮生物表面活性剂。乳酸乳球菌产生低分子量[467 Da]生物表面活性剂，其由甲基-2-0-甲基-β-d-木吡喃糖苷与十八烧酸组成。(Saravanakumari & Mani,Bioresour Technol (2010) 101:8851-8854)。
[0027]Rahman等人(Biotechnology (2008):360-70)提供了不同类别的已知生物表面活性剂的全面综述，其显示这些化合物相对于合成化合物的极大优势，例如毒性更低、生物降解能力更强、环境相容性更佳及其耐受极端温度、PH和盐度的能力。然而所报道的生产困难教导了工业应用的局限性为在工业过程中收率相对低、发酵成本高和分离程序难。提议使用工业废料作为加工介质进行大规模生物表面活性剂的可接受的经济生产。
[0028]如本领域普遍所理解的，术语“保存”、“防腐剂”和“防腐”的定义不提保持供待保存的物质免于腐坏、分解或褪色的标准时间期限。“防腐”的时间期限可极大地变化，这取决于主题物质。在没有规定时间期限的情况下，难以或不可能推断组合物用作“防腐剂”所必需的时间期限。
[0029]总之，许多防腐剂和防腐方法具有不需要的副作用，例如毒性、变应原性、致癌性、不时形成的抗性，和/或在相对于用合成产品或具有负面健康印象的其它产品防腐优选自然防腐的情况下通常不被消费者接受。
[0030]因此，存在对有效的、相对便宜的、无毒的、天然来源的防腐剂组合物的巨大需求，其避免了所提及的缺点并且能够降低多种易腐食物、饮料、化妆品和其它消费品中的微生物污染和伴发腐坏，但不会可感知地改变产品的味道、颜色、气味和功能。
[0031]发明概沭
出人意外地，从匙盖假花耳Wacryopinax spathularia)菌株和属于花耳科(Dacrymycetaceae)的其它真菌菌株中发现并分离出新的化合物，并针对这些化合物以及相同类别的化合物，发现了它们具有新的有益性质。下面更详细地描述该化合物。
[0032]本领域不知道式I化合物类(就它们不是新的以及它们是新的而言)的任何防腐
坏/腐烂活性。[0033]非常出人意外地由此发现，这些化合物针对是造成口服消费品(例如食品和饮料)或美容组合物变坏或变质的原因的微生物显示强的抑制活性。例如，与所产生的已分离到纯净的糖脂复合物(糖脂混合物)相应的单一组分相比，本发明的假花耳属Wacryopinax)的提取物可显示更宽的活性范围。这类多组分混合物显示针对多种重要的腐坏微生物(包括例如接合酵母属和芽孢杆菌)的显著的长期活性。
[0034]更出人意外的是，本发明所用微生物允许以成本效益的生产过程生产大量的式I化合物。
[0035]例如，它们能够降低微生物污染物的生长，微生物污染物例如细菌、酵母、霉菌和其它微生物及其孢子，尤其耐受温度的(例如嗜热或耐热)微生物污染物或嗜酸微生物污染物，例如耐受引起食物、饮料、化妆品和其它材料腐坏的较低pH值的微生物。
[0036]糖脂不显示独特的味道或令人不愉快的口感，因此本申请涉及糖脂在与人的口腔接触的材料中的用途。本申请还涉及可用于口服消费组合物(例如食物和饮料)而又不会赋予异味的抗微生物成分的协同组合。
[0037]甚至出人意外地发现，只使用葡萄糖或右旋糖作为碳源和少量酵母提取物的简单培养基的使用便可优于文献中已知的典型的复杂培养基。然而，也包括使用其它培养基或生长基质。此外还发现，这种培养基特别支持在相对低的生物量生产下的高生产率，其有利于粗制糖脂产物的下游加工，允许通过沉淀容易地从培养液中回收。
[0038]本发明的糖脂可显示具有宽的抗微生物范围，并可作为添加剂掺入各种材料中作为防腐剂或具有防腐活性的作用剂，基于这种抗微生物活性尤其作为美容添加剂和/或食物添加剂和/或饮料添加剂。
[0039]虽然不清楚糖脂的作用机制，但是在无意是指其性质的全面性和结论性定义的情况下，仍可将这些化合物视为生物表面活性剂，并且这些化合物还会影响微生物的细胞膜。其它已知的生物表面活性剂为由Mukherjee (载于“Biosurfactins”，R Sen编辑，Springer, 2010,第 4 章，“Microbial Surfactants and Their PotentialApplications (微生物表面活性剂及其可能的应用)”)所引述的鼠李糖脂、槐糖脂、脂肽样chlamydocin、表面活性肽、lichenysin G等。所引用的生物表面活性剂不同于本发明的式I化合物。虽然Mukherjee列举了命名为糖脂的化合物，但是这些化合物的结构明显不同于本发明化合物的结构:
按照本发明，可用的化合物的特征一般在于 具有至少20个碳原子的长链脂肪酸；
非与酸基连接的糖部分: α羟基；
和至少一个另外的羟基，其在脂肪酸碳链“中心”，与α位和糖基取代基两者明显相分隔。
[0040]本领域尤其不清楚下文所示的式I化合物，因此它是新的，所述化合物在其糖部分被乙酸以外的其它酸酯化，特别被异戊酸酯化。
[0041]发明详沭
在第一个实施方案中，本发明涉及式I化合物或者两种或更多种这类式I化合物的混合物和/或其生理学上、尤其药学上或营养食品上或美容上可接受的盐或其酯，其本身或呈组合物形式，作为具有防腐或抗微生物性质的作用剂的用途，
【权利要求】
1.下式I的化合物或者两种或更多种所述式I化合物的混合物和/或其生理学上、尤其药学上或营养食品上或美容上可接受的盐或酯作为具有防腐或抗微生物性质的作用剂的用途，所述用途包括将作用剂加入材料中，其中所述材料优选选自化妆品、食物、饮料、药物、医疗装置和活性包装材料:
2.权利要求1的用途，向其中加入作用剂的所述材料是化妆品、食物或饮料。
3.权利要求1或权利要求2的用途，其中在所述式I化合物中，m为3-5，η为2_5，ο为O或1, ρ为5-15,且R为以下子式的部分
4.权利要求1的用途，其中所述式I化合物或式I化合物的混合物包含、优选为至少一种选自具有下式的化合物的化合物或其生理学上可接受的盐:
5.权利要求1的用途，其中加入至少一种其它的防腐剂。
6.权利要求1的用途，其中所述式I的一种或多种化合物、其生理学上可接受的盐和/或其酯以得自天然来源的提取物的形式加入或获自所述提取物。
7.权利要求6的用途，其中所述提取物的来源是匙盖假花耳{Dacryopinaxspathularia)菌株 FU50088、根韧钉耳 ipitiola radicata)菌株 MUCL 53180、裸韧钉耳φ?tiola nuda)菌株 CBS 173.60 或白毛黄胶杯耳(Femsjonia luteo~alba) (= Ditiolapezizaeformis)菌株 MUCL 53500。
8.权利要求1所示的或权利要求3、4、6或7中任一项限定的式I化合物或式I化合物的混合物、其生理学上可接受的盐和/或酯，其中所述部分R带有至少一个被具有3个或更多个碳原子的酸酯化的羟基。
9.权利要求1所示的式I化合物和/或其生理学上可接受的盐和/或酯，所述化合物选自下表所示的化合物:
10.一种防腐组合物或抗微生物组合物，其包含单独的作为活性剂的权利要求1、3、4或6-9中任一项所示或限定的式I化合物或式I化合物的混合物、其生理学上可接受的盐和/或其酯，或包含所述活性剂与另一种添加剂例如载体材料，其中所述防腐组合物尤其用于化妆品、食物、饮料、药物、医疗装置或活性包装材料。
11.权利要求10的组合物，其是饮料的前体，尤其是浓缩液、糖浆或粉末。
12.—种提取物,其包含权利要求1、3、4或6-9中任一项所不或限定的一种或多种式I化合物、其生理学上可接受的盐和/或其酯。
13.一种提高材料的微生物稳定性的方法，所述方法包括将权利要求1、3、4或6-9中任一项所示或限定的一种或多种式I化合物、其生理学上可接受的盐和/或其酯加入到材料中，优选加入到选自化妆品、食物、饮料、药物、医疗装置和活性包装材料的材料中。
14.一种材料，其包含呈权利要求1、3、4或6-9中任一项限定的式I化合物或式I化合物的混合物、其生理学上可接受的盐和/或其酯形式的添加剂，所述添加剂作为包衣或在包衣内和/或作为掺合物，所述材料优选为化妆品、食物、饮料、药物、医疗装置或活性包装材料。
15.权利要求14的材料，其中所述饮料选自水、调味水、强化水、调味饮料、碳酸水、汁液、可乐饮料、加少量莱姆酸橙的柠檬汽水、姜汁汽水、以黄樟油、冬青油为香料的无醇饮料(其以软饮料的方式充有碳酸气)、糖浆、膳食饮料、碳酸软饮料、果汁、提供果汁味道并含有大于0%果汁但小于100%果汁的其它含水果饮料、水果味饮料、蔬菜汁、提供上述蔬菜汁中任一种的味道并含有大于0%蔬菜汁但小于100%蔬菜汁的含蔬菜饮料、等渗饮料、非等渗饮料、含果汁软饮料、咖啡、茶、由茶浓缩液、提取物或粉末制备的茶饮料、可饮用乳制品、热巧克力、巧克力粉/混合物、可饮用大豆制品、非乳品乳、酒精饮料、水果冰沙、horchata、运动饮料、能量饮料、保健饮料(health drink)、健康饮料(wellness drink)、搅合饮料、蛋白饮料、可饮用大豆酸奶、低酸饮料、酸化饮料、花蜜、滋补剂(tonic)、冷冻的充碳酸气饮料、冷冻的非充碳酸气饮料、液体膳食代用品、婴儿制剂及其组合或混合物；或者所述材料是选自以下的化妆品:皮肤用乳膏、乳液、洗液、凝胶或油；面膜、上色基底、化妆粉、浴后粉、卫生粉、香皂、祛臭皂、香水、花露水、古龙香水、浴用制品或淋浴用制品；脱毛剂；祛臭剂、防汗剂、护发产品；定型产品；清洁产品；调理产品；美发产品；剃须产品；用于从脸部和眼部化妆和卸妆的产品、预期施用于唇的产品、用于牙和/或口腔护理的产品；用于护甲和/或美甲的产品、外阴卫生用产品、日光浴产品、无阳光晒黑产品、皮肤美白产品、抗皱产品、阴道塞、卫生巾、尿布和纸巾`。
【文档编号】A01N43/14GK103874411SQ201280039046
【公开日】2014年6月18日 申请日期:2012年6月6日 优先权日:2011年6月10日
【发明者】M.施塔德勒, J.比策, B.克普克, K.赖因哈特, J.莫尔登豪尔 申请人:Imd自然解决方案有限责任公司