专利名称：一种蜜环菌液体菌种的培养方法
技术领域：
本发明属于菌种培养技术领域，特别是涉及一种蜜环菌液体菌株的培养方法。
背景技术：
蜜环菌(Armlllaria mellea)属担子菌亚门，伞菌目，白蘑科,蜜环菌属，是一种夏、秋季发生，能兼性寄生，药食兼用的真菌。蜜环菌具有抗炎、抗肿瘤、抗辐射、促进造血机能、降低血糖、增强免疫力、提高记忆力等作用，还可治疗由不同病因引起的眩晕综合症、血管性头疼等常见病、多发病，并具有一定的抑制肿瘤生长等药理和保健功能。目前已开发出多种与密环菌有关的药品和保健品，如:蜜环菌片、脑心舒口服液、蜜环菌浸膏、蜜环菌糖浆等。公知的蜜环菌培养方法有固态发酵和液体深层发酵。固态发酵周期过长、容易染菌、药效成分分离困难；目前，液体深层发酵普遍受欢迎，但液体发酵存在发酵培养的培养基成本较高、种子菌质量不高，大小不一、发酵产物较低。
发明内容
针对上述问题，本发明提供一种蜜环菌液体菌株的培养方法，能有效地提高菌株的培养效率和质量。为解决上述问题，本发明采取的技术方案为:一种蜜环菌液体菌种的培养方法，该方法包括以下步骤:I)制备母种:制作试管培养基并进行高压灭菌30_45min,冷却后在无菌环境下向试管培养基中接入豌豆粒大小的菌种块，置于23-28°C环境中避光培养6-12天；2)摇瓶培养:制备摇瓶培养基，然后将步骤I)中培养的母种进行碎化处理，在无菌环境下接种到摇瓶中，将接好种的摇瓶放在25-28°C，震荡频率500-650 / min的电磁摇床上培养4-7天；3)发酵罐培养:对发酵罐进行空罐灭菌，然后在发酵罐中配置发酵罐液体培养基，在液体培养基的表层或浅表层设置起支架作用的支撑物，并进行灭菌处理；将步骤2)中摇瓶培养的菌种流入发酵罐中，完成发酵罐接种；打开发酵罐的气泵，设置通气量为015-0.35L/min，温度控制为25-28 °C，使菌种在发酵罐中培养5_9天。进一步，所述步骤I)中的试管培养基为每升培养含:玉米粉60_80g，黄豆粉10-15g，蔗糖(白糖)10-18g，PH 值为 5.5-6.5。进一步，所述步骤2)中的摇瓶培养基和步骤3)中的发酵罐液体培养基均为为每升培养基含:大米面15-25g，白糖12-20g，酵母膏0.5_2g，蛋白胨3_9g，磷酸二氢钾1.0-2.5g，硫酸镁 0.5-1.25g，PH 值为 5.5-6.5。进一步，所述步骤3)中的起支撑作用的支撑物为:不锈钢丝网或者海绵。本发明的有益效果为:本发明利用玉米粉、大豆粉、大米粉和食用蔗糖为培养基，原料为成本低、易获得的农副产品，不仅降低了生产成本，而且还提高了农副产品利用价值；同时，对种子菌进行碎化处理，可使菌球变小并大小一致，提高了种子菌的质量，加快了菌球生长速度，使蜜环菌深层液体发酵生长迅速、产量大幅提高。且本发明中采用静置悬浮培养，菌株自培养基中吸取营养，自空气中吸收氧份，菌丝体向下方生长直至长成粗壮的菌索并充满整个发酵罐。所得到的菌索以干重法计，蜜环菌可达35-40g/L。相对于固态发酵或普通的液体深层发酵，操作简单，分离方便，周期短，菌索产量高、活性多糖产率也高且稳定。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步描述，在此发明的示意性实施例以及说明用来解释本发明，但并不作为对本发明的限定。实施例1一种蜜环菌液体菌种的培养方法，该方法包括以下步骤:I)制备母种:制作试管培养基，玉米粉75g，黄豆粉12g，蔗糖(白糖)13g，PH值为
6.0。并进行高压灭菌40min，冷却后在无菌环境下向试管培养基中接入豌豆粒大小的菌种块，置于25°C环境中避光培养10天；2)摇瓶培养:制备摇瓶培养基，大米面20g,白糖15g,酵母膏Ig,蛋白胨5g,磷酸二氢钾2.0g，硫酸镁lg，PH值为6.5。然后将步骤I)中培养的母种进行碎化处理，在无菌环境下接种到摇瓶中，将接好种的摇瓶放在25°C，震荡频率500 / min的电磁摇床上培养4天;3)发酵罐培养:对发酵罐进行空罐灭菌，然后在发酵罐中配置发酵罐液体培养基，大米面20g，白糖15g，酵母膏lg，蛋白胨5g，磷酸二氢钾2.0g，硫酸镁lg，PH值为6.5。在液体培养基的表层设置不锈钢丝网，并进行灭菌处理；将步骤2)中摇瓶培养的菌种流入发酵罐中，完成发酵罐接种；打开发酵罐的气泵，设置通气量为0.25L/min，温度控制为27°C，使菌种在发酵罐中培养7天，完成液体菌种的培养。实施例2一种蜜环菌液体菌种的培养方法，该方法包括以下步骤:I)制备母种:制作试管培养基，玉米粉60g，黄豆粉10g，蔗糖(白糖)10g，PH值为
5.5。并进行高压灭菌30min，冷却后在无菌环境下向试管培养基中接入豌豆粒大小的菌种块，置于23°C环境中避光培养6天；2)摇瓶培养:制备摇瓶培养基，大米面15g,白糖12g,酵母膏0.5g,蛋白胨3g,磷酸二氢钾1.0g，硫酸镁0.5g，PH值为5.5。然后将步骤I)中培养的母种进行碎化处理，在无菌环境下接种到摇瓶中，将接好种的摇瓶放在26°C，震荡频率600 / min的电磁摇床上培养5天；发酵罐培养:对发酵罐进行空罐灭菌，然后在发酵罐中配置发酵罐液体培养基，大米面20g，白糖15g，酵母膏lg，蛋白胨5g，磷酸二氢钾2.0g，硫酸镁lg，PH值为6.5。在液体培养基的表层设置不锈钢丝网，并进行灭菌处理；将步骤2)中摇瓶培养的菌种流入发酵罐中，完成发酵罐接种；打开发酵罐的气泵，设置通气量为0.15L/min，温度控制为25°C，使菌种在发酵罐中培养5天，完成液体菌种的培养。实施例3
一种蜜环菌液体菌种的培养方法，该方法包括以下步骤:U制备母种:制作试管培养基，玉米粉80g，黄豆粉15g，蔗糖(白糖)18g，PH值为
6.5。并进行高压灭菌45min，冷却后在无菌环境下向试管培养基中接入豌豆粒大小的菌种块，置于28°C环境中避光培养12天；2)摇瓶培养:制备摇瓶培养基，大米面25g，白糖20g，酵母膏2g，蛋白胨9g，磷酸二氢钾2.5g，硫酸镁1.25g，PH值为6.5。然后将步骤I)中培养的母种进行碎化处理，在无菌环境下接种到摇瓶中，将接好种的摇瓶放在28°C，震荡频率650 / min的电磁摇床上培养7天；3)发酵罐培养:对发酵罐进行空罐灭菌，然后在发酵罐中配置发酵罐液体培养基，大米面20g，白糖15g，酵母膏lg，蛋白胨5g，磷酸二氢钾2.0g，硫酸镁lg，PH值为6.5。在液体培养基的表层设置海绵，并进行灭菌处理；将步骤2)中摇瓶培养的菌种流入发酵罐中，完成发酵罐接种；打开发酵罐的气泵，设置通气量为0.35L/min，温度控制为28°C，使菌种在发酵罐中培养9天，完成液体菌种的培养。本发明的技术方案不限于上述具体实施例的限制，凡是根据本发明的技术方案做出的技术变形，均落入 本发明的保护范围之内。
权利要求
1.一种蜜环菌液体菌种的培养方法，其特征在于，所述该方法包括以下步骤: 1)制备母种:制作试管培养基并进行高压灭菌30-45min,冷却后在无菌环境下向试管培养基中接入豌豆粒大小的菌种块，置于23-28°C环境中避光培养6-12天； 2)摇瓶培养:制备摇瓶培养基，然后将步骤I)中培养的母种进行碎化处理，在无菌环境下接种到摇瓶中，将接好种的摇瓶放在25-28°C，震荡频率500-650 / min的电磁摇床上培养4-7天； 3)发酵罐培养:对发酵罐进行空罐灭菌，然后在发酵罐中配置发酵罐液体培养基，在液体培养基的表层或浅表层设置起支架作用的支撑物，并进行灭菌处理；将步骤2)中摇瓶培养的菌种流入发酵罐中，完成发酵罐接种；打开发酵罐的气泵，设置通气量为015-0.35L/min，温度控制为25-28 °C，使菌种在发酵罐中培养5_9天。
2.根据权利要求1所述的蜜环菌液体菌种的培养方法，其特征在于:所述步骤I)中的试管培养基为每升培养含:玉米粉60-80g，黄豆粉10-15g，蔗糖(白糖)10-18g，PH值为5.5-6.5。
3.根据权利要求1所述的蜜环菌液体菌种的培养方法，其特征在于:所述步骤2)中的摇瓶培养基和步骤3)中的发酵罐液体培养基均为每升培养基含:大米面15-25g，白糖12-20g，酵母膏0.5-2g，蛋白胨3-9g，磷酸二氢钾1.0-2.5g，硫酸镁0.5-1.25g，PH值为5.5-6.5。
4.根据权利要求1所述的蜜环菌液体菌种的培养方法，其特征在于:所述步骤3)中的起支撑作用的支撑物为 :不锈钢丝网或者海绵。
全文摘要
本发明公开一种蜜环菌液体菌种的培养方法，包括制备母种、摇瓶培养和发酵罐培养，本发明原料成本低、易获得，且对种子菌进行碎化处理，可使菌球变小并大小一致，提高了种子菌的质量，加快了菌球生长速度，使蜜环菌深层液体发酵生长迅速、产量大幅提高。本发明中采用静置悬浮培养，菌株自培养基中吸取营养，自空气中吸收氧份，菌丝体向下方生长直至长成粗壮的菌索并充满整个发酵罐。所得到的菌索以干重法计，蜜环菌可达35-40g/L。相对于固态发酵或普通的液体深层发酵，操作简单，分离方便，周期短，菌索产量高、活性多糖产率也高且稳定。
文档编号C05F11/00GK103070012SQ201310009898
公开日2013年5月1日 申请日期2013年1月10日 优先权日2013年1月10日
发明者肖永东 申请人:关岭自治县丰硕食用菌农民专业合作社