一种金针菇液体菌种转固体再液化的制种方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种金针菇液体菌种转固体再液化的制种方法，属于金针菇栽培技术领域。
【背景技术】
[0002]目前，食用菌企业中，菌种的使用主要分为固体菌种和液体菌种。其中，液体菌种具有生产周期短、菌龄一致、操作简便、出菇整齐等众多优点，适合金针菇工厂化标准生产，但是也具有所需成本设备投入大，技术要求高，风险也多等缺点。而固体菌种虽然有诸多弊端，但是成本低、制种工艺简单、菌种稳定性高，尤其在菌种提纯、复壮、出菇试验与菌种保藏、运输方面亦有不可替代的优势。如何将两者的优势有机的结合而避免各自的不利之处，是食用菌实际生产过程中需要解决的问题。
【发明内容】
[0003]针对上述现存的技术问题，本发明提供一种金针菇液体菌种转固体再液化的制种方法，通过综合液体菌种和固体菌种两者的优点，以达到缩短周期、减少投入的同时，简化生产工艺、降低成本、减少杂菌污染率的目的。
[0004]为实现上述目的，本发明提供一种金针菇液体菌种转固体再液化的制种方法，包括如下具体步骤:
一、液体菌种培养:
(1-1)制作液体培养基??每1000ml液体三角瓶培养液所需配料为:白糖20g、豆奶宝
3.3g、磷酸二氢钾0.66g、硫酸镁0.66g，称取各种原料后混合均勾；将配好的料装入1000ml的三角瓶中，并充分搅拌溶解，放入一个转子，然后用纯水定容至600ml，且要求PH值在6.2至6.5 ;将装好料的三角瓶塞上棉塞，并在棉塞外套上锡箔纸，确保锡箔纸完全包裹住棉塞，然后放于高压灭菌锅中，于121°C条件下灭菌60min后取出；将取出的三角瓶在超净台中冷却至18°C至22°C即可准备接种；
(1-2)接种:将接种针深入平板培养基，刮掉斜面表面的气生菌丝，再用直径10mm的打孔器沿着菌丝蔓延生长的边缘均匀打孔一圈；盖上平板盖备；将冷却后的液体三角瓶瓶口靠近酒精灯火焰，并取下锡箔纸和棉塞，快速用接种针分别从平板培养基内选取4颗菌种，放置过程中接种针不要触碰三角瓶内壁；操作完成后分别将棉塞和锡箔纸在火焰上过火后再把三角瓶塞紧包好；
(1-3)培养:重复步骤(1-2)操作直至接种结束，每个平板可转接2至3个三角瓶，然后将三角瓶放入摇床中震荡培养；培养温度为20度左右，振幅为250r/min ;培养至第四天取出三角瓶，将液体菌种打碎20s，然后放回继续培养；培养至第9天取出三角瓶，将液体菌种打碎lOmin，即可用于制作原种；
二、固体菌种培养:
(2-1)配料??每1100ml透明玻璃菌种瓶所需培养料为:纸浆颗粒280g、米糠100g、水310g ;把水倒入米糠中搅拌成糊状后，倒入纸浆颗粒搅拌均匀，然后等待装料；
(2-2)装料:将上述配好的料装入1100ml透明玻璃菌种瓶中，装料高度为瓶口以下
2-3cm，中央打一个直径1-1.5cm、且直至瓶底的孔洞，采用透气瓶盖盖住菌种瓶并包上牛皮纸；
(2-3)灭菌:将制作好的菌种瓶放于灭菌锅中，于121°C条件下灭菌90min ;
(2-4)接种:待菌种瓶及瓶中的培养料降至室温以后进行接种，每个液体菌种瓶可以转接16个左右的固体培养瓶；
(2-5)培养:菌种瓶接种好以后放于恒温室中进行培养，培养温度为18-20°C，避光培养，培养湿度为55-70，培养24-26天，原种菌种瓶中长满菌丝即可；
三、固体菌种液化:
将固体菌种瓶放置于接种机上打碎，在固体储存罐内液化、稀释，菌种稀释后储存在菌种罐内，连续间歇性提供给接种机，再接种到液体菌种瓶内培养。
[0005]相比于现有技术，本发明的制种方法具有如下的优点:
A、液体菌种转固体培养:将三角瓶中培养的液体菌种打碎后，均匀的接种到灭菌冷却后的固体培养基质中，进行培养发菌，省去了一级种、二级种的培养过程，从而大大缩短了生产周期。
[0006]B、固体培养转液体菌种:用特殊纸浆团代替传统的木肩，将干纸浆预湿后，再和米糠等营养物质混合装入培养瓶，经过高压灭菌和培养，制作出优质的固体菌种。并在培养过程中通过检查和试验，再通过出菇试验，确定菌种的品质，将最优秀的无杂菌的菌种用于栽培接种。接种前用微酸性电解水将液体接种机清洗一遍，然后用设置在接种室里的设备，将经过确认后的优质固体菌种直接液化、稀释、存积、调制后可连续接种，每次接种后用无菌水清洗一次设备，再用蒸汽将液体菌种机的导管、储菌罐、喷嘴等杀菌一次即可，由于不在液化设备的罐内进行菌丝培养，而是在菌种瓶内培养，所以不需要供氧处理，节省设备投入，减少故障率。
[0007]综上所述，本发明这种新菌种制作方式，抛弃了液体菌种采用的发酵罐的繁琐的生产模式。采用纸浆作为固体培养原料，因纸浆细嫩，从而保持了木生菌类需要木质素的特点，制成颗粒状，使菌丝在培养容器内具有一定的间隙度，满足菌丝蔓延过程对氧气的需求。并且，菌种制作简单，杂菌感染率低，接种前可以再次确认菌种品质，安全可靠。
【具体实施方式】
[0008]下面结合实施例对本发明作进一步说明。
[0009]本发明方法第一步:液体菌种培养，具体步骤如下。
[0010](1-1)制作液体培养基??每1000ml液体三角瓶培养液所需配料为:白糖20g、豆奶宝3.3g、磷酸二氢钾0.66g、硫酸镁0.66g，称取各种原料后混合均匀；将配好的料装入1000ml的三角瓶中，并充分搅拌溶解，放入一个转子，然后用纯水定容至600ml，且要求PH值在6.2至6.5 ;将装好料的三角瓶塞上棉塞，并在棉塞外套上锡箔纸，确保锡箔纸完全包裹住棉塞，然后放于高压灭菌锅中，于121°C条件下灭菌60min后取出；将取出的三角瓶在超净台中冷却至18°C至22°C即可准备接种；
(1-2)接种:将接种针深入平板培养基，刮掉斜面表面的气生菌丝，再用直径10mm的打孔器沿着菌丝蔓延生长的边缘均匀打孔一圈；盖上平板盖备；将冷却后的液体三角瓶瓶口靠近酒精灯火焰，并取下锡箔纸和棉塞，快速用接种针分别从平板培养