一种茶树菇工厂化栽培液体发酵菌种的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及食用菌液体菌种制备领域，具体涉及一种茶树菇工厂化栽培液体发酵菌种的制备方法。
[0002]
【背景技术】
[0003]茶树菇营养丰富、味道鲜美，菌柄脆嫩，口感极好，是知名的食用菌，而且具有很高的药用价值，被人们称为“中华神菇”，近年来市场需求量迅速增加。茶树菇人工驯化和栽培成功的时间很短，虽然近几年人工栽培的产量有较大增长，但是由于其采收周期长，工艺相对繁琐，目前仍处于初级的袋式栽培阶段，受季节的影响很大，没有实现大批量的工厂化栽培，而且菌种也还是传统的固体菌种，生产效率很低。传统的固体菌种一般生产方式是:按照配方制备菌种培养基，将培养基装入菌种瓶，灭菌后接入菌种，培养30?40天左右菌种长好，将固体菌种挖成碎块，手工操作接入栽培袋培养，菌种培养时间长，每个菌种瓶最多只能接种几十个栽培袋，需制备大量的菌种瓶，而且接种后栽培袋菌丝萌发点少，萌发速度慢，容易发生杂菌虫害，培养周期长，工厂化栽培很难实现。
[0004]目前，食用菌产业已进入快速发展时期，实现周年性、规模化生产已是主流趋势，传统的固体菌种生产方式将逐渐向液体菌种过渡。液体菌种因其纯度高、活力强、萌发快，将在食用菌生产中得到更加广泛的推广和应用。目前茶树菇工厂化栽培液体菌种研究方面仍是空白。基于以上原因，开发一种工艺流程简单、周期较短、便于接种、能够进行机械化操作的茶树菇液体菌种的制备方法已是势在必行。
[0005]
【发明内容】
[0006]针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种茶树菇工厂化栽培液体发酵菌种的制备方法，该制备方法简单易行，所得液体菌种具有纯度高、活力强、萌发快、生长周期短、出菇整齐、接种方便、便于管理、适合工厂化生产。
[0007]为解决现有技术问题，本发明采取的技术方案为:
一种茶树菇工厂化栽培液体发酵菌种的制备方法，包括以下步骤:先将茶树菇固体菌种活化，待气生菌丝长到离原接种块2?3cm时，取菌种块接到盛有液体培养基的摇瓶中，振荡培养至菌丝球出现后，再将液体菌种接至发酵罐内发酵培养基中，通入洁净空气在20?25°C培养8?10天得工厂化栽培的茶树菇液体发酵菌种。
[0008]作为制备方法优选的是，所述液体培养基的组份为:小麦粉10?20g，白砂糖10?20g，酵母粉2?5g，硫酸镁I?2g，磷酸二氢钾I?2g，纯化水1000mL，pH5.8?6.0。
[0009]作为制备方法优选的是，所述发酵罐内液体培养基组份为:小麦粉10?20g，白砂糖10?20g，酵母粉2?5g，硫酸镁I?2g，磷酸二氢钾I?2g，消泡剂0.05?0.1OmL,纯化水 100mL, pH5.8 ?6.0。
[0010]作为制备方法优选的是，所述振荡培养温度为20?25°C、转速130?150rpm。
[0011]作为制备方法优选的是，所述洁净空气为干燥的洁净空气。
[0012]作为制备方法优选的是，所述洁净空气的压力在0.05?0.20MPa。
[0013]
有益效果
与现有技术相比，本发明制备方法简单，生产周期短，便于接种及机械化操作，另外本发明所得的液体发酵菌种纯度高，活力强，萌发快，生长周期短，出菇整齐、接种方便、便于管理、适合工厂化生产等优势，既能保证栽培种的萌发点数量，又能大幅度缩短制种时间。本发明可在食用菌行业大面积推广应用。
[0014]
【附图说明】
[0015]图1为茶树菇液体发酵菌种制备及工厂化栽培应用的工艺流程图。
[0016]
【具体实施方式】
[0017]下面结合实施例对本发明作进一步描述。以下实施例只是用于更加清楚地说明本发明的性能，而不能仅局限于下面的实施例。
[0018]实施例1 液体发酵菌种制备
取得茶树菇固体菌种，活化扩接至试管(试管内培养基为固体PDA培养基:马铃薯(去皮)200g，葡萄糖20g，琼脂20g，纯化水1000mL，pH自然)中，放在25°C的生化培养箱中进行培养，连续继代几次，取得稳定的试管种；将稳定的试管菌种转接至培养皿(培养基为固体PDA配方:马铃薯(去皮)200g，葡萄糖20g，琼脂20g，纯化水1000mL，pH自然)中进行活化，放在25°C的生化培养箱中进行培养，待气生菌丝长至培养皿边缘即可使用；用打孔器将已长好的培养皿取接种块转接至含液体培养基(小麦粉10g，白砂糖10g，酵母粉2g，硫酸镁lg，磷酸二氢钾lg，纯化水1000mL，pH5.8?6.0)的三角瓶中，置于25°C，150rpm的摇床中进行恒温振荡培养10天；三角瓶中的菌丝长成菌丝球时将液体菌种接至发酵罐中发酵培养基中培养(液体培养基配方为:小麦粉10g，白砂糖10g，酵母粉2g，硫酸镁lg，磷酸二氢钾lg，消泡剂0.10mL，纯化水1000mL，pH5.8?6.0)，向发酵罐通入压力为0.05MPa温度恒定的干燥洁净空气，发酵罐在22°C条件下培养8天即可获得适合工厂化栽培的茶树菇液体发酵菌种。
[0019]工厂化栽培实施
栽培培养基:根据生产规定的每批次培养基重量要求，按照棉籽壳49份，玉米芯24份，麸皮15份，玉米粉5份，甜菜渣5份，贝壳粉2份的比例称取原料。
[0020]加水、搅拌:将各种原材料依次投入搅拌机，先干拌15分钟，再加水搅拌，直至培养基中的各种原料混合均匀，充分吸水，要求培养基的含水率为66%?68%，pH为6.2?
6.8ο
[0021]装瓶、盖瓶盖??每16个聚丙烯塑料栽培瓶为一筐，采用全自动装瓶机将配制好的培养基灌装到栽培瓶中，灌装结束后通过自动打孔机在料面中间和四周一共打5个孔洞到瓶底，要求培养基料面平整，栽培瓶容量1200mL，每瓶的装料量为900g?950g。灌装、打孔完成后，通过自动盖盖机为栽培瓶盖上匹配的瓶盖。
[0022]高压蒸汽灭菌、冷却:将装有栽培瓶的栽培筐放置到周转车上，推入高压蒸汽灭菌器中进行灭菌，121°C维持90min。灭菌结束后，将栽培瓶放入冷却室进行强制冷却，料温降低到室温时进行接种。
[0023]接种
将茶树菇液体发酵菌种通过全自动接种机在层流罩下向栽培瓶中接入液体菌种，每瓶接种量为25?30mL。
[0024]菌丝培养、搔菌
接种结束后，将栽培瓶移入培养室进行菌丝培养，培养环境为:室温20?22°C、空气湿度60%?70%、避光、空气循环良好。培养室采用自动控制系统，将料温控制在22?25°C，空间湿度控制在60%?70%，CO2浓度控制在2000?4000ppm，同时通过高效空气过滤来确保环境清洁度。培养20?25天后菌丝即可长满栽培瓶。
[0025]将长满菌丝的栽培瓶移入搔菌车间，以自动搔菌机进行搔菌处理，去除料面老化的菌丝，同时形成机械刺激，促进茶树菇子实体原基的形成与分化。搔菌结束后在料面喷水10?15mL，使料面保持湿润。
[0026]出菇管理
将栽培瓶移入生育室，在10?26°C的室温、85%?95%的空气湿度、CO2浓度在3000?4000ppm条件下进行催蕾处理，5?7天后料面料面菌丝变成褐色，催蕾结束后，每天适时进行500LuX强度的光照及昼夜温差刺激，并将CO2浓度控制在3000?8000ppm使菇芽生长整齐、一致，10?12天原基明显。
[0027]菇芽长出瓶口 I?2cm时，减少通风量，提高环境的CO2浓度至1000ppm以上，促进茶树菇菌柄的伸长，根据菇整齐度每天适时进行500LUX强度的光照和昼夜温差刺激，对茶树菇进行光抑制和温差刺激，使茶树菇长势一致、出菇整齐、菇丛更大。
[0028]采收
茶树菇菇帽半球状时可进行采收。进入生育室的栽培时间约15?18天。第一潮平均单产为110?120g/瓶。
[0029]采收结束后，清理料面并搔去料面I?2cm栽培料，同时补充水份，加大通风量，培养温度升高至22?25°C，使其菌丝恢复，10?15天出第二潮菇。第二潮平均单产为130?140g/ 瓶。
[0030]每瓶出两潮燕，每瓶产鲜燕240?260g。
[0031]实施例2 液体发酵菌种制备
取得茶树菇固体菌种，活化扩接至试管(试管内培养基为固体PDA培养基:马铃薯(去皮)200g，葡萄糖20g，琼脂20g，纯化水lOOOmL，pH自然)中，放在25°C的生化培养箱中进行培养。连续继代几次，取得稳定的试管种；将稳定的试管菌种转接至培养皿(培养基为固体PDA配方:马铃薯(去皮)200g，葡萄糖20g，琼脂20g，纯化水lOOOmL，pH自然)中进行活化，放在25°C的生化培养箱中进行培养，待气生菌丝长至培养皿边缘即可使用；用打孔器将已长好的培养皿取接种块转接至含液体培养基(麸皮10g，白砂糖10g，蛋白胨2g，硫酸镁lg，磷酸二氢钾lg，纯化水1000mL，pH5.8?6.0)的三角瓶中，置于25°C，150rpm的摇床中进行恒温振荡培养10天；三角瓶中的菌丝长成菌丝球时将液体菌种接至发酵罐中发酵培养(发酵培养基配方为:麸皮10g，白砂糖10g，蛋白胨2g，硫酸镁lg，磷酸二氢钾lg，消泡剂
0.10mL，纯化水1000mL，pH5.8?6.0)，向发酵罐通入压力为0.05MPa温度恒定的干燥洁净空气，发酵罐在22°C条件下培养8天即可获得适合工厂化栽培的茶树菇液体发酵菌种。
[0032]工厂化栽培实施
栽培培养基:根据生产规定的每批次培养基重量要求，按照棉籽壳39份，玉米芯24份，麸皮15份，米糠10份，玉米粉5份，甜菜渣5份，贝壳粉2份的比例称取原料。
[0033]加水、搅拌:将各种原材料依次投入搅拌机，先干拌15分钟，再加水搅拌，直至培养基中的各种原料混合均匀，充