一种灵芝菌种提纯复壮培养方法及其培养基的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于真菌栽培领域，具体设及一种灵芝菌种提纯复壮培养方法及其培养 基。
【背景技术】
[0002] 灵芝（ganodermalucidum)，是中药材宝库中的珍品，素有"仙草"之誉，是中医药 事业的源头，作为中医临床原材料，灵芝药用已经有3000多年的历史。灵芝在我国人工栽 培已有30多年的历史，栽培面积广、品种多，灵芝品种的质量直接影响其中药产品的品质 和疗效。现代药理学研究和临床疗效证明灵芝的药用价值包括抗肿瘤抗放射功能、抗屯、血 管系统疾病、提高免疫力、保肝解毒、调节神经系统、调节血糖等。
[0003] 灵芝菌种是灵芝生产的前提和关键，灵芝的人工栽培菌种质量的好坏直接影响到 栽培的成败、产量的高低W及品质的好坏。生产优良的菌种是灵芝栽培中的一个极其重要 的环节，但长期W来，由于科技水平的限制，灵芝菌种在栽培过程中极易发生退化，表现为 菌丝生长弱，生命力不强，抗逆性差，病虫害严重。传统的灵芝菌种培养基配方为：马铃馨 (200g)，葡萄糖（20g)，琼脂粉（15g)，硫酸儀（1. 5g)，憐酸二氨钟（3g)，蒸馈水lOOOmL。灵 芝菌种长期使用运种培养基会导致菌丝活力减弱，产量降低，只有不断的更换新培养基，进 行提纯复壮，才能提高菌丝的活力。
【发明内容】
[0004] 针对现有的传统灵芝菌种培养基质导致的灵芝菌种活性降低等问题，本发明的目 的是要提供一种新的灵芝菌种复壮培养基及其培养方法，该培养基能解决灵芝大规模生产 甚至工厂化栽培中出现的菌种抗逆性降低、活性不足、生命力差、产量低等问题。
[0005] 为实现上述目标，本发明提供了灵芝菌丝提纯培养基和灵芝菌种复壮培养基两种 培养基。
[0006] 其中，灵芝菌丝提纯培养基（即1号培养基）含有下述配比的原料：±豆 150-400g，葡萄糖10-30g，琼脂粉10-25g，憐酸二氨钟l-5g，硫酸儀0. 5-3g，蒸馈水适量。
[0007] 进一步优选，灵芝菌丝提纯培养基含有下述配比的原料：±豆200g，葡萄糖20g， 琼脂粉15g，憐酸二氨钟3g，硫酸儀1. 5g，蒸馈水适量。
[0008] 进一步的，还可W在灵芝菌丝提纯培养基中玉米粉，教皮，栋树树皮、青冈树树皮 中至少一种，灵芝菌丝提纯培养基中配比的原料：±豆150-400g，葡萄糖10-30g，琼脂粉 10-25g，憐酸二氨钟l-5g，硫酸儀0. 5-3g，玉米粉5-25g，教皮25-75g，栋树树皮、青冈树树 皮中至少一种50-200g，蒸馈水适量。
[0009] 进一步的优选，灵芝菌丝提纯培养基中配比的原料：±豆200g，葡萄糖20g，琼脂 粉15g，憐酸二氨钟3g，硫酸儀1. 5g，玉米粉lOg，教皮50g，栋树树皮、青冈树树皮中至少一 种lOOg，蒸馈水适量。
[0010] 其中，灵芝菌种复壮培养基（即2号培养基）含有下述配比的原料：±豆 150-400g，葡萄糖10-30g，琼脂粉10-25g，憐酸二氨钟l-5g，硫酸儀0. 5-3g，灵芝子实体 30-70g，蒸馈水适量。
[0011] 进一步优选，灵芝菌种复壮培养基含有下述配比的原料：±豆200g，葡萄糖20g， 琼脂粉15g，憐酸二氨钟3g，硫酸儀1. 5g，灵芝子实体50g，蒸馈水适量。
[0012] 进一步的，还可W在灵芝菌种复壮培养基中玉米粉，教皮，栋树树皮、青冈树树皮 中至少一种，灵芝菌种复壮培养基中配比的原料：±豆150-400g，葡萄糖10-30g，琼脂粉 10-25g，憐酸二氨钟l-5g，硫酸儀0. 5-3g，玉米粉5-25g，教皮25-75g，栋树树皮、青冈树树 皮中至少一种50-200g，灵芝子实体30-70g，蒸馈水适量。
[0013] 进一步的优选，灵芝菌种复壮培养基含有下述配比的原料：±豆200肖，葡萄糖 20邑，琼脂粉15g，憐酸二氨钟3g，硫酸儀1. 5g，玉米粉lOg，教皮50g，栋树树皮、青冈树树皮 中至少一种lOOg，灵芝子实体50g，蒸馈水适量。加适量蒸馈水的判断依据是：
[0014] 1)设及下述制备方法步骤2)原料±豆，W及玉米粉，教皮，栋树树皮、青冈树树皮 等煎煮时，加水量W原料能全部被水浸透，将水淹没原料即可。
[001引。设及到述制备方法步骤扣中将步骤。所得煎煮液，过滤，加蒸馈水时，此时蒸 馈水加入量W原料±豆200g计算，加蒸馈水至溶液总量为800-1000血。
[0016] 本发明灵芝菌种复壮培养基是在传统灵芝菌种培养基的基础上，设计了两个培养 阶段，在灵芝菌丝提纯培养基中将菌种培养至菌丝；然后将菌丝置于灵芝菌种复壮培养基 中培养得到复壮灵芝菌种。在灵芝菌种复壮培养基中添加灵芝子实体的目的是提供灵芝菌 丝生长的特殊营养并适应一定的环境条件。并在上述两种培养基中可选择添加玉米粉、教 皮、栋树树皮、青冈树树皮中至少一种，添加玉米粉的目的是提供复合氮源，添加教皮的目 的是提供氮源，添加栋树树皮、青冈树树皮的目的是提供灵芝生长所需的碳源W及其他营 养，两者W任意比例混合皆可。采用本发明培养基分阶段复壮培养，菌丝生长快、整齐浓密， 培养得到的灵芝子实体农艺性状佳。
[0017] 本发明灵芝菌丝提纯培养基的制备方法如下： 阳〇1引 1)±豆去皮，切片；
[0019] 2)±豆加水煮沸后煎煮；
[0020] 3)步骤2)所得煎煮液，过滤，加蒸馈水补足至800-1000ml;
[0021] 4)向步骤3)所得溶液中加入琼脂粉，加热、揽拌至琼脂粉溶解，再加入葡萄糖、憐 酸二氨钟、硫酸儀溶解得培养基溶液；
[0022] 5)步骤4)所得培养基溶液按常规方法分装、灭菌、摆斜面即得。
[0023]如果培养基中还含有玉米粉，教皮，栋树树皮、青冈树树皮中至少一种，则灵芝菌 丝提纯培养基的制备方法如下：
[0024] 1)±豆去皮，切片； 阳025] 2) ±豆与玉米粉，教皮，栋树树皮、青冈树树皮中至少一种加水煮沸后煎煮； 阳0%] 3)步骤2)所得煎煮液，过滤，加蒸馈水补足至800-1000ml;
[0027] 4)向步骤如所得溶液中加入琼脂粉，加热、揽拌至琼脂粉溶解，再加入葡萄糖、憐 酸二氨钟、硫酸儀溶解得培养基溶液；
[0028] 5)步骤4)所得培养基溶液按常规方法分装、灭菌、摆斜面即得。
[0029] 本发明灵芝菌种复壮培养基的制备方法如下：
[0030] 1)±豆去皮，切片；
[0031] 2) ±豆与灵芝子实体加水煮沸后煎煮；
[0032] 3)步骤2)所得煎煮液，过滤，加蒸馈水补足至800-1000ml;
[003引4)向步骤如所得溶液中加入琼脂粉，加热、揽拌至琼脂粉溶解，再加入葡萄糖、憐 酸二氨钟、硫酸儀溶解得培养基溶液；
[0034] 5)步骤4)所得培养基溶液按常规方法分装、灭菌、摆斜面即得。
[0035]如果培养基中还含有玉米粉，教皮，栋树树皮、青冈树树皮中至少一种，则灵芝菌 种复壮培养基的制备方法如下：
[0036] 1)±豆去皮，切片；
[0037] 2)±豆与玉米粉，教皮，栋树树皮、青冈树树皮中至少一种、灵芝子实体加水煮沸 后則煮；
[0038] 3)步骤2)所得煎煮液，过滤，加蒸馈水补足至800-1000ml;
[0039] 4)向步骤3)所得溶液中加入琼脂粉，加热、揽拌至琼脂粉溶解，再加入葡萄糖、憐 酸二氨钟、硫酸儀溶解得培养基溶液；
[0040] 5)步骤4)所得培养基溶液按常规方法分装、灭菌、摆斜面即得。
[0041] 上述培养基制备方法中步骤2)所述"加蒸馈水补足至800-1000ml"是W原料±豆 2〇〇g计算，加蒸馈水至溶液总量为800-1000血。
[0042] 本发明的关键是提供了一种采用本发明灵芝菌种复壮培养基的灵芝菌种提纯复 壮培养方法，包括如下步骤：
[0043]A、按前述原料组成及方法制备灵芝菌种复壮培养基；
[0044] B、将灵芝菌种培养成菌丝后接种至步骤A所得灵芝菌种复