一种粉质棒束孢ifmz130719及其应用
【技术领域】：
[OOm] 本发明属于微生物技术领域，尤其设及一种粉质棒束抱[Isaria farinose(Holmskiold)化ies]IFMZ130719 及其应用。
【背景技术】：
[0002] 码絹金龟MaladeraSP.隶属于銷翅目绒金龟科，是云南省烟草上的一种重要食叶 害虫，在云南省分布较普遍，山地种植的烟草发生危害严重.烤烟从移栽还苗至团棵、旺长 期，都受到码絹金龟的危害，叶片被咬成孔桐、缺刻，发生盛期虫口数量大的田块，烟株叶片 被食尽，仅留叶脉，成扫靑状，使烟叶产量严重受损、质量下降。由于该虫W幼虫在烟草根际 取食危害和存活，成虫可取食烟叶，而由于其幼虫长期生活于地下±壤中，因而对其幼虫的 控制在码絹金龟幼虫的进行防治的关键。目前，对该虫的防治较难。化学杀虫剂虽然具有 见效快、成本低的优点，但用药防治次数过多，不仅会引起农药残留和环境污染，而且能诱 导害虫产生抗药性。而利用天敌等生物因素控制害虫已成为发展绿色植保的重要途径。由 此，运些负面影响使人们在防治中更加关注生物防治。生物防治对人、畜、植物安全，害虫极 少或不产生抗性，有利于环境保护。因此，研究和利用W昆虫病原真菌为基础的蛇蜡类的生 物防治，避免或减少因不合理使用化学农药所带来的抗药性问题，已成为金龟甲类害虫科 学治理和可持续控制的重要课题。
[0003] 粉质棒束抱Isariafarinose化olmskiold)化ies为半知菌亚口丝抱纲棒束抱属 真菌。据报道，该菌在自然条件下能侵染寄生鱗翅目、双翅目、同翅目、銷翅目和膜翅目的昆 虫，但有关该菌对鱗翅目、双翅目、同翅目、銷翅目和膜翅目昆虫中具体的感染种类不太清 楚，目前唯一有明确记载的寄主为一种小刺蛾蛹和幼虫，因而就粉质棒束抱对码絹金龟的 自然侵染也未见报道。
【发明内容】
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[0004] 本发明的目的在于提供一种粉质棒束抱IFMZ130719及其应用，旨在克服现有粉 质棒束抱未发现能寄生码絹金龟（MaladeraSP.)幼虫的不足，通过生物技术手段防治码絹 金龟（MaladeraSP.)幼虫，避免或减少因不合理使用化学农药所带来的抗药性问题。
[0005] 本发明是运样实现的，一种粉质棒束抱[Isariafarinose(Holmskiold)] IFMZ130719,于2014年12月4日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中屯、， 保藏号为CGMCCNo. 10137,保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
[0006] 本发明的进一步的目的在于提供上述粉质棒束抱IFYJ141025在码絹金龟 (MaladeraSP.)幼虫防治方面的应用。本发明于2013年7月，在云南省蒙自市烟田间调查 时发现粉质棒束抱在码絹金龟幼虫中大量发生流行，引起大量码絹金龟幼虫（蛇蜡）的感 染死亡。因此，该菌株是目前国内首次发现的寄生码絹金龟流行性很强的虫生真菌，在防治 码絹金龟中具有很大的开发应用前景。
[0007] 本发明从罹病码絹金龟幼虫上分离获得粉质棒束抱野生菌株，将野生菌株回接于 码絹金龟幼虫上复壮得到粉质棒束抱菌株，对该菌株采用按常规方法进行单抱分离、培养 得到纯的、致病力强的粉质棒束抱菌。在马铃馨葡萄糖（PDA)培养基上，且菌落呈稀疏绒 毛状，平展，中部淡呈鸭黄色，边缘呈白色，背面中部收呈澄黄色，边缘呈白色。其分生抱子 梗主要从基质菌丝上长出，100-300X1. 0-2. 5μπι;不规则分枝，其上着生有由2-4个瓶梗 组成的轮生体，瓶梗基部拟楠圆形膨大，向上变细形成明显的颈部，5-15X1. 2-2. 5μm，分 生抱子楠圆形至梭形，光滑，透明，大小为2. 0-3.OX1. 0-1.8μπι。
[0008] 相比于现有技术的缺点和不足，本发明具有w下有益效果：本发明是初次从粉质 棒束抱体上分离得到的菌株，培养比较简单，生长快速，产抱量大。其分生抱子对码絹金龟 幼虫致病力强，环保无污染、不易产生抗药性，可W广泛地用于码絹金龟的防治。
【具体实施方式】：
[0009] 为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，W下结合实施例，对本发明 进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用W解释本发明，并不用于 限定本发明。
[0010] 实施例一、病原菌的分离、鉴定
[0011] 1.1材料与方法 阳01引 1.1.1材料
[0013] 在云南省蒙自市采集到被一种虫生真菌侵染后的罹病码絹金龟幼虫。
[0014] PDA培养基（马铃馨葡萄糖培养基）：去皮马铃馨200g、葡萄糖20g、琼脂15~ 20邑、蒸馈水1000血。
[0015] 无菌操作条件：所有的器皿和用具均经高溫灭菌锅（12rC，30min)，接种等操作 均在超净工作台内进行。
[0016] 培养条件：置于25°C光照（12L:12D)恒溫箱中培养，待菌落形成后，转移到试管 PDA斜面，培养2~3天，转入4°C冰箱储存。
[0017] 1. 1. 2病原菌的分离和纯化
[0018] 分离：从罹病码絹金龟幼虫尸体上分离病原菌。将罹病死亡的码絹金龟幼虫虫体 带回实验室，用5%次氯酸钟溶液进行表面消毒。在溫度为25°C条件下培养，长出菌丝和分 生抱子后按常规方法进行单抱分离、培养得到纯的、产抱能力强的菌株粉质棒束抱Isaria farinose(Holmskiold)Rries，转移到PDA斜面上生长3~4天，在4°C冰箱储存。
[0019] 复壮：将分离到的菌株在PDA上培养5~7天后，产生大量分生抱子，再将该分生 抱子挑入含1%吐溫-80的无菌水，用玻璃棒揽拌均匀，得到适当浓度（l〇s抱子/ml)的抱 子悬浮液，用小型喷雾器均匀喷于码絹金龟幼虫体表（W虫体表面湿润为度），保持相对湿 度80%W上。待码絹金龟幼虫死亡后，收集死虫于灭菌培养皿中并保湿，得到的幼虫虫尸 再按W上方法分离得到致病力更强的菌株。
[0020] 纯化：挑取培养基上分生抱子粉，再次接种在新的培养基上。如此培养2~3代， 菌株就被纯化。
[0021] 1.1. 3病原菌的鉴定
[0022] 根据病原菌的培养性状、菌丝和分生抱子的形态进行鉴定。利用40X10倍显光学 微镜，镜检菌丝、分生抱子的形态。 阳02引 1. 2结果
[0024] 从被虫生真菌自然侵染的码絹金龟幼虫虫体上分离获得粉质棒束抱野生菌株， 在马铃馨葡萄糖培养基（PDA)上培养，并回接于码絹金龟幼虫复壮获得一菌株，对该菌 株进行单菌丝分离获得纯化的菌株，即粉质棒束抱Isariafarinose化olmskiold)化ies IFMZ130719。
[00巧]在光学显微镜40X10倍下，观赏可W看到分生抱子梗主要从基质菌丝上长出， 100-300X1. 0-2. 5μπι;不规则分枝，其上着生有由2-4个瓶梗组成的轮生体，瓶梗基部拟 楠圆形膨大，向上变细成明显的颈部，5-15XI. 2-2. 5μm，分生抱子楠圆形至梭形，光滑，透 明，2. 0-3. 0X1. 0-1.8μ