尾赤桉201-2多倍体育种方法
【专利摘要】本发明公开了一种尾赤桉201-2多倍体育种方法，包括以下步骤：1）将尾赤桉201-2组培苗的叶片置于质量浓度为0.2%的秋水仙素中浸泡24h；2）将步骤1）得到的经过秋水仙素浸泡处理后的叶片接种于增殖培养基中培养，分化出的不定芽继代培养后接种到生根培养基中培养，得到尾赤桉201-2多倍体植株。本发明采用秋水仙素浸泡法诱导处理进行多倍体诱导，再结合组织培养技术进行培育，通过研究秋水仙素不同浓度、不同处理时间对多倍体诱导的影响，分析得出合适的诱导方案，培育出尾赤桉201-2多倍体植株。本发明的方法不仅具有经济方便、诱导作用专一性强、减小毒性等特点，还可以提高多倍体发生频率，减少嵌合体出现。
【专利说明】尾赤桉201-2多倍体育种方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于植物组织培养【技术领域】，涉及一种尾赤桉201-2多倍体育种方法。
【背景技术】
[0002]桉树是桃金娘科(Myrtaceae)桉属(Eucalyptus)植物的统称，属常绿高大乔木(少数种为小乔木)，具有生长快、轮伐期短、材质较好、适应能力较强、成长空间宽广等特点。桉树树姿优美，四季常青，生长迅速，有萌芽更新及改善沼泽地的能力，宜作园林绿化树种；树叶含芳香油，有杀菌驱蚊作用，可提炼香油；嫩枝和树皮中含有单宁，可以提炼栲胶；树皮和木材还可用来造纸浆、建筑、家具等。桉树喜温暖气候，但不耐湿热，气候过热生长不良，畏寒，对低温特别敏感。如果在_5°C以下2-3天就会产生不同程度的冻害，轻者小枝枯死，重者会全株枯死。其次，生长周期比较长，5-8年才能采伐利用。因此可以通过多倍体人工诱导培育优良品种。
[0003]林木倍性育种是一种重要的培育林木新品种的途径。经过倍性育种育成的多倍体林木具有“巨大性”，在高产、收获物优质及抗逆性强等方面比加倍前有显著提高的表现。李云、冯大领在《木本植物多倍体育种研究进展》中对国内木本植物中的多倍体资源及其诱导途径及其鉴定方法作了详细的综述。秋水仙素是诱导多倍体用的最广泛又最有效的一种诱导剂，它作用只局限于阻碍处于细胞分裂中期的纺锤丝的形成，而对染色体的结构并无显著的影响，在遗传上很少发生其他不利的变异。罗晓丹、朱延林等总结了近年来秋水仙素在木本植物多倍体育种中的应用情况。根据Leran的经验，染色体数目少、以收获营养器官为主、异花授粉、多年生习性和可营养繁殖的植物适于通过倍性育种来改良。桉树在生理特性上符合上述要求，具有通过加倍实现二倍体良种改良的潜力。
[0004]尾赤按201-2 (Eucalyptus urophylla x Eucalyptus cam aldulensis; clone DH_(201-2))是尾叶桉X赤桉的人工杂交种，既具有尾叶桉对土壤的高适应性和强抗病能力特点，又具有赤桉早期速生、耐低温等优点。综合表现为树冠小，树干笔直高大，材质优，有一定抗病虫能力和抗台风能力，耐-3~_5°C的低温，作为耐寒速生品种在极低温条件下广泛栽培仍具有挑战性。当前林产工业对像桉树这样短轮伐期的工业原料林需求量日益增长，苗木供不应求，但是，近年发生的一些病虫害，像青枯病、流胶病、枯叶病、尺蛾等阻碍桉树的健康发展。因此，桉树的抗性培育研究是目前急需解决的问题。
【发明内容】
[0005]有鉴于此，本发明的目的在于提供一种尾赤桉201-2多倍体育种方法，采用组织培养与秋水仙素加倍处理相结合的方式来选育尾赤桉201-2多倍体植株，为桉树多倍体的育种研究奠定基础。
[0006]为达到上述目的，本发明提供如下技术方案:
[0007]本发明的尾赤桉201-2多倍体育种方法，包括以下步骤:
[0008]I)将尾赤桉201-2组培苗的叶片置于质量浓度为0.2%的秋水仙素中浸泡24h ；[0009]2)将步骤I)得到的经过秋水仙素浸泡处理后的叶片接种于增殖培养基中培养，分化出的不定芽继代培养后接种到生根培养基中培养，得到尾赤桉201-2多倍体植株。
[0010]进一步，所述增殖培养基是以MS培养基为基本培养基，并添加有6-苄氨基嘌呤lmg/L、吲哚乙酸lmg/L和吲哚-3- 丁酸0.5mg/L。
[0011]进一步，所述生根培养基是以1/3MS培养基为基本培养基，并添加有吲哚-3-丁酸
0.5mg/L 和 ABT 生根粉 0.5mg/L。
[0012]进一步，所述步骤I)中，叶片置于秋水仙素中浸泡时于摇床中振荡，转速为120r/
mirio [0013]进一步，所述步骤2)中，培养条件为:温度25±2°C，光照强度15001x，每天光照12h。
[0014]本发明中所述的MS培养基和1/3MS培养基为植物组织培养中常用的基本培养基，其具体配方如下表所示:
【权利要求】
1.尾赤桉201-2多倍体育种方法，其特征在于:包括以下步骤: 1)将尾赤桉201-2组培苗的叶片置于质量浓度为0.2%的秋水仙素中浸泡24h ； 2)将步骤I)得到的经过秋水仙素浸泡处理后的叶片接种于增殖培养基中培养，分化出的不定芽继代培养后接种到生根培养基中培养，得到尾赤桉201-2多倍体植株。
2.根据权利要求1所述的尾赤桉201-2多倍体育种方法，其特征在于:所述增殖培养基是以MS培养基为基本培养基，并添加有6-苄氨基嘌呤lmg/L、吲哚乙酸lmg/L和吲哚-3- 丁酸 0.5mg/L。
3.根据权利要求1所述的尾赤桉201-2多倍体育种方法，其特征在于:所述生根培养基是以1/3MS培养基为基本培养基，并添加有吲哚-3- 丁酸0.5mg/L和ABT生根粉0.5mg/L0
4.根据权利要求1、2或3所述的尾赤桉201-2多倍体育种方法，其特征在于:所述步骤I)中，叶片置于秋水仙素中浸泡时于摇床中振荡，转速为120r/min。
5.根据权利要求1、2或3所述的尾赤桉201-2多倍体育种方法，其特征在于:所述步骤2)中，培养条件为:温度25 ±2°C，光照强度15001x，每天光照12h。
【文档编号】A01H4/00GK103548688SQ201310532940
【公开日】2014年2月5日 申请日期:2013年11月1日 优先权日:2013年11月1日
【发明者】陈泽雄, 刘奕清 申请人:重庆文理学院