一种阴行草多倍体诱变的繁殖方法
【专利摘要】本发明研究了一种阴行草多倍体诱变的繁殖方法，包括阴行草无菌叶片的获得、愈伤组织的诱导、愈伤组织的分化、生根等步骤，本发明方法所制备的阴行草根茎巨大，培养周期短，获得的突变株可以为其药用资源的开发提供大量原料。
【专利说明】一种阴行草多倍体诱变的繁殖方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及阴行草组织培养的快繁方法，属于植物【技术领域】。
【背景技术】
[0002]阴行草chinensisBenth.，玄参科，一年生草本植物，高 30-80 厘米，叶对生，叶片二回羽状全裂，裂片狭线形。花对生于茎枝上部，成稀疏总状花序。花冠二唇形，上唇微带紫色、下唇黄色。生于山坡、丘陵、草丛等处，国内外均有分布。阴行草含10-对香豆酰桃叶珊瑚甙，8-异马钱素和阿克甙。全草含挥发油0.45%。植物的全草可供药用，中药名亦为“阴行草”，立秋至白露采割，去净杂质，切段，晒干或鲜用。具有清热利湿，凉血止血，祛瘀止痛之功效，目前关于阴行草的利用主要是野外采收，尚无人工繁殖方法。
【发明内容】
[0003]本发明所要解决的技术问题是提供一种阴行草多倍体诱变的繁殖方法，本发明方法所制备的阴行草根茎巨大，培养周期短，获得的突变株可以为其药用资源的开发提供大量原料。
[0004]本发明所要解决的技术问题是通过以下方案来实现的:
取阴行草的叶片，毛刷清洗上面污垢，流水冲洗干净，1%溴水处理5min，无菌水冲洗5遍，0.2%的升汞处理5min，无菌水冲洗5遍，消毒处理后的阴行草叶片切成小块，划出伤口，接种入B5+NAA1.5mg/L+6-BA0.lmg/L+2, 4_D1.5mg/L培养基中进行愈伤组织的诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂8g/L，温度25°C，湿度70%，取诱导出来的愈伤组织接种入B5+KT0.1-0.2mg/L+6-BA1.0-1.5mg/L+2, 4-D0.3-0.5mg/L培养基中进行愈伤组织的分化，附加蔗糖30g/L，琼脂8g/L，温度25°C，湿度70%，光强25001x，光照时间12h/d，取长约4cm的芽苗洗去根部培养基，栽植于灭菌过的珍珠岩基质中，放置于光照培养箱中光照培养，封上保鲜膜，光照强度ΙΟΟΟΟΙχ，全光照，温度28°C。
[0005]采用本发明制备的阴行草成活率高，周期短，产量大，污染小，利于大规模种植。
[0006]下面将结合【具体实施方式】对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
【具体实施方式】
[0007]实施例1
取阴行草的叶片，毛刷清洗上面污垢，流水冲洗干净，1%溴水处理5min，无菌水冲洗5遍，0.2%的升汞处理5min，无菌水冲洗5遍，消毒处理后的阴行草叶片切成小块，划出伤口，接种入B5+NAA1.5mg/L+6-BA0.lmg/L+2, 4-D1.5mg/L培养基中进行愈伤组织的诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂8g/L，温度25°C，湿度70%，取诱导出来的愈伤组织接种入B5+KT0.lmg/L+6-BA1.0mg/L+2, 4-D0.3mg/L培养基中进行愈伤组织的分化，附加蔗糖30g/L，琼脂8g/L，温度25°C，湿度70%，光强25001x，光照时间12h/d，取长约4cm的芽苗洗去根部培养基，栽植于灭菌过的珍珠岩基质中，放置于光照培养箱中光照培养，封上保鲜膜，光照强度ΙΟΟΟΟΙχ，全光照，温度28°C，成活率88%。
[0008]实施例2
取阴行草的叶片，毛刷清洗上面污垢，流水冲洗干净，1%溴水处理5min，无菌水冲洗5遍，0.2%的升汞处理5min，无菌水冲洗5遍，消毒处理后的阴行草叶片切成小块，划出伤口，接种入B5+NAA1.5mg/L+6-BA0.lmg/L+2, 4-D1.5mg/L培养基中进行愈伤组织的诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂8g/L，温度25°C，湿度70%，取诱导出来的愈伤组织接种入B5+KT0.2mg/L+6-BA1.5mg/L+2, 4-D0.5mg/L培养基中进行愈伤组织的分化，附加蔗糖30g/L，琼脂8g/L，温度25°C，湿度70%，光强25001x，光照时间12h/d，取长约4cm的芽苗洗去根部培养基，栽植于灭菌过的珍珠岩基质中，放置于光照培养箱中光照培养，封上保鲜膜，光照强度ΙΟΟΟΟΙχ，全光照，温度28°C，成活率92%。
[0009]实施例3
取阴行草的叶片，毛刷清洗上面污垢，流水冲洗干净，1%溴水处理5min，无菌水冲洗5遍，0.2%的升汞处理5min，无菌水冲洗5遍，消毒处理后的阴行草叶片切成小块，划出伤口，接种入B5+NAA1.5mg/L+6-BA0.lmg/L+2, 4-D1.5mg/L培养基中进行愈伤组织的诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂8g/L，温度25°C，湿度70%，取诱导出来的愈伤组织接种入B5+KT0.lmg/L+6-BA1.5mg/L+2, 4-D0.4mg/L培养基中进行愈伤组织的分化，附加蔗糖30g/L，琼脂8g/L，温度25°C，湿度70%，光强25001x，光照时间12h/d，取长约4cm的芽苗洗去根部培养基，栽植于灭菌过的珍珠岩基质中，放置于光照培养箱中光照培养，封上保鲜膜，光照强度ΙΟΟΟΟΙχ，全光照，温度28°C，成活率94%。
【权利要求】
1.一种阴行草多倍体诱变的繁殖方法，包括阴行草无菌叶片的获得、愈伤组织的诱导、愈伤组织的分化、生根，其主要步骤如下: (1)取阴行草的叶片进行消毒处理； (2)消毒处理后的阴行草叶片切成小块，划出伤口，接种入B5+NAA1.5mg/L+6-BA0.lmg/L+2, 4-D1.5mg/L培养基中进行愈伤组织的诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂8g/L，温度25°C，湿度 70% ； (3 )取步骤(2 )诱导出来的愈伤组织接种入B5+KT0.1-0.2mg/L+6-BAl.0-1.5mg/L+2, 4-D0.3-0.5mg/L培养基中进行愈伤组织的分化，附加蔗糖30g/L，琼脂8g/L，温度25。。，湿度70%，光强25001x，光照时间12h/d ； (4)取步骤(3)分化出来的芽苗进行生根诱导。
2.按照权利要求1所述的一种阴行草倍体诱变的繁殖方法，其特征在于:步骤(I)中阴行草叶片的消毒方法为取阴行草的叶片，毛刷清洗上面污垢，流水冲洗干净，1%溴水处理5min,无菌水冲洗5遍,0.2%的升萊处理5min,无菌水冲洗5遍。
3.按照权利要求1所述的一种阴行草倍体诱变的繁殖方法，其特征在于:步骤(I)中所述阴行草生根诱导的方法为，取长约4cm的芽苗洗去根部培养基，栽植于灭菌过的珍珠岩基质中，放置于光照培养箱中光照培养，封上保鲜膜，光照强度ΙΟΟΟΟΙχ,全光照,温度28。。。
【文档编号】A01G31/00GK104304011SQ201410540405
【公开日】2015年1月28日 申请日期:2014年10月14日 优先权日:2014年10月14日
【发明者】刘东锋, 杨成东 申请人:南京帝道农业科技有限公司