一种锡生藤多倍体诱变的快速繁殖方法
【专利摘要】本发明研究了一种锡生藤多倍体诱变的快速繁殖方法，包括锡生藤无菌花粉的获得、愈伤组织的诱导、愈伤组织的分化、生根诱导等步骤，本发明方法可以快速获得大量的锡生藤多倍体幼苗，具有繁殖率高，目的性强，操作简单，成本低等特点。
【专利说明】 一种锡生藤多倍体诱变的快速繁殖方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及锡生藤组织培养的快繁方法，属于植物【技术领域】。
【背景技术】
[0002]锡i生篇，Cissampelos pareira L.防己科,系傣族习用药材,傣名为亚红龙。木质藤本；枝细瘦、有条纹，通常密被柔毛，很少近无毛，叶纸质，心状近圆形或近圆形，长，宽均约2-5厘米，顶端常微缺，具凸尖，基部常心形，有时近截平，很少，微圆，两面被毛，上面常稀疏，下面很密；掌状脉5-7条，在下面稍凸；叶柄常密被柔毛，比叶片短。雄花序为腋生，伞房状聚伞花序，单生或几个簇生，花序轴和分枝均细瘦，密被柔毛；雄花；萼片长1.2-1.5毫米，背面被疏而长的毛；花冠碟状；聚药雄蕊长约0.7毫米；雌花序为狭长的聚伞圆锥花序，长达18厘米，通常不超过10厘米，叶状苞片近圆形，在花序轴上覆瓦状重叠、密被毛；雌花:萼片阔倒卵形，长约1.5毫米；花瓣很小，长约0.7毫米。核果被柔毛，内果皮阔倒卵形，长3-5毫米，背肋两侧各有2行皮刺状小凸起，胎座迹为马蹄形边缘所环绕。生于热带河边、沙滩，荒地、山坡石缝中或灌木丛中的潮湿地，分布于云南，春、夏二季采挖，除去泥沙，晒干，本种根含多种生物碱，其中锡生藤碱为一种较好的肌肉松弛剂。根含D-槲皮醇、海牙亭碱、海牙亭宁碱、筒箭毒次碱、粒枝碱、海牙剔定碱、锡生藤醇灵、(++)-4"-甲氧基筒箭毒次碱。根皮含筒箭毒次碱、海牙亭碱、海牙亭宁碱、粒枝碱、门尼斯明碱、锡生藤醇灵、软齿花根碱等。藤含海牙亨碱、筒箭毒次碱、粒枝碱、(++)-4" -ο-甲基筒箭毒次碱。药用功效为消肿止痛，止血，生肌，目前锡生藤尚未见人工繁殖。
【发明内容】
[0003]本发明所要解决的技术问题是一种锡生藤诱变育种的快速繁殖方法，本发明方法可以快速获得大量的锡生藤多倍体幼苗，繁殖率高，目的性强，操作简单，成本低。
[0004]为解决上述技术问题，本发明采用下列技术方案:
取锡生藤的花粉，用70%的乙醇消毒0.5min,再用1%的过氧化氢溶液消毒5min,无菌水冲洗5次，消毒处理过的锡生藤花粉，接种到MS+NAA0.4mg/L+KT6mg/L+秋水仙素50-150mg/L的培养基中进行愈伤组织的诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，暗光照，温度22±2°C，诱导出来的分散稳定的愈伤组织接种到VR+TDZ2mg/L+NAA0.lmg/L+色氨酸24Mmol/L的培养基中进行愈伤组织的分化，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照25001x,光期12h/d，温度23±2°C，分化出来的胚接入MS培养基中进行壮苗生长，附加蔗糖60g/L，琼脂 7g/L，ρΗ5.8，光照 200001χ，光期 14h/d，温度 28。。。
[0005]采用本发明制备的锡生藤成活率高，根茎粗壮，利用率大，利于大规模种植。
[0006]下面将结合【具体实施方式】对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
【具体实施方式】
[0007]实施例1
取锡生藤的花粉，用70%的乙醇消毒0.5min,再用1%的过氧化氢溶液消毒5min,无菌水冲洗5次，消毒处理过的锡生藤花粉，接种到MS+NAA0.4mg/L+KT6mg/L+秋水仙素50mg/L的培养基中进行愈伤组织的诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，暗光照，温度22±2°C，诱导出来的分散稳定的愈伤组织接种到VR+TDZ2mg/L+NAA0.lmg/L+色氨酸24Mmol/L的培养基中进行愈伤组织的分化，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照25001x，光期12h/d，温度23±2°C，分化出来的胚接入MS培养基中进行壮苗生长，附加蔗糖60g/L，琼脂 7g/L，ρΗ5.8，光照 200001χ，光期 14h/d，温度 28°C，成活率 80%。
[0008]实施例2
取锡生藤的花粉，用70%的乙醇消毒0.5min,再用1%的过氧化氢溶液消毒5min,无菌水冲洗5次，消毒处理过的锡生藤花粉，接种到MS+NAA0.4mg/L+KT6mg/L+秋水仙素100mg/L的培养基中进行愈伤组织的诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，暗光照，温度22±2°C，诱导出来的分散稳定的愈伤组织接种到VR+TDZ2mg/L+NAA0.lmg/L+色氨酸24Mmol/L的培养基中进行愈伤组织的分化，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照25001x，光期12h/d，温度23±2°C，分化出来的胚接入MS培养基中进行壮苗生长，附加蔗糖60g/L，琼脂 7g/L，ρΗ5.8，光照 200001χ，光期 14h/d，温度 28°C，成活率 82%。
[0009]实施例3
取锡生藤的花粉，用70%的乙醇消毒0.5min,再用1%的过氧化氢溶液消毒5min,无菌水冲洗5次，消毒处理过的锡生藤花粉，接种到MS+NAA0.4mg/L+KT6mg/L+秋水仙素150mg/L的培养基中进行愈伤组织的诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，暗光照，温度22 ± 2 °C，诱导出来的分散稳定的愈伤组织接种到VR+TDZ2mg/L+NAA0.lmg/L+色氨酸24Mmol/L的培养基中进行愈伤组织的分化，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照25001x，光期12h/d，温度23±2°C，分化出来的胚接入MS培养基中进行壮苗生长，附加蔗糖60g/L，琼脂 7g/L，ρΗ5.8，光照 200001χ，光期 14h/d，温度 28°C，成活率 83%。
【权利要求】
1.一种锡生藤多倍体诱变的快速繁殖方法，包括锡生藤无菌花粉的获得、愈伤组织的诱导、愈伤组织的分化、生根诱导，其主要步骤如下: (1)取锡生藤的花粉，用70%的乙醇消毒0.5min,再用1%的过氧化氢溶液消毒5min,无菌水冲洗5次； (2)将步骤(I)消毒处理过的锡生藤花粉，接种到MS+NAA0.4mg/L+KT6mg/L+秋水仙素50-150mg/L的培养基中进行愈伤组织的诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，暗光照，温度22±2°C ； (3)取步骤(2)诱导出来的分散稳定的愈伤组织接种到VR+TDZ2mg/L+NAA0.lmg/L+色氨酸24Mmol/L的培养基中进行愈伤组织的分化，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照25001x，光期 12h/d，温度 23±2°C ； (4)将步骤(3)分化出来的胚接入MS培养基中进行壮苗生长，附加蔗糖60g/L，琼脂7g/L，ρΗ5.8，光照 200001χ，光期 14h/d，温度 28。。。
【文档编号】A01H4/00GK104255511SQ201410540492
【公开日】2015年1月7日 申请日期:2014年10月14日 优先权日:2014年10月14日
【发明者】刘东锋, 杨成东 申请人:南京帝道农业科技有限公司