一种马属动物卵母细胞低温保存液的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种马属动物卵母细胞低温保存液，其中，保存液包括乳酸钠混合液、青霉素、链霉素，以及牛血清白蛋白、犊牛血清和灭活马血清中的一种、两种或三种；其配制方法包括：将乳酸钠混合液置于37℃的恒温箱中0.5-6小时后，备用，按照组分含量向乳酸钠混合液中加入青霉素、链霉素、以及牛血清白蛋白、犊牛血清和灭活马血清中的一种或两种或三种，即得到保存液。适用于马、牛、驴的卵母细胞的低温保存。本发明的有益效果是：具有取材方便、价格低廉、配制简单、使用方便等优点，非常适用于低温保存马属动物卵母细胞，以用于保鲜胚胚胎移植技术，有利于保鲜胚胚胎移植技术的推广应用。
【专利说明】—种马属动物卵母细胞低温保存液
【技术领域】
[0001]本发明属于动物胚胎移植领域，特别是涉及一种马属动物卵母细胞低温保存液。【背景技术】
[0002]胚胎移植又称受精卵移植，俗称人工授胎或借腹怀胎，是指将雌性动物的早期胚胎移植到同种的、生理状态相同的其他雌性动物体内，使之继续发育为新个体的技术。胚胎移植的基本程序包括供体超排与授精、受体同期发情处理、采卵、检卵和移植。
[0003]卵母细胞低温保存技术主要用于保鲜胚胚胎移植技术。保存液多数为组织培养液，目前国内常用的保存液主要有杜氏磷酸盐缓冲液(D-PBS)、布林斯特氏液、合成输卵管液(S0F)、惠屯氏液、Ham’s F-110以及TCM-199。上述几种液体均存在药品来源困难，价格昂贵，配制步骤繁琐且需现用现配等问题，为胚胎移植的规模化生产带来极大的不便。
【发明内容】
[0004]为了解决传统的保存液药品来源困难、价格昂贵、配制步骤繁琐且需现用现配等问题，本发明提供了一种适用于规模化生产的一种马属动物卵母细胞低温保存液，低温保存卵母细胞用于非手术法胚胎移植。
[0005]为了实现上述发明目的，本发明提供了一种马属动物卵母细胞低温保存液，所述保存液包括乳酸钠混合液、青霉素、链霉素，以及牛血清白蛋白或犊牛血清或灭活马血清中的一种、两种或三种。
[0006]所述乳酸钠混合液包括乳酸钠、氯化钠、氯化钾、氯化钙、氯化镁和黄芪多糖中的一种或多种。
[0007]所述保存液中各组``分的含量为:每1000ml乳酸钠混合液中含有青霉素30-180万单位、链霉素20-200万单位，以及牛血清白蛋白0.05%-1.5%、犊牛血清0.5%-15%和/或灭活马血清0.5%-14%。其中，所述血清白蛋白、所述犊牛血清以及所述灭活马血清的百分比为体积百分比。
[0008]所述保存液中各组分的含量为:每1000ml乳酸钠混合液中含有青霉素50-150万单位、链霉素50-150万单位，以及牛血清白蛋白0.1%-0.9%、犊牛血清1%_10%和/或灭活马血清1%-10%。其中，所述血清白蛋白、所述犊牛血清以及所述灭活马血清的百分比为体积百分比。
[0009]所述乳酸钠混合液中各组分的含量为 每1000ml混合液中含有乳酸钠l_7g、氯化钠l_5g、氯化钾2-7g、氯化钙0.5-2g、氯化镁0.05-0.5g和黄芪多糖0.01-0.3g。
[0010]所述乳酸钠混合液中各组分的含量优选为 每1000ml混合液中含有乳酸钠3_7g、氯化钠2-5g、氯化钾3-7g、氯化钙0.5-1.5g、氯化镁0.1-0.4g和黄芪多糖0.01-0.lg。
[0011]所述乳酸钠混合液中各组分的含量还可以优选为:每1000ml混合液中含有乳酸钠5.4g、氯化钠3.2g、氯化钾4.6g、氯化钙1.lg、氯化镁0.32g和黄芪多糖0.08g。
[0012]为了更好的实现上述发明目的，本发明还提供了一种马属动物卵母细胞低温保存液的配制方法，包括:
(1)按照各组分的含量称取乳酸钠、氯化钠、氯化钾、氯化钙和氯化镁，并加入蒸馏水混合，置于37°C的恒温箱中0.5-6小时后,备用；
(2)称取黄芪多糖放入无菌烧杯中，向无菌烧杯中加入步骤(1)中得到的混合液，搅拌使黄芪多糖充分溶解，得到乳酸钠混合液；
(3)低温保存卵母细胞前，按照组分含量向乳酸钠混合液中加入青霉素、链霉素以及、牛血清白蛋白、犊牛血清和灭活马血清中的一种或两种或三种，即可得到冲卵液。
[0013]本发明的马属动物卵母细胞低温保存液适用于马、牛、驴的卵母细胞低温保存及非手术法胚胎移植技术。
[0014]本发明实施例提供的技术方案带来的有益效果是:本发明以乳酸钠混合液作为主液，可提前配制待用，使用前只需向主液中加入适量抗生素、及牛血清白蛋白或犊牛血清或灭活马血清即可。具有取材方便、价格低廉、配制简单、使用方便等优点，非常适用于马属动物卵母细胞低温保存，有利于胚胎移植技`术的推广应用。
【权利要求】
1.马属动物卵母细胞低温保存液，其特征在于，所述保存液包括乳酸钠混合液、青霉素、链霉素，以及牛血清白蛋白、犊牛血清和灭活马血清中的一种、两种或三种。
2.根据权利要求1所述的马属动物卵母细胞低温保存液，其特征在于，所述乳酸钠混合液包括乳酸钠、氯化钠、氯化钾、氯化钙、氯化镁和黄芪多糖中的一种或多种。
3.根据权利要求1或2所述的马属动物卵母细胞低温保存液，其特征在于，所述保存液中各组分的含量为:每1000ml乳酸钠混合液中含有青霉素30-180万单位、链霉素20-200万单位，以及牛血清白蛋白0.05%-1.5%、犊牛血清0.5%-15%和/或灭活马血清0.5%_14%。
4.根据权利要求1或2所述的马属动物卵母细胞低温保存液，其特征在于，所述保存液中各组分的含量为:每1000ml乳酸钠混合液中含有青霉素50-150万单位、链霉素50-150万单位，以及3%-5%、牛血清白蛋白0.1%-0.9%、犊牛血清1%-10%和/或灭活马血清1%_10%。
5.根据权利要求1-4任一项所述的马属动物卵母细胞低温保存液，其特征在于，所述乳酸钠混合液中各组分的含量为:每1000ml混合液中含有乳酸钠l_7g、氯化钠l_5g、氯化钾2-7g、氯化钙0.5-2g、氯化镁0.05-0.5g和黄芪多糖0.01-0.3g。
6.根据权利要求1-5任一项所述的马属动物卵母细胞低温保存液，其特征在于，所述乳酸钠混合液中各组分的含量为:每1000ml混合液中含有乳酸钠3-7g、氯化钠2_5g、氯化钾3-7g、氯化钙0.5-1.5g、氯化镁0.1-0.4g和黄芪多糖0.01-0.lg。
7.根据权利要求1-6任一项所述的马属动物卵母细胞低温保存液，其特征在于，所述乳酸钠混合液中各组分的含量为:每1000ml混合液中含有乳酸钠5.4g、氯化钠3.2g、氯化钾4.6g、氯化钙1.lg、氯化镁0.32g和黄芪多糖0.08g。
8.—种如权利要求1-7任一项所述的马属动物卵母细胞低温保存液的配制方法，其特征在于，所述配制方法包括: (1)按照各组分的含量称取乳酸钠、氯化钠、氯化钾、氯化钙和氯化镁，并加入蒸馏水混合，置于37°C的恒温箱中0.5-6小时后,备用； (2)称取黄芪多糖放入无菌烧杯中，向无菌烧杯中加入步骤(1)中得到的混合液，搅拌使黄芪多糖充分溶解，得到乳酸钠混合液； (3)准备低温保存卵母细胞，按照组分含量向乳酸钠混合液中加入青霉素、链霉素，以及牛血清白蛋白、犊牛血清和灭活马血清中的一种或两种或三种，即可得到低温保存液。
9.一种如权利要求1-8任一项所述的马属动物卵母细胞低温保存液的应用，其特征在于，所述保存液适用于低温保存卵母细胞及马、牛、驴的非手术法胚胎移植技术。
【文档编号】A01N1/02GK103798225SQ201310644968
【公开日】2014年5月21日 申请日期:2013年12月5日 优先权日:2013年12月5日
【发明者】孙吉胜, 王卫雄, 郭海鹏 申请人:青岛德瑞骏发生物科技有限公司, 伊犁德瑞骏发生物科技有限公司, 青岛德瑞鳌蓝马术有限公司