一种玉米挥发物对亚洲玉米螟产卵行为影响的试验方法
【专利摘要】本发明公开了一种玉米挥发物对亚洲玉米螟产卵行为影响的试验方法，包括以下步骤：亚洲玉米螟在人工气候箱用人工饲料饲养，连续繁殖多代，成虫羽化当天，将雄雌虫按不低于2∶1（至少5头雌虫）的比例放在养虫笼中自由交配，并喂以10%的蜂蜜水以补充营养，交配3天后的雌蛾作为实验的供试虫源；选取20种玉米挥发物标准化合物，将每种样品溶于液体石蜡中，在漩涡混合器中充分混合，其中8种化合物配5×10-3g/ml～5×10-9g/ml浓度系列（浓度以10倍递减），置于冰箱中保存，以用于产卵选择行为测定；对供试虫源进行产卵生测。本发明测定了8种供试化合物对亚洲玉米螟雌蛾产卵选择的影响，为研制亚洲玉米螟产卵引诱剂或者驱避剂提供了依据，探索了新的害虫防治手段。
【专利说明】一种玉米挥发物对亚洲玉米螟产卵行为影响的试验方法【技术领域】
[0001]本发明属于生物研究领域，尤其涉及一种玉米挥发物对亚洲玉米螟产卵行为影响的试验方法。
【背景技术】
[0002]亚洲玉米螟是一种重要的农业害虫，在我国和东南亚各国发生普遍，其寄主范围很广，寄主植物多达69种，大发生年可使玉米减产30%以上。由于该虫钻蛀性危害的特点，运用常规防治手段，很难达到好的效果。大量研究表明:植食性昆虫对寄主植物的危害都是以探测和识别的选择定向过程开始的，定向行为顺序包括昆虫对远距离植物或者生境的定向、到达植物后对取食或产卵部位的识别和选择、选定植物后对取食或产卵等活动的调节控制。在这一过程中植食性昆虫利用了嗅觉、味觉、视觉和触觉等多种行为模式(Millerand Strieker，1984)，而植物释放的特征性的挥发物在此过程中发挥着重要的作用。有研究表明，玉米、胡椒和马铃薯叶片的戍烧溶剂提取物对欧洲玉米螟Ostrinia nubilalis的产卵均有引诱作用(Udayagiri and Mason, 1995),蕉藕叶片粗提物对亚洲玉米螟产卵具有很强的引诱作用(张颖等，2010)。当剂量为80 μ g/cm2时，玉米挥发物的几个组分对欧洲玉米螟的产卵具有不同的影响:法尼烯表现出引诱作用，法尼醛、法尼醇则表现出驱避作用，橙花叔醇、β -石竹烯没有影响(Binder et al., 1995; Binder and Robbins, 1997)。当剂量为Img时，玉米挥发物苯甲醛、苯乙醛、青叶醇和柠檬烯的气味对亚洲玉米螟雌蛾产卵表现出驱避作用(何康来等，2005)。在高浓度下，亚洲玉米螟幼虫危害的玉米植株释放的挥发物组分反-2-己烯醛、顺-3-己烯-1-醇、壬醛对雌蛾产卵表现出驱避作用，法尼烯、β -石竹烯和α -石竹烯则有影响(Huang et al.，2009)。事实上，即使是在玉米螟为害的状态下，玉米释放的挥发物浓度远远达不到这么高的浓度。因此，有必要研究不同浓度的玉米挥发物组分对亚洲玉米螟产卵选择性影响。
【发明内容】
[0003]本发明的目的在于提供一种玉米挥发物对亚洲玉米螟产卵行为影响的试验方法，旨在为研制亚洲玉米螟产卵引诱剂或者驱避剂提供依据，探索新的害虫防治手段。
[0004]本发明是这样实现的，一种玉米挥发物对亚洲玉米螟产卵行为影响的试验方法包括以下步骤:
[0005]步骤一、亚洲玉米螟在人工气候箱用人工饲料饲养，连续繁殖多代，成虫羽化当天，将雄雌虫按不低于2:1 (至少5头雌虫)的比例放在养虫笼中自由交配，并喂以10%的蜂蜜水以补充营养，交配3天后的雌蛾作为实验的供试虫源；
[0006]步骤二、选取20种玉米挥发物标准化合物，将每种样品溶于液体石蜡中，在漩涡混合器中充分混合，其中8种化合物配5X 10_3g/ml~5X 10_9g/ml浓度系列(浓度以10倍递减)，置于冰箱 中保存，以用于产卵选择行为测定；
[0007]步骤三、对供试虫源进行产卵生测。[0008]进一步，步骤一中人工气候箱温度为26°C _28°C、相对湿度大于80%，光周期为16L:8D。
[0009]进一步，步骤三所述的产卵生测所用的产卵笼是由80目的铁纱网、直径为0.3cm的铁丝和两个直径13cm、高为1cm、底部镂空的圆柱形底座制作而成的高为20cm的圆柱形产卵笼，圆柱形底座内外两面用保鲜膜覆盖，外侧保鲜膜内壁上分别粘贴一片直径为5cm的圆形滤纸片，分别滴加待测化合物和对照溶剂，作为气味室。内侧保鲜膜上用昆虫针均匀的扎30个孔，便于挥发物透过小孔进入，亚洲玉米螟雌蛾喜欢在光滑表面产卵，仅在内侧保鲜膜上面产卵，作为产卵室。
[0010]进一步，由于亚洲玉米螟不能与气味室内的化合物直接接触，只能通过嗅觉来感受气味，以其产卵的多少作为对测试气味的产卵选择反应衡量标准。
[0011]进一步，步骤三所述的产卵生测的具体方法为:
[0012]取200 μ l待测化合物滴加在一端气味室的滤纸上作为处理端，并在另一端气味室的滤纸片上滴加同样体积的液体石蜡作为对照端，在每个产卵室放置5头雌蛾，实验在22:00之后进行，并于23:00之前将产卵装置放入暗室中，温度为24 ±1 °C、相对湿度≥80%，次日7:00之后分别记录在处理和对照端保鲜膜上所产的卵块数和卵粒数，每个化合物至少重复6次，即至少测定30头雌蛾的产卵量。
[0013]效果汇总
[0014]本发明测定了 8种供试化合物对亚洲玉米螟雌蛾产卵选择的影响，为研制亚洲玉米螟产卵引诱剂或者驱避剂提供了依据，探索了新的害虫防治手段。
【专利附图】
【附图说明】
[0015]图1是本发明实施例提供的玉米挥发物对亚洲玉米螟产卵行为影响的试验方法流程图；
[0016]图2是本发明实施例提供的8中供试样品的纯度和来源表；
[0017]图3是本发明实施例提供的产卵生测装置的结构示意图。
[0018]图中:l、Tr滤纸片；2、Ck滤纸片；3、气味室；4、保鲜膜；5、产卵室。
【具体实施方式】
[0019]为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
[0020]图1示出了本发明的玉米挥发物对亚洲玉米螟产卵行为影响的试验方法流程，如图所示，本发明是这样实现的，一种玉米挥发物对亚洲玉米螟产卵行为影响的试验方法包括以下步骤:
[0021]SlOl:亚洲玉米螟在人工气候箱用人工饲料饲养，连续繁殖多代，成虫羽化当天，将雄雌虫按不低于2:1 (至少5头雌虫)的比例放在养虫笼中自由交配，并喂以10%的蜂蜜水以补充营养，交配3天后的雌蛾作为实验的供试虫源；
[0022]S102:选取20种玉米挥发物标准化合物，将每种样品溶于液体石蜡中，在漩涡混合器中充分混合，其中8种化合物配5X 10_3g/ml~5X 10_9g/ml浓度系列(浓度以10倍递减)，置于冰箱中保存，以用于产卵选择行为测定；
[0023]S103:对供试虫源进行产卵生测。
[0024]进一步，步骤SlOl中人工气候箱温度为26°C _28°C、相对湿度大于80%，光周期为16L:8D。
[0025]进一步，如图2所示，步骤S103所述的产卵生测所用的产卵笼是由80目的铁纱网、直径为0.3cm的铁丝和两个直径13cm、高为1cm、底部镂空的圆柱形底座制作而成的高为20cm的圆柱形产卵笼，圆柱形底座内外两面用保鲜膜4覆盖，外侧保鲜膜内壁上分别粘贴一片直径为5cm的圆形滤纸片，分别滴加待测化合物和对照溶剂，作为气味室3，内侧保鲜膜上用昆虫针均匀的扎30个孔，便于挥发物透过小孔进入，亚洲玉米螟雌蛾喜欢在光滑表面产卵，仅在内侧保鲜膜上面产卵，作为产卵，5。
[0026]进一步，由于亚洲玉米螟不能与气味室内的化合物直接接触，只能通过嗅觉来感受气味，以其产卵的多少作为对测试气味的产卵选择反应衡量标准。
[0027]进一步，步骤S103所述的产卵生测的具体方法为:
[0028]取200 μ I待测化合物滴加在一端气味室的滤纸上作为处理端，并在另一端气味室的滤纸片上滴加同样体积的液体石蜡作为对照端，在每个产卵室放置5头雌蛾，实验在22:00之后进行，并于23:00之前将产卵装置放入暗室中，温度为24 土 I °C、相对湿度≥80%，次日7:00之后分别记录在处理和对照端保鲜膜上所产的卵块数和卵粒数，每个化合物至少重复6次，即至少测定30头雌蛾的产卵量。
[0029]下面结合附图和 具体实施例对本发明做进一步说明。
[0030]在没有释放气味化合物的条件下，亚洲玉米螟雌蛾在产卵笼两端的平均产卵量分别为243.8±35.7粒和274.8±52.6粒，两者差异不显著(X2=L 74 < χ 2α(ι5，工)，说明在此条件下玉米螟雌蛾产卵选择是随机的。
[0031]当在产卵笼一端的滤纸片上滴加200 μ I液体石蜡作为处理，另一端未滴加液体石蜡的滤纸作为空白对照时，两端平均产卵量分别为190.8±24.3粒和176.2±21.7粒，两者之间无显著差异(X2=0.50 < X2ckci5m),说明液体石蜡作为溶剂不会影响雌蛾产卵的随机选择性。
[0032]当青叶醇的浓度为5Χ 10_3g/ml，亚洲玉米螟在在处理端的平均产卵量显著少于对照端，对产卵表现为驱避作用；当浓度为5X10_4g/ml、5X10_5g/ml、5X10_6g/ml时，处理端的平均产卵量显著多于对照端，表现为引诱作用；当浓度为5X 10_7g/ml、5X 10_8g/ml时，对照端和处理端的平均产卵量没有显著差异，表明对产卵的选择性没有影响。当反-2-己烯醛浓度为5X l(T4g/ml、5X l(T5g/ml、5X l(T6g/ml、5X l(T7g/ml时，玉米螟在处理时的产卵量多于对照端，对产卵均表现为引诱作用；当浓度为5X10_8g/ml时，处理端和对照端的平均产卵量没有显著差异，表明对产卵的选择性没有影响。当顺-3-己烯基乙酸酯浓度为5X IOVml时，处理端的平均产卵量显著多于对照端，对产卵表现为引诱作用；当浓度为5X 10_4g/ml、5X 10_6g/ml、5X 10_7g/ml时,处理端和对照端的产卵量没有显著差异,表明对产卵的选择性没有影响。当壬醛浓度为5X10_3g/ml时，处理端的平均产卵量显著多于对照端，表现为引诱作用；当浓度为5X 10_4g/ml、5X 10_6g/ml、5X 10_7g/ml时,处理端和对照端的产卵量没有显著差异，说明对产卵的选择性没有影响。当苯甲醛浓度为5X10_3g/ml、5X 10_4g/ml、5X 10_5g/ml、5X 10_6g/ml时,玉米螟在处理端的平均产卵量显著少于对照端，表现出驱避作用；当浓度为5X10_7g/ml、5X10_8g/ml时，处理端的产卵量多于对照端，表现出引诱作用；当浓度为5X10_9g/ml时，对照和处理端产卵量没有显著差异，表明对产卵没有任何影响。当苯乙醛浓度为5X10_3g/ml时，处理端的产卵量显著少于对照端，对产卵表现出驱避作用；当浓度为5X10_7g/ml、5X10_8g/ml时，处理端产卵量多于对照端，表现为引诱作用；当他浓度为5Xl(r4g/ml、5X10-5g/ml、5X10-6g/ml、5X10-9g/ml时，对照端和处理端的产卵量差异不显著，说明对产卵无影响。当柠檬烯浓度为5X10_4g/ml时，处理端的产卵量显著少于对照端，对产卵表现为驱避作用；当浓度为5X10_6g/ml时，处理端产卵多于对照端，表现为引诱作用；当浓度为5X l(T5g/ml、5X l(T7g/ml时,处理端和对照端的产卵量没有显著差异，说明对产卵没有影响。当α-萜品烯浓度为5X10_6g/ml、5X10_7g/ml时，处理端的平均产卵量显著多于对照端，表现出引诱作用；当浓度为5X10_4g/ml、5X10_5g/ml、5XlOVml时，处理端和对照端产卵量均没有显著差异，说明对产卵没有影响。
[0033]总之，不同化合物对于亚洲玉米螟产卵的影响不同。在绿叶气味物质中，青叶醇、反-2-己烯醛在5X 10_4g/ml-5X 10_7g/ml浓度范围内，对产卵表现为引诱作用，而顺_3_己烯基乙酸酯仅当浓度为5X10_5g/ml时对产卵起引诱作用。芳香族化合物中，苯甲醛在5X l(T3g/ml-5X l(T8g/ml浓度范围内，对玉米螟的产卵选择性均有影响，而苯乙醒仅当浓度为5X 10_3g/ml、5X 10_7g/ml、5X 10_8g/ml时对产卵选择性有影响。萜类化合物中，当柠檬烯的浓度为5X 10_4g/ml、5X 10_ 6g/ml时对产卵选择性有影响，而α -萜品烯则是当浓度为5Χ l(T6g/ml、5X l(T7g/ml时对产卵选择性有影响。
[0034]上述虽然结合附图对本发明的【具体实施方式】进行了描述，但并非对本发明保护范围的限制，所属领域技术人员应该明白，在本发明的技术方案的基础上，本领域技术人员不需要付出创造性的劳动即可做出的各种修改或变形仍在本发明的保护范围之内。
【权利要求】
1.一种玉米挥发物对亚洲玉米螟产卵行为影响的试验方法，其特征在于，所述的玉米挥发物对亚洲玉米螟产卵行为影响的试验方法包括以下步骤: 步骤一、亚洲玉米螟在人工气候箱用人工饲料饲养，连续繁殖多代，成虫羽化当天，将雄雌虫按不低于2:1的比例放在养虫笼中自由交配，并喂以10%的蜂蜜水以补充营养，交配3天后的雌蛾作为实验的供试虫源； 步骤二、选取20种玉米挥发物标准化合物，将每种样品溶于液体石蜡中，在漩涡混合器中充分混合，其中8种化合物配5X 10_3g/ml~5X 10_9g/ml浓度系列，置于冰箱中保存，以用于产卵选择行为测定； 步骤三、对供试虫源进行产卵生测。
2.如权利要求1所述的玉米挥发物对亚洲玉米螟产卵行为影响的试验方法，其特征在于，步骤一中人工气候箱温度为26°C _28°C、相对湿度大于80%，光周期为16L:8D。
3.如权利要求1所述的玉米挥发物对亚洲玉米螟产卵行为影响的试验方法，其特征在于，步骤三所述的产卵生测所用的产卵笼是由80目的铁纱网、直径为0.3cm的铁丝和两个直径13cm、高为1cm、底部镂空的圆柱形底座制作而成的高为20cm的圆柱形产卵笼,圆柱形底座内外两面用保鲜膜覆盖，外侧保鲜膜内壁上分别粘贴一片直径为5cm的圆形滤纸片，分别滴加待测化合物和对照溶剂，作为气味室，内侧保鲜膜上用昆虫针均匀的扎30个孔，便于挥发物透过小孔进入，亚洲玉米螟雌蛾喜欢在光滑表面产卵，仅在内侧保鲜膜上面产卵，作为产卵室。
4.如权利要求1所 述的玉米挥发物对亚洲玉米螟产卵行为影响的试验方法，其特征在于，由于亚洲玉米螟不能与气味室内的化合物直接接触，只能通过嗅觉来感受气味，以其产卵的多少作为对测试气味的产卵选择反应衡量标准。
5.如权利要求1所述的玉米挥发物对亚洲玉米螟产卵行为影响的试验方法，其特征在于，步骤三所述的产卵生测的具体方法为: 取200 μ I待测化合物滴加在一端气味室的滤纸上作为处理端，并在另一端气味室的滤纸片上滴加同样体积的液体石蜡作为对照端，在每个产卵室放置5头雌蛾，实验在22:00之后进行，并于23:00之前将产卵装置放入暗室中，温度为24±1°C、相对湿度≥80%，次日7:00之后分别记录在处理和对照端保鲜膜上所产的卵块数和卵粒数，每个化合物至少重复6次，即至少测定30头雌蛾的产卵量。
6.如权利要求1所述的玉米挥发物对亚洲玉米螟产卵行为影响的试验方法，其特征在于，将雄雌虫按不低于2:1，至少5头雌虫的比例放在养虫笼中自由交配。
【文档编号】A01K67/033GK103782965SQ201410045581
【公开日】2014年5月14日 申请日期:2014年2月8日 优先权日:2014年2月8日
【发明者】董文霞, 肖春 申请人:云南农业大学