一种北美枫香优选单株叶片离体培养的培养基及培养方法
【专利摘要】本发明公开了一种北美枫香优选单株叶片为外植体的组织培养方法，同时还公开了相应的离体培养的培养基，有益之处在于：采用本发明的北美枫香优选单株叶片的离体培养的培养基和培养方法，能够减少外植体的使用量，同时进行愈伤组织分化方式培养，产生的不定芽更多，繁殖系数更高，在短期内能够生产出大量的优质种苗，大大提高了离体培养的效率，而且12天即可生根成活，生根率达到92%以上，移栽成活率高。
【专利说明】一种北美枫香优选单株叶片罔体培养的培养基及培养方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及植物培养组织进行快速繁殖的培养基和培养方法，具体涉及一种北美枫香优选单株叶片离体培养的培养基及培养方法。
【背景技术】
[0002]北美枫香(Liquidambar styraciflua)为金缕梅科落叶乔木,原产北美,在美国东南部有大量分布.大型阔叶树种，树高可达30m，春夏叶色暗绿，秋季叶色变为黄色、紫色或红色；落叶晚，在部分地区叶片挂树直至次年2月，因其生长迅速，花型独特，秋叶色彩斑斓，是良好的园林绿化和庭园观赏树种。领域内已经开展了大量播种、扦插繁殖和幼嫩枝条的芽为外植体的组培快繁研究，在现有繁殖技术中，组织培养繁殖的方法也已有报道，但报道中研究采用当年生嫩枝的芽为外植体的进行组培繁殖，存在使用外植体多，移栽成活率低，繁殖效率不高等问题，这些问题都是迫切需要解决的。
【发明内容】
[0003]为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种北美枫香优选单株叶片为外植体的组织培养方法，同时提供了相应的离体培养基，能够减少外植体的使用量，同时进行愈伤组织分化方式培养，产生的不定芽更多，繁殖系数更高，能够大大提高离体培养的效率，移栽成活率高。
[0004]为了实现上 述目标，本发明采用如下的技术方案:
[0005]—种北美枫香优选单株叶片离体培养的培养基，包括两种基本培养基，(I)、诱导愈伤组织形成的第一类基本培养基，每升第一类基本培养基中含有:硝酸钾1500-2000mg，硝酸铵1300-1700mg，磷酸二氢钾130_180mg，硫酸镁250_380mg，二水氯化钙440mg，碘化钾0.83mg,硼酸6.2mg,四水硫酸锰22.3mg,七水硫酸锌8.6mg, 二水钥酸钠0.25mg,五水硫酸铜0.025mg,氯化钴0.025mg,七水硫酸亚铁27.8mg,乙二胺四乙酸钠37.3mg,维生素 BI0.1mg,维生素 B60.5mg, VB50.5mg,甘氨酸 2.0mg,肌醇 IOOmg,鹿糖 30000mg,卡拉胶6500mg; (2)、用于分化增殖培养、壮苗培养、生根培养的第二类基本培养基，每升第二类基本培养基中含有:四水硝酸钙375-560mg，硝酸铵270_405mg，硫酸钾610_920mg，七水硫酸镁250-380mg，磷酸二氢钾120_180mg，二水氯化钙78_99mg，四水硫酸锰22.5mg,七水硫酸锌8.6mg,硼酸6.2mg,五水硫酸铜0.25mg, 二水钥酸钠0.25mg,七水硫酸亚铁34.1mg,乙二胺四乙酸钠46.611^,维生素1311.0mg,维生素B60.5mg, VB50.5mg,甘氨酸2.0mg,肌醇IOOmg,鹿糖20000mg,卡拉胶6500mg。
[0006]本发明还公开了一种北美枫香优选单株叶片的离体培养方法，包括如下步骤:
[0007]S1、按照权利要求1的组分和质量配制第一类基本培养基和第二类基本培养基；
[0008]S2、采用多年生一种北美枫香优选单株的当年生嫩叶片为外植体，经70%酒精消毒30-45秒，再用0.1%的升汞溶液灭菌6-8分钟，用无菌水冲洗3-5次；
[0009]S3、在超净的工作台上，无菌条件下，将消毒过的外植体接种在经消毒的含有诱导愈伤组织培养基的三角瓶中，先将三角瓶置于黑暗条件下15-20天后，再置于普通日光灯为光源、光照强度为20001x的环境中，每日光照15小时，温度20-25°C、湿度为50%_60%，培养35天，长成愈伤组织；
[0010]所述的诱导愈伤组织培养基为:每升第一类基本培养基中还含有:玉米素0.1-0.5mg、6_ 苄基嘿呤 0.8-1.2mg、α -蔡乙酸 0.2-0.3mg、2, 4- 二氣苯氧乙酸 0.6-1.0mg ；
[0011]S4、将步骤S3培养得到的愈伤组织，剪切，转接于经消毒的含有分化增殖培养基的三角瓶中，进行增殖培养，分化长成试管芽苗，直至达到所需要的生产规模；
[0012]所述的分化增殖培养基为:每升第二类基本培养基中还含有:玉米素0.5-1.0mg,6-苄基嘌呤 1.2-1.5mg、α -萘乙酸 0.1-0.15mg ；
[0013]S5、将步骤S4培养得到的试管芽苗，剪切，接种于经消毒的含有壮苗培养基的三角瓶中，进行壮苗培养30天，得到试管壮苗；
[0014]所述的壮苗培养基为:每升第二类基本培养基中还含有:玉米素0.3-0.8mg、6_苄基嘿呤 0.5-1.5mg、α -蔡乙酸 0.05-0.15mg ；
[0015]S6、将步骤S5培养得到的试管壮苗，去掉基部愈伤组织和部分叶片，留3片叶片，接种于经消毒的含有生根培养培养基的三角瓶中，进行生根培养7-10天，得到生根小苗；
[0016]所述的生根培养基为:每升第二类基本培养基中还含有:α -萘乙酸0.2-0.5mg、吲哚乙酸0.5-0.7mg和柠檬酸50-100mg ；
[0017]S7、将步骤S6中生长的生根小苗，取出清洗，移栽到泥炭、黄心土、砻糠灰体积比为1:2:1的混合 基质中，浇透水，保持温度28°C左右，相对湿度85%以上，前7天遮光70%，后逐渐见光，12天后生根成活，生根率达92%以上，30天左右，全光照。
[0018]为了提高培养效率和成活率，前述的所有培养基的pH值均调至5.6，这里所述的所有培养基包括第一类基本培养基、第二类基本培养基、诱导愈伤组织培养基、分化增殖培养基、壮苗培养基及生根培养基。优选地，采用氨水或者稀盐酸对pH值进行调节，以减少对小苗培养的干扰和影响。
[0019]本发明的有益之处在于:采用本发明的北美枫香优选单株叶片离体培养的培养基和培养方法，能够减少外植体的使用量，同时进行愈伤组织分化方式培养，产生的不定芽更多，繁殖系数更高，在短期内能够生产出大量的优质种苗，大大提高了离体培养的效率，而且12天即可生根成活，生根率达到92%以上，移栽成活率高。
【具体实施方式】
[0020]以下结合附表和具体实施例对本发明作具体的介绍。
[0021 ] 无特殊说明，本发明中所采用的原料均为市购。
[0022]实施例1
[0023]首先，按照表1和表2的物质种类和质量，配制第一类基本培养基和第二类基本培养基，配制过程中不断搅拌确保各组分充分溶解。
[0024]
【权利要求】
1.一种北美枫香优选单株叶片离体培养的培养基，其特征在于，包括两种基本培养基，(I)、诱导愈伤组织形成的第一类基本培养基，每升第一类基本培养基中含有:硝酸钾1500-2000mg,硝酸铵 1300_1700mg，磷酸二氢钾 130_180mg，硫酸镁 250_380mg，二水氯化钙440mg,碘化钾0.83mg,硼酸6.2mg,四水硫酸猛22.3mg,七水硫酸锌8.6mg, 二水钥酸钠0.25mg,五水硫酸铜0.025mg,氯化钴0.025mg,七水硫酸亚铁27.8 mg,乙二胺四乙酸钠37.3 mg，维生素 BI 0.1 mg，维生素 B6 0.5 mg, VB5 0.5 mg，甘氨酸 2.0 mg，肌醇 100 mg,蔗糖30000 mg，卡拉胶6500 mg ; (2)、用于分化增殖培养、壮苗培养、生根培养的第二类基本培养基，每升第二类基本培养基中含有:四水硝酸钙375-560mg，硝酸铵270-405 mg，硫酸钾610-920 mg，七水硫酸镁250-380 mg，磷酸二氢钾120_180mg，二水氯化钙78-99 mg，四水硫酸锰22.5 mg，七水硫酸锌8.6 mg，硼酸6.2 mg，五水硫酸铜0.25 mg，二水钥酸钠0.25mg,七水硫酸亚铁34.1 mg,乙二胺四乙酸钠46.6 mg,维生素B1 1.0 mg,维生素B6 0.5 mg,VB5 0.5 mg，甘氨酸 2.0 mg,肌醇 100 mg,鹿糖 20000 mg,卡拉胶 6500 mg。
2.一种北美枫香优选单株叶片的离体培养方法，其特征在于，包括如下步骤: 51、按照权利要求1的组分和质量，配制第一类基本培养基和第二类基本培养基； 52、采用多年生一种北美枫香优选单株的当年生嫩叶片为外植体，经70%酒精消毒30-45秒，再用0.1%的升汞溶液灭菌6-8分钟，用无菌水冲洗3-5次； 53、在超净的工作台上，无菌条件下，将消毒过的外植体接种在经消毒的含有诱导愈伤组织培养基的三角瓶中，先将三角瓶置于黑暗条件下15-20天后，再置于普通日光灯为光源、光照强度为20001x的环境中，每日光照15小时，温度20-25°C、湿度为50%_60%，培养35天，长成愈伤组织； 所述的诱导愈伤组织培养 基为:每升第一类基本培养基中还含有:玉米素0.1-0.5mg、6-苄基嘌呤 0.8-1.2 mg、α -萘乙酸 0.2-0.3 mg、2，4- 二氯苯氧乙酸 0.6-1.0 mg ； 54、将步骤S3培养得到的愈伤组织，剪切，转接于经消毒的含有分化增殖培养基的三角瓶中，进行增殖培养，分化长成试管芽苗，直至达到所需要的生产规模； 所述的分化增殖培养基为:每升第二类基本培养基中还含有:玉米素0.5-1.0mg、6-苄基嘿呤 1.2-1.5 mg、α -蔡乙酸 0.1-0.15 mg ； 55、将步骤S4培养得到的试管芽苗，剪切，接种于经消毒的含有壮苗培养基的三角瓶中，进行壮苗培养30天，得到试管壮苗； 所述的壮苗培养基为:每升第二类基本培养基中还含有:玉米素0.3-0.8 mg、6-苄基嘿呤 0.5-1.5 mg、α -蔡乙酸 0.05-0.15 mg ； 56、将步骤S5培养得到的试管壮苗，去掉基部愈伤组织和部分叶片，留3片叶片，接种于经消毒的含有生根培养培养基的三角瓶中，进行生根培养7-10天，得到生根小苗； 所述的生根培养基为:每升第二类基本培养基中还含有:α -萘乙酸0.2-0.5 mg、吲哚乙酸 0.5-0.7 mg 和朽1 樣酸 50-100 mg ； 57、将步骤S6中生长的生根小苗，取出清洗，移栽到泥炭、黄心土、砻糠灰体积比为1:2:1的混合基质中，浇透水，保持温度28°C左右，相对湿度85%以上，前7天遮光70%，后逐渐见光，12天后生根成活，生根率达92%以上，30天左右，全光照。
3.根据权利要求2所述的一种北美枫香优选单株叶片的离体培养方法，其特征在于，所有培养基的PH值均调至5.6。
4.根据权利要求3所述 的一种北美枫香优选单株叶片的离体培养方法，其特征在于，采用氨水或稀盐酸对培养基的PH值进行调节。
【文档编号】A01H4/00GK103858766SQ201410117416
【公开日】2014年6月18日 申请日期:2014年3月27日 优先权日:2014年3月27日
【发明者】蒋泽平, 魏峰, 潘林, 胡玲, 董筱昀, 黄利斌, 施燕平, 卞亚文, 是丰, 袁丹, 姜维华, 蒋政阳, 陈小波, 胡萍, 张中伟 申请人:江苏省林业科学研究院, 江苏金锋农业科技有限公司, 常州市武进区林业工作站