专利名称：一种超临界流体萃取路路通酸的方法
技术领域：
本发明涉及一种超临界流体萃取路路通酸的方法，具体而言，是一种采用超临界 CO2流体和柱层析方法结合从路路通中萃取路路通酸的方法。
背景技术：
路路通为金缕梅科植物枫香树Liquidamtar formosana Hance的干燥成熟果序， 始载于《本草纲目拾遗》。传统医学认为它有祛风除湿、疏肝活络、利水通经之功效，用于治疗关节痹痛、麻木拘挛、水肿胀满、乳少经闭等症。现代药理研究表明，它有保肝、抑制关节炎肿胀、消炎、消毒等作用。临床上，路路通主要用于止痛、利尿、通乳、抗痉挛及治疗荨麻疹、风疹等皮肤病。路路通酸(Liquidambaric acid)，又名白桦脂酮酸，分子式为C3tlH46O3, 分子量454. 68，在路路通中含量为0. 057-0. 319%。刘婷等研究表明路路通酸10、20mg/kg 能明显对抗角叉菜胶引起的小鼠足肿胀，10mg/kg能明显对抗醋酸(H+)所致小鼠腹腔毛细血管通透性亢进并降低小鼠的扭体次数。目前尚未搜索到利用超临界流体萃取路路通酸的工艺报道。超临界流体萃取分离过程的原理是利用超临界流体的溶解能力与其密度的关系， 即利用压力和温度对超临界流体溶解能力的影响而进行的。将超临界流体与待分离的物质接触，使其有选择性地把极性大小、沸点高低和分子量大小的成分依次萃取出来。目前使用最广泛的流体是CO2，因为它无毒、无嗅、无害，再超临界状态(7.3MPa，31°C)中具有强溶解力，该溶解力又随压力和温度的改变而变化，因而具有高选择性，可对被提取物中的活性有效成分进行选择性提取，因此和常规的化学溶剂提取法比，它具有高提取率、操作简便自动化程度高、无化学残留和重金属残留等优点，被称为“绿色”环保提取工艺，现已在药物、食品、生化等领域广泛应用。
发明内容
本发明的目的是提供一种利用超临界组合技术从路路通中提取路路通酸的方法。为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下一种超临界流体萃取路路通酸的方法，其特征在于主要包括以下步骤a)将路路通粉碎成粗粉，然后将原料放入超临界CO2萃取罐内，向萃取罐内泵入 CO2和夹带剂乙酸乙酯，萃取压力为33-56MPa，萃取温度为35_78°C，提取时间2_4小时，解析压力为4-9MPa，解析温度为30-50°C，得路路通酸萃取物；b)将路路通萃取物用少量90%乙醇分散，与少量柱层析填料拌样，挥干，上柱层析，乙酸乙酯-乙醇G 1-1 1)洗脱，收集洗脱液，减压浓缩为浸膏；c)将浸膏用乙醇加热回流溶解，冷却结晶，滤出晶体，再采用两相溶剂法重结晶， 所用重结晶溶剂为二氯甲烷-甲醇、石油醚-丙酮、二氯甲烷-乙酸乙酯中的任意一种。所述步骤(b)中柱层析填料可采用大孔树脂或硅胶，选用树脂为DlOl或AB-8，选用硅胶目数为100-300目。
所述步骤(c)中重结晶溶剂二氯甲烷-甲醇的体积比为15-8 1。所述步骤(c)中重结晶溶剂石油醚-丙酮的体积比为8-2 1。所述步骤(c)中重结晶溶剂二氯甲烷-乙酸乙酯的体积比为15-8 1。本发明的优点在于1、步骤少，耗时短，得率高，易于小规模化生产；2、工序简单，易于控制，分离效率高；3、本发明制备得到的高纯度路路通酸可为路路通酸的进一步开发利用提供药理原料、理论和实践支持。
具体实施例方式实施例1 称取路路通200g加入超临界CO2萃取罐内，先用500ml乙醇润湿，在萃取温度 78 0C，分离塔温度调至45 °C，萃取压力45MPa，分离器解析压力为8MPa，进入储罐用高压计量泵将CO2和20ml乙酸乙酯送入预热器，通过预热器到指定温度和压力，CO2流速为500ml/ min，连续动态提取2小时。停机后放出萃取物1. 7g，将萃取物分散于10ml90 %乙醇中，与少量DlOl大孔树脂拌样，挥干，上柱体积IL的DlOl大孔树脂柱，先用2L去离子水洗脱，再用乙酸乙酯-乙醇4 1、乙酸乙酯-乙醇3 1洗脱，收集路路通酸洗脱液，减压浓缩为浸膏，用乙醇加热回流溶解，冷却结晶，滤出晶体，再用二氯甲烷-甲醇(9 1)重结晶，滤出晶体，干燥得成品:346mg(路路通酸含量为98. 4% )。实施例2 称取路路通200g加入超临界CO2萃取罐内，先用500ml乙醇润湿，在萃取温度 55°C，分离塔温度调至36°C，萃取压力38MPa，分离器解析压力为5MPa，进入储罐用高压计量泵将CO2和20ml乙酸乙酯送入预热器，通过预热器到指定温度和压力，CO2流速为500ml/ min，连续动态提取4小时。停机后放出萃取物1.9g，将萃取物分散于10ml90 %乙醇中，与少量200目硅胶拌样，挥干，上柱体积IL的中压硅胶柱，先用2L去离子水洗脱，再用乙酸乙酯-乙醇4 1、乙酸乙酯-乙醇2 1洗脱，收集路路通酸洗脱液，减压浓缩为浸膏，用乙醇加热回流溶解，冷却结晶，滤出晶体，再用二氯甲烷-乙酸乙酯(10 1)重结晶，滤出晶体，干燥得成品338mg(路路通酸含量为98. 2% )。实施例3 称取路路通300g加入超临界CO2萃取罐内，先用500ml乙醇润湿，在萃取温度 43°C，分离塔温度调至32°C，萃取压力56MPa，分离器解析压力为7MPa，进入储罐用高压计量泵将CO2和45ml乙酸乙酯送入预热器，通过预热器到指定温度和压力，CO2流速为500ml/ min，连续动态提取2小时。停机后放出萃取物2. 5g，将萃取物分散于17ml90 %乙醇中，与少量AB-8大孔树脂拌样，挥干，上柱体积IL的AB-8大孔树脂柱，先用2L去离子水洗脱，再用乙酸乙酯-乙醇3 1、乙酸乙酯-乙醇1 1洗脱，收集路路通酸洗脱液，减压浓缩为浸膏，用乙醇加热回流溶解，冷却结晶，滤出晶体，再用石油醚-丙酮(6 1)重结晶，滤出晶体，干燥得成品509mg(路路通酸含量为98. 7% )。实施例4 称取路路通500g加入超临界CO2萃取罐内，先用500ml乙醇润湿，在萃取温度64°C，分离塔温度调至50°C，萃取压力43MPa，分离器解析压力为5MPa，进入储罐用高压计量泵将(X)2和60ml乙酸乙酯送入预热器，通过预热器到指定温度和压力，CO2流速为500ml/ min，连续动态提取3小时。停机后放出萃取物4. 2g，将萃取物分散于23ml90 %乙醇中，与少量DlOl大孔树脂拌样，挥干，上柱体积2L的DlOl大孔树脂柱，先用2L去离子水洗脱，再用乙酸乙酯-乙醇4 1、乙酸乙酯-乙醇1 1洗脱，收集路路通酸洗脱液，减压浓缩为浸膏，用乙醇加热回流溶解，冷却结晶，滤出晶体，再用二氯甲烷-甲醇(14 1)重结晶，滤出晶体，干燥得成品865mg(路路通酸含量为98. 5% )。实施例5 称取路路通600g加入超临界CO2萃取罐内，先用500ml乙醇润湿，在萃取温度 52°C，分离塔温度调至33°C，萃取压力33MPa，分离器解析压力为6MPa，进入储罐用高压计量泵将(X)2和65ml乙酸乙酯送入预热器，通过预热器到指定温度和压力，CO2流速为500ml/ min，连续动态提取2小时。停机后放出萃取物5. lg，将萃取物分散于35ml90 %乙醇中，与少量150目硅胶拌样，挥干，上柱体积2L的中压硅胶柱，先用2L去离子水洗脱，再用乙酸乙酯-乙醇4 1、乙酸乙酯-乙醇2 1洗脱，收集路路通酸洗脱液，减压浓缩为浸膏，用乙醇加热回流溶解，冷却结晶，滤出晶体，再用二氯甲烷-乙酸乙酯(8 1)重结晶，滤出晶体，干燥得成品1. 03g (路路通酸含量为98. 8% )。实施例6 称取路路通800g加入超临界CO2萃取罐内，先用500ml乙醇润湿，在萃取温度 47°C，分离塔温度调至30°C，萃取压力47MPa，分离器解析压力为4MPa，进入储罐用高压计量泵将⑶2和IlOml乙酸乙酯送入预热器，通过预热器到指定温度和压力，CO2流速为 500ml/min，连续动态提取4小时。停机后放出萃取物7. 0g，将萃取物分散于42ml90%乙醇中，与少量AB-8大孔树脂拌样，挥干，上柱体积2L的AB-8大孔树脂柱，先用2L去离子水洗脱，再用乙酸乙酯-乙醇3 1、乙酸乙酯-乙醇1 1洗脱，收集路路通酸洗脱液，减压浓缩为浸膏，用乙醇加热回流溶解，冷却结晶，滤出晶体，再用二氯甲烷-甲醇(12 1)重结晶，滤出晶体，干燥得成品1. 33g (路路通酸含量为98. 6% )。实施例7 称取路路通Ikg加入超临界(X)2萃取罐内，先用500ml乙醇润湿，在萃取温度41 °C， 分离塔温度调至34°C，萃取压力56MPa，分离器解析压力为9MPa，进入储罐用高压计量泵将 CO2和IlOml乙酸乙酯送入预热器，通过预热器到指定温度和压力，CO2流速为500ml/min， 连续动态提取3小时。停机后放出萃取物8. 5g，将萃取物分散于51ml90%乙醇中，与少量 DlOl大孔树脂拌样，挥干，上柱体积3L的DlOl大孔树脂柱，先用2L去离子水洗脱，再用乙酸乙酯-乙醇3 1、乙酸乙酯-乙醇2 1洗脱，收集路路通酸洗脱液，减压浓缩为浸膏， 用乙醇加热回流溶解，冷却结晶，滤出晶体，再用二氯甲烷-乙酸乙酯(13 1)重结晶，滤出晶体，干燥得成品1.70g(路路通酸含量为99. )。实施例8 称取路路通Ikg加入超临界0)2萃取罐内，先用500ml乙醇润湿，在萃取温度38°C， 分离塔温度调至31°C，萃取压力47MPa，分离器解析压力为8MPa，进入储罐用高压计量泵将 CO2和130ml乙酸乙酯送入预热器，通过预热器到指定温度和压力，(X)2流速为500ml/min，连续动态提取4小时。停机后放出萃取物8. 4g，将萃取物分散于67ml90%乙醇中，与少量100目硅胶拌样，挥干，上柱体积3L的中压硅胶柱，先用2L去离子水洗脱，再用乙酸乙酯-乙醇 4 1、乙酸乙酯-乙醇2 1洗脱，收集路路通酸洗脱液，减压浓缩为浸膏，用乙醇加热回流溶解，冷却结晶，滤出晶体，再用二氯甲烷-甲醇(10 1)重结晶，滤出晶体，干燥得成品 1.72g(路路通酸含量为98.3% )0
权利要求
1.一种超临界流体萃取路路通酸的方法，其特征在于主要包括以下步骤a)将路路通粉碎成粗粉，然后将原料放入超临界(X)2萃取罐内，向萃取罐内泵入(X)2和夹带剂乙酸乙酯，萃取压力为33-56MPa，萃取温度为35-78°C，提取时间2-4小时，解析压力为4-9MPa，解析温度为30-50°C，得路路通酸萃取物；b)将路路通萃取物用少量90%乙醇分散，与少量柱层析填料拌样，挥干，上柱层析，乙酸乙酯-乙醇G 1-1 1)洗脱，收集洗脱液，减压浓缩为浸膏；c)将浸膏用乙醇加热回流溶解，冷却结晶，滤出晶体，再采用两相溶剂法重结晶，所用重结晶溶剂为二氯甲烷-甲醇、石油醚-丙酮、二氯甲烷-乙酸乙酯中的任意一种。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(b)中柱层析填料可采用大孔树脂或硅胶，选用树脂为DlOl或AB-8，选用硅胶目数为100-300目。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(c)中重结晶溶剂二氯甲烷-甲醇的体积比为15-8 1。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(c)中重结晶溶剂石油醚-丙酮的体积比为8-2 1。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(c)中重结晶溶剂二氯甲烷-乙酸乙酯的体积比为15-8 1。
全文摘要
一种超临界流体萃取路路通酸的方法，涉及一种从路路通中利用超临界CO2萃取路路通酸的方法。其具体工艺流程为将路路通粉碎，然后将原料放入萃取罐中，然后通过超临界CO2高压泵注入CO2，乙酸乙酯作夹带剂，高压泵萃取压力为33-56MPa，萃取温度为35-78℃，提取时间2-4小时，解析压力为4-9MPa，解析温度为30-50℃，得路路通酸萃取物，将萃取物加入层析柱中纯化，乙酸乙酯-乙醇洗脱，得到路路通酸粗提物，浓缩，无水乙醇回流溶解结晶，滤出晶体，干燥得路路通酸。本发明适合小规模生产。
文档编号C07J53/00GK102477062SQ20101055779
公开日2012年5月30日 申请日期2010年11月25日 优先权日2010年11月25日
发明者刘东锋, 李法庆 申请人:苏州宝泽堂医药科技有限公司