一种铁皮石斛的杂交授粉方法
【专利摘要】本发明涉及一种简捷高效铁皮石斛的杂交授粉方法。该方法包括1）花粉的收集；2）铁皮石斛花汁的制备；3）花粉悬浊液的制备；4）授粉；5）坐果后期管理。本发明将花粉粒与铁皮石斛花汁超声均质后得到铁皮石斛花粉团悬浊液，使用胶头滴管将铁皮石斛花粉团悬浊液对铁皮石斛花进行授粉，避免了对母本的柱头的损伤，且坐果率高（98.2%以上）、无空果存在，坐果120d即可获得成熟的石斛蒴果，果实均匀饱满。本发明具有简捷高效、可操作性强的特点，授粉效率为传统授粉方法的5~10倍，大大提高了铁皮石斛授粉的效率，应用价值极高，为铁皮石斛的人工授粉开辟了一条高速有效的新途径。
【专利说明】一种铁皮石斛的杂交授粉方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种珍稀药用植物的杂交繁殖方法，具体是一种铁皮石斛的杂交授粉方法。
【背景技术】
[0002]铁皮石斛(Demdrobium of ficinale)为兰科石斛属多年生草本植物,是我国传统名贵珍稀中药材，具有养胃生津、滋阴清热、提高人体免疫力等功效。目前，铁皮石斛已被列为国家重点保护药用植物、世界二类保护植物。
[0003]铁皮石斛花因其特殊的生理结构使得自然条件下铁皮石斛的结果率极低，铁皮石斛一般5月为盛花期，花期l(Tl5d，其果实为蒴果，成熟时容易裂开，种子随风飘荡散落，这些细小的种子的种皮内只含未成熟的胚，不含胚乳，自然繁殖十分困难。随着现代植物组培技术的发展，人们通过组培技术来进行石斛种胚的萌发繁育已经变的相当成熟。石斛种胚的获得已经成为铁皮石斛产业化发展的因素之一，目前石斛种胚的获得主要通过传统人工授粉而得到，传统人工授粉方法具有操作技术要求高、场地性要求苛刻、劳动强度大、生产效率低、坐果率低下和空果率高等缺点。如2009年9月23日公开的申请号为200910010107.3的中国发明专利申请《铁皮石斛杂交授粉方法》，提供了一种石斛杂交技术，但是它在授粉过程中需要人工用镊子将父本的花粉粒送至母本的柱头窝内，操作时容易对柱头造成物理损伤，且采用此法坐果率最高不超过80.6%。因此简单高效的铁皮石斛杂交授粉方法还有待进一步的研发。
【发明内容】
[0004]本发明所要解决的技术问题是提供一种简捷高效、可操作性强的铁皮石斛的杂交授粉方法，可大大提闻铁皮石解授粉的效率。
[0005]本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为:一种铁皮石斛的杂交授粉方法，其特征在于包括以下步骤:
1)花粉的收集:剪取花期在r7d的铁皮石斛花，分别收集花粉粒和铁皮石斛花；
2)铁皮石斛花汁的制备:将上述收集的铁皮石斛花清洗晾干后制取铁皮石斛花汁；
3)花粉悬浊液的制备:将步骤I)收集的花粉粒加入到步骤2)制取的铁皮石斛花汁中后，利用超声均质制得铁皮石斛花粉粒团悬浊液；
4)授粉:使用胶头滴管将铁皮石斛花粉粒团悬浊液对盛开4~7d的铁皮石斛花进行授粉，每朵铁皮石斛花柱头确保滴入2~4个铁皮石斛花粉粒团；
5)坐果后期管理。
[0006]作 为改进，所述步骤I)的花粉的收集的具体过程为:剪取花期在4~7(1的铁皮石斛花，均匀分散至洁净白瓷盘中，于25~28°C、18(T230r/min在摇床中处理3(T60min后，分别收集白瓷盘中的花粉粒和铁皮石斛花。
[0007]作为改进，所述步骤2)的铁皮石斛花汁的制备的具体过程为:将清洗晾干后的铁皮石斛花放入沙冰机中搅拌2~3min，然后通过12(Tl60目的筛网获取滤液后，在滤液中加入滤液体积0.5^1.5倍的去离子水得到铁皮石斛花汁。
[0008]再改进，所述步骤5)的坐果后期管理为:坐果l(Tl5d后统计坐果率，坐果15~20d进行疏果以确保蒴果生长所需的正常养分，后期管理按正常方式进行管理。120d即可获得成熟的石斛蒴果。
[0009]优选，所述步骤3)中超声均质中超声波频率为10-40ΚΗζ，超声波功率为10(T400W，超声处理时间为30-45秒，以IL物料为基准。
[0010]最后，所述步骤3)中超声均质采用超声波均质仪、超声波振荡仪或者超声波清洗仪。
[0011]与现有技术相比，本发明的优点在于:本发明将花粉粒与铁皮石斛花汁超声均质后得到铁皮石斛花粉粒团悬浊液，使用胶头滴管将铁皮石斛花粉粒团悬浊液对铁皮石斛花进行授粉，避免了对母本的柱头的损伤，且坐果率高(98.2%以上)、无空果存在，坐果120d即可获得成熟的石斛蒴果，果实均匀饱满。本发明具有简捷高效、可操作性强的特点，授粉效率为传统授粉方法的5~10倍，大大提高了铁皮石斛授粉的效率，应用价值极高，为铁皮石斛的人工授粉开辟了一条高速有效的新途径。
【具体实施方式】
[0012]以下结合实施例对本发明作进一步详细描述。
[0013]实施例一:剪取花期在4d的铁皮石斛花，均匀分散至洁净白瓷盘中，置于25°C，180r/min的摇床中处理30min后，收集白瓷盘中的花粉粒和铁皮石斛花；将收集到的铁皮石斛花清洗晾干后，放入沙冰机中搅拌3min，然后通过160目的筛网获取滤液后，在滤液中加入滤液体积1.5倍的去离子水制成铁皮石斛花汁；然后将获得的花粉粒加入到铁皮石斛花汁中，置于超声波清洗仪中超声处理30s，超声波频率20KHz，超声波功率200W，以IL物料为基准，利用超声均质制得铁皮石斛花粉粒团悬浊液；之后使用胶头滴管利用铁皮石斛花粉粒团悬浊液对盛开7d的铁皮石斛花进行授粉，每朵铁皮石斛花柱头确保滴入4个铁皮石斛花粉粒团，平均每人每天可授粉2000朵花左右，是传统授粉效率的5~7倍；坐果IOd后统计坐果率，坐果率为98.2%，15d后进行疏果，后期进行按照正常的养护方式进行管理。120d后得到成熟的果荚，其空果率为0%。
[0014]实施例二:剪取花期在7d的铁皮石斛花，均匀分散至洁净白瓷盘中，置于27°C，230r/min的摇床中处理60min后，收集白瓷盘中的花粉粒和铁皮石斛花；将收集到的铁皮石斛花清洗晾干后，放入沙冰机中搅拌3min，然后通过120目的筛网获取滤液后，在滤液中加入滤液体积0.5倍的去离子水制成铁皮石斛花汁；然后将获得的花粉粒加入到铁皮石斛花汁中，置于超声波均质仪中超声处理45s，超声波频率30KHz，超声波功率300W，以IL物料为基准，制得铁皮石斛花粉粒团悬浊液；之后使用胶头滴管利用铁皮石斛花粉粒团悬浊液对盛开5d的铁皮石斛花进行授粉，每朵铁皮石斛花柱头确保滴入3个铁皮石斛花粉粒团，平均每人每天可授粉2000朵花左右，是传统授粉效率的5~7倍；坐果15d后统计坐果率，坐果率为99.7%，20d后进行疏果，后期进行按照正常的养护方式进行管理。120d后得到成熟的果荚，其空果率为0%。
[0015]实施例三:取花期在5d的铁皮石斛花，均匀分散至洁净白瓷盘中，置于26 °C，200r/min的摇床中处理45min后，收集白瓷盘中的花粉粒和铁皮石斛花；将收集到的铁皮石斛花清洗晾干后，放入沙冰机中搅拌2.5min，然后通过140目的筛网获取滤液后，在滤液中加入滤液体积I倍的去离子水制成铁皮石斛花汁；然后将获得的花粉粒加入到铁皮石斛花汁中，置于超声波清洗仪中超声处理40s，超声波频率40KHz，超声波功率400W，以IL物料为基准，制得铁皮石斛花粉粒团悬浊液；之后使用胶头滴管利用铁皮石斛花粉粒团悬浊液进行授粉，每朵铁皮石斛花柱头确保滴入2个铁皮石斛花粉粒团，平均每人每天可授粉3000朵花左右，是传统授粉效率的疒10倍；坐果12d后统计坐果率，坐果率为99.5%，18d后进行疏果，后期进行按照正常的养护方式进行管理。120d后得到成熟的果荚，其空果率为0%。
【权利要求】
1.一种铁皮石斛的杂交授粉方法，其特征在于包括以下步骤: 1)花粉的收集:剪取花期在r7d的铁皮石斛花，分别收集花粉粒和铁皮石斛花； 2)铁皮石斛花汁的制备:将上述收集的铁皮石斛花清洗晾干后制取铁皮石斛花汁； 3)花粉悬浊液的制备:将步骤I)收集的花粉粒加入到步骤2)制取的铁皮石斛花汁中后，利用超声均质制得铁皮石斛花粉粒团悬浊液； 4)授粉:使用胶头滴管将铁皮石斛花粉粒团悬浊液对盛开4~7d的铁皮石斛花进行授粉，每朵铁皮石斛花柱头确保滴入2~4个铁皮石斛花粉粒团； 5)坐果后期管理。
2.根据权利要求1所述的杂交授粉方法，其特征在于:所述步骤I)的花粉的收集的具体过程为:剪取花期在4~7(1的铁皮石斛花，均匀分散至洁净白瓷盘中，于25~28°C、18(T230r/min在摇床中处理3(T60min后，分别收集白瓷盘中的花粉粒和铁皮石斛花。
3.根据权利要求1或2所述的杂交授粉方法，其特征在于:所述步骤2)的铁皮石斛花汁的制备的具体过程为:将清洗晾干后的铁皮石斛花放入沙冰机中搅拌2~3min，然后通过120^160目的筛网获取滤液后，在滤液中加入滤液体积0.5^1.5倍的去离子水得到铁皮石斛花汁。
4.根据权利要 求3所述的杂交授粉方法，其特征在于:所述步骤5)的坐果后期管理为:坐果l(Tl5d后统计坐果率，坐果15~20d进行疏果以确保蒴果生长所需的正常养分，后期管理按正常方式进行管理。
5.根据权利要求3所述的杂交授粉方法，其特征在于:所述步骤3)中超声均质中超声波频率为10-40ΚΗζ，超声波功率为10(T400W，超声处理时间为30~45秒，以IL物料为基准。
6.根据权利要求1所述的杂交授粉方法，其特征在于:所述步骤3)中超声均质采用超声波均质仪、超声波振荡仪或者超声波清洗仪。
【文档编号】A01H1/02GK103891602SQ201410126179
【公开日】2014年7月2日 申请日期:2014年4月1日 优先权日:2014年4月1日
【发明者】汤李琼, 金九洲, 李振达 申请人:浙江欧银农业发展有限公司