一种条斑紫菜种质扩繁方法
【专利摘要】本发明涉及一种条斑紫菜种质扩繁方法，包括：将条斑紫菜种质装入培养瓶，加入培养液，使得培养液中条斑紫菜种质密度为0.80～1.6g/1000mL，用保鲜膜封口，进行充气悬浮扩繁培养，扩繁培养管理，适时切割或分瓶，不断扩繁。本发明方法可操控性强，扩繁效率高。
【专利说明】一种条斑紫菜种质扩繁方法
【技术领域】
[0001]本发明属于种质扩繁领域，特别涉及一种条斑紫菜种质扩繁方法。
【背景技术】
[0002]紫菜的生活史有宏观的叶状体阶段和微观的丝状体阶段。条斑紫菜(P.yezoensisUeda)的丝状体是生活史中的一个重要阶段，条斑紫菜叶状体游离的营养组织片在一定培养条件下，叶状体细胞未经雌雄配子结合的途径，直接形成的丝状体，在培养液中悬浮生长，这种丝状体称为自由丝状体(f ree-living conchoeelis),这种丝状体通常称为条斑紫菜种质。条斑紫菜自由丝状体(种质)具有体积小、增殖快、耐受性高、易于培养和调控生长发育的特点。在人为控制的条件下，能够长期保持营养增殖而不发育的状态，又可以通过改变培养条件，在短时间内迅速数量扩增或发育成熟，是紫菜种质保存和良种利用的最佳形式。
[0003]条斑紫菜种质扩繁是指在人为控制的条件下，使种质材料的量在短时间内快速增加，并且种质保持长期营养增殖而不发育状态的培养方式。条斑紫菜种质快速扩繁主要具有下面3个方面的意义:(I)储备充足的种质材料量，有效实施条斑紫菜种质资源的保护；
(2)为条斑紫菜种质良种推广应用提供充足的种子；(3)为紫菜种质品系的选育、杂交等人工育种提供基础亲本材料；(4)为进行紫菜的遗传背景等进行了广泛和深入研究，进行紫菜遗传变异水平的检验、优良品系的鉴定等打下基础。
[0004]根据我国的条斑紫菜科研成果和生产实际情况，同时以近年来“国家级紫菜种质库”科技人员在条斑紫菜优良种质扩繁和栽培良种推广应用中积累的经验和技术为基础，研究建立了条斑紫菜种质快速扩繁技术方法。快速扩繁技术方法对促进条斑紫菜种质资源的有效保护研究和应用，提高紫菜产业经济效益和社会效益，推动产业健康持续发展有重要意义。
【发明内容】
[0005]本发明所要解决的技术问题是提供一种条斑紫菜种质扩繁方法，该方法可操作性强，扩繁效率高。
[0006]本发明的一种条斑紫菜种质扩繁方法，包括:
[0007]将条斑紫菜种质装入培养瓶，加入培养液，使得培养液中条斑紫菜种质密度为
0.80~1.6g/1000mL，用保鲜膜封口，进行充气悬浮扩繁培养，扩繁培养管理，适时切割或分瓶，不断扩繁。
[0008]所述条斑紫菜的种质为条斑紫菜纯净自由丝状体。
[0009]所述培养瓶为5000mL玻璃瓶，玻璃瓶为透明玻璃广口瓶，并用盐酸浸泡，清洗干净后，并用烘箱烘干待用。
[0010]所述培养液为消毒海水1000ml中加入PES营养母液5~IOml配制而成。
[0011]培养液配制:暗室忙 存30天以上的自然海水，加淡水将海水比重调至1.018(20°C),200目双层网过滤调制海水后，加热并煮沸5分钟~8分钟，再冷却I~2d后，1000ml消毒海水中加入PES营养母液5~10ml，配制成培养液。
[0012]PES营养母液配制:PES营养母液由I液和II液混合配制而成，I液和II液均用蒸懼水配制。I液配制，6种溶液分别配制。NaNO3溶液配制,35g NaNO3加入到100mL蒸懼水中，完全溶解，即得。同法配制，β-甘油磷酸钠(Na2glycerophosphate) 5g/ 100ml,VBulmg/lOOmlJBJmg/lOOml，生物素(VH) 0.5mg/100ml,，缓血酸铵(Tris buffer 三羟甲基氨基甲烷)500mg/100ml。II液配制，在1000ml蒸馏水中，加入Na2EDTAl.45g完全溶解后，依次加入 CoSO4.7Η204.8mg、ZnSO4.7H2022mg、MnSO4.4H20164mg、FeSO4.7H20500mg、FeCl3.6H2049mg、H3BO3L 14g，全部完全溶解(为了完全溶解，蒸馏水加热至50°C左右)。I液和II液配制完成，静置24h后，II液250ml+ I液各10ml，混均，PES营养母液即得。
[0013]所述充气悬浮扩繁培养为用离心式气泵作为供气设备，由乳胶管送气到培养瓶，使得条斑紫菜的自由丝状体处于悬浮状态。
[0014]充气悬浮培养用气体:经1%硫酸铜溶液过滤，送气时间为10_12h。
[0015]送气时间为每日7:00~19:00。
[0016]所述扩繁培养管理:控制培养条件为16°C~18°C、光强为1500Lx~3000Lx、光周期为14L: 12D，每两 周在1000mL培养液中添加PES营养盐母液2~5ml，通过冲洗、换水、用
药等方法防止污染等。
[0017]所述切割或分瓶为当培养瓶中丝状体量大于10g/1000ml或培养瓶中丝状体成簇团状时，分瓶或用食品粉碎机切割条斑紫菜种质20s~30s，继续扩繁。
[0018]本发明中优选方案为选择纯净扩繁种质材料(自由丝状体)，在5000ml透明玻璃广口瓶中，按1000ml培养液中投放1.0g自由丝状体，进行悬浮培养(悬浮时间7:00~19:00)，控制温度16°C~18°C、光强2000Lx左右、光周期14L:12D，每两周在1000ml培养液中添加PES母液5ml。当培养瓶中丝状体量大于10g/1000ml时分瓶、丝状体成簇团状时切割丝状体20s~30s，继续扩繁培养。
_9] 有益.效果
[0020](I)本发明的方法进行了多年的专门系统研究，形成了成熟的条斑紫菜种质快速扩繁方法，为条斑紫菜种质材料量的快速增加建立了科学方法；
[0021](2)本发明的方法可操作性强，扩繁效率高。
【具体实施方式】
[0022]下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
[0023]实施例1
[0024]扩繁条斑紫菜的种质:为2012年制备的条斑紫菜种质(纯净自由丝状体，Y-1206)。
[0025]扩繁培养瓶:为5000ml透明玻璃广口瓶，用盐酸浸泡后，清洗干净并烘干，且在高温灭菌箱中消毒，作为扩繁用的容器。[0026]扩繁培养液配制:暗室贮存60天的自然海水，海水比重调至1.018(20°C)，200目双层网过滤后，用5000ml三角烧瓶烧水并煮沸10分钟、冷却Id后，1000ml消毒海水中加入PES母液IOml摇匀，配制成培养液。
[0027]温度控制:扩繁室面积50m2，用格力3立式空调控制扩繁室温度16°C~18°C。
[0028]光照控制:以自然光作为扩繁培养主要光源，并避免直射光，同时在扩繁台架的顶部设置荧光灯光作为辅助光源，利用窗帘和日光灯调节光强，控制光强2000LX左右，用定时器控制光周期14L:12D。
[0029]充气悬浮:离心式气泵作为供气设备，气泵功率按照扩繁培养总容积的3%~5%配备，供应气体经1%硫酸铜溶液过滤。由乳胶管送气，送气时间12小时(7:00-19:00)，通过送气开关调节送气量的大小。
[0030]培养液配制:黑暗沉淀60天的海水，加淡水调制到比重为1.018海水(20°C)，200目筛絹双层过滤，用5000ml锥形玻璃烧瓶盛水，加温至100°C，煮沸8~10分钟，冷却后，1000ml消毒海水中加PES营养母液lOppm，保鲜膜封口，即得。
[0031]PES营养母液盐配制:PES营养母液由I液和II液混合配制而成，I液和II液均用蒸懼水配制。I液配制，6种溶液分别配制。NaNO3溶液配制,35g NaNO3加入到100mL蒸懼水中，完全溶解，即得。同法配制，β-甘油磷酸钠(Na2glycerophosphate) 5g/100mL,VBulmg/lOOmlJBJmg/lOOml，生物素(VH) 0.5mg/100ml,，缓血酸铵(Tris buffer 三羟甲基氨基甲烷)500mg/100ml。II液配制，在1000ml蒸馏水中，加入Na2EDTAl.45g完全溶解后，依次加入 CoSO4.7Η204.8mg、ZnSO4.7H2022mg、MnSO4.4H20164mg、FeSO4.7H20500mg、FeCl3.6H2049mg、H3BO3L 14g，全部完全溶解(为了完全溶解，蒸馏水加热至50°C左右)。I液和II液配制完成，静置24h小时后，在II液250ml+ I液各10ml，混均，PES营养母液即得。
[0032] 选用条斑紫菜种质品系(Y-1206)的材料8g，用食品粉碎机2档切割丝状体20s，分装入5000ml培养瓶2个瓶中，加入4500ml培养液，用保鲜膜封口。插入送气管，悬浮培养，控制扩繁室温度16°C~18°C，光强2000Lx，光周期14L:12D，每两周在1000ml培养液中添加PES母液5ml。60天，用食品粉碎机2档切割成簇团状丝状体、并分瓶，继续扩繁培养。90天,得到种质材料62g。
【权利要求】
1.一种条斑紫菜种质扩繁方法，包括: 将条斑紫菜种质装入培养瓶，加入培养液，使得培养液中条斑紫菜种质密度为0.80~1.6g/1000mL,封口，进行充气悬浮扩繁培养，扩繁培养管理，适时切割或分瓶，不断扩繁。
2.根据权利要求1所述的一种条斑紫菜种质扩繁方法，其特征在于:所述条斑紫菜的种质为条斑紫菜纯净自由丝状体。
3.根据权利要求1所述的一种条斑紫菜种质扩繁方法，其特征在于:所述培养瓶为5000ml广口玻璃瓶。
4.根据权利要求1所述的一种条斑紫菜种质扩繁方法，其特征在于:所述培养液为消毒海水1000ml中加入PES营养母液5~IOml配制而成。
5.根据权利要求1所述的一种条斑紫菜种质扩繁方法，其特征在于:所述充气悬浮扩繁培养为用离心式气泵作为供气设备，由乳胶管送气到培养瓶，使得条斑紫菜自由丝状体处于悬浮状态。
6.根据权利要求5所述的一种条斑紫菜种质扩繁方法，其特征在于:所述送气为气体经1%硫酸铜溶液过滤，送气时间为10-12h。
7.根据权利要求1所述的一种条斑紫菜种质扩繁方法，其特征在于:所述扩繁培养管理为控制培养条件16°C~18°C、光强为1500Lx~3000Lx、光周期为14L:12D，每两周在1000mL培养液中添加PES营养盐母液2~5ml。
8.根据权利要求1所述的一种条斑紫菜种质扩繁方法，其特征在于:所述切割或分瓶为当培养瓶中丝状体量大于10g/1000ml或培养瓶中丝状体成簇团状时，分瓶或用食品粉碎机切割条斑紫菜种质20s~30s，继续培养。
【文档编号】A01G33/02GK103907527SQ201410127531
【公开日】2014年7月9日 申请日期:2014年3月31日 优先权日:2014年3月31日
【发明者】陆勤勤, 朱建一, 张美如, 陈国耀, 周伟, 胡传明, 许广平, 丁亚平, 朱庙先 申请人:江苏省海洋水产研究所