大薯脱毒组培苗的培养方法
【专利摘要】本发明公开了一种大薯脱毒组培苗的培养方法，包括如下步骤：(1)植物外植体的选择及无菌处理；(2)丛生芽诱导培养；(3)增殖培养；(4)壮苗培养；(5)生根培养。所述培养所用培养基均为特定的培养基。本发明的大薯脱毒组培苗的培养方法，优点在于：无菌条件下茎尖剥离，选用配方合理的培养基，在特定的培养条件下，培养出的大薯组培苗可脱除病毒，生根率高，移栽成活率高，可有效恢复优良品种的特性。通过本发明方法生产大薯脱毒种苗，产量大，成本低，周期短，可快速有效地繁殖大薯脱毒组培苗。
【专利说明】大薯脱毒组培苗的培养方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及通过组织培养技术培养植物种苗的方法，具体涉及一种大薯脱毒组培 苗的培养方法。
【背景技术】
[0002] 大薯为多年生缠绕草质藤本，隶属于薯蓣科薯蓣属；原产于亚洲热带地区，主要分 布在福建、广东、广西、海南、台湾等地。大薯耐旱，耐热，产量潜力高，且淀粉含量较高，生育 期短，营养丰富，色泽鲜艳，口感俱佳，食用、药用兼备，具有良好的市场开发前景和推广价 值。
[0003] 目前，大薯主要通过地下块茎进行无性繁殖，种子材料消耗大，且这种自留种的栽 培形式会使其种性退化，品质降低，产量下降。目前，国内外学者开展了对大薯的初步研究， 包括化学成分，药理活性，人工种植等方面。而有关大薯的生物技术方法的研究较少，组织 培养的研究主要集中在组织诱导、基本培养条件筛选和理化因子的考查等方面。
[0004] 目前还没有找到一个切实有效的培养技术用以解决大薯脱毒苗诱导、增殖生根培 养中存在的疑点和难点，从而影响了大薯的深入研究和应用。因此，研究大薯的脱毒培养技 术，使得大薯快速繁殖大量的脱毒种苗得以实现，且为大薯的良种繁育及实现产业化显得 十分重要。
【发明内容】
[0005] 针对上述现有技术，为克服现有技术中的不足，本发明提供了一种繁殖速度快的 大薯脱毒组培苗的培养方法。
[0006] 本发明是通过以下技术方案实现的：
[0007] -种大薯脱毒组培苗的培养方法，包括如下步骤：
[0008] (1)植物外植体的选择及无菌处理：选择大薯带芽茎段为外植体，用水冲洗干净， 切取顶芽，将顶芽组织置于超净工作台中，用75%酒精（体积百分数）消毒30?60秒，再 用质量浓度为5%?10%次氯酸钠溶液消毒6?10分钟，消毒后，取出顶芽，无菌水冲洗 3?5次，最后用无菌滤纸吸干无菌水，无菌条件下用解剖镜剥取茎尖；
[0009] (2)丛生芽诱导培养：将上述剥取的茎尖接种到丛生芽诱导培养基中诱导丛生 芽，培养期为40天，得丛生芽；所述丛生芽诱导培养基的组份组成为：MS+BA 1. 5?2. Omg/ L+GA30. 1 ?0· 5mg/L+NAA 0· 1 ?0· 5mg/L+ 蔗糖 20 ?30g/L+ 琼脂 4 ?6g/L( S卩：向 MS 培 养基中加入终浓度为1. 5?2. Omg/L的ΒΑ、0. 1?0. 5mg/L的GA3、0. 1?0. 5mg/L的NAA、 20?30g/L的蔗糖以及4?6g/L的琼脂而成；该表述方式为所属领域技术人员惯用的表 述方式；下同）；
[0010] (3)增殖培养：将上述诱导出的丛生芽接种到增殖培养基中进行继代培养，30天 继代一次，连续转接4次，培养期为120天；所述增殖培养基的组份组成为：MS+BA 2. 0? 3. Omg/L+NAA 0· 2 ?0· 5mg/L+ 鹿糖 20 ?30g/L+ 琼脂 4 ?6g/L ;
[0011] (4)壮苗培养：将上述增殖培养出的丛生芽切成单芽或者小丛芽，接种到壮苗培 养基中，培养期为20天；所述壮苗培养基的组份组成为：MS+BA 0. 5?1. Omg/L+IBA 0. 1? 0· 6mg/L+ 鹿糖 20 ?30g/L+ 琼脂 4 ?6g/L ;
[0012] (5)生根培养：将上述壮苗培养后的开叶的小苗接种到生根培养基中，培养期为 35天，即得大薯脱毒组培苗；所述生根培养基的组份组成为：1/2MS+IBA 0. 1?0. 5mg/L+蔗 糖20?30g/L+琼脂4?6g/L(l/2MS是指基础培养基中各物质的浓度为MS培养基的一 半）。
[0013] 优选的，所述步骤（1)中，用水清洗干净的具体操作方式为：先用自来水冲洗干 净，再用蒸馏水冲洗。
[0014] 优选的，所述步骤（2)?（5)中，培养的条件为：培养温度23?27°C，光照时间 10?16小时/天，光照强度2000?30001X。
[0015] 优选的，所述步骤（2)中，丛生芽诱导培养基的组份组成优选为：MS+BA 2. Omg/ L+GA30. lmg/L+NAA 0· 5mg/L+ 鹿糖 30g/L+ 琼脂 5g/L，pH 值为 5. 5 ?5. 8 (各组分混合混勻 后，若pH不在此范围内，则通过氢氧化钠溶液或盐酸调整pH至该范围内；下同）。
[0016] 优选的，所述步骤（3)中，增殖培养基的组份组成优选为：MS+BA 2. 5mg/L+NAA 0· 5mg/L+ 鹿糖 30g/L+ 琼脂 5g/L，pH 值为 5. 5 ?5. 8。
[0017] 优选的，所述步骤（4)中，壮苗培养基的组份组成优选为：MS+BA 0. 5mg/L+IBA 0· 5mg/L+ 鹿糖 30g/L+ 琼脂 5g/L，pH 值为 5· 5 ?5· 8。
[0018] 优选的，所述步骤（5)中，生根培养基的组份组成优选为：1/2MS+IBA 0. lmg/L+蔗 糖 30g/L+ 琼脂 5g/L，pH 值为 5. 5 ?5. 8。
[0019] 本发明的大薯脱毒组培苗的培养方法，优点在于：无菌条件下茎尖剥离，选用配方 合理的培养基，在特定的培养条件下，培养出的大薯组培苗可脱除病毒，生根率高，移栽成 活率高，可有效恢复优良品种的特性。通过本发明方法生产大薯脱毒种苗，产量大，成本低， 周期短，可快速有效地繁殖大薯脱毒组培苗。
【具体实施方式】
[0020] 下面结合实施例对本发明作进一步的说明。
[0021] 实施例1大薯脱毒组培苗的培养方法
[0022] 步骤如下：
[0023] (1)外植体的选择及无菌处理：选择大薯（种质资源来自海南儋州八一农场）生 长优良植株的带芽茎段为外植体，用自来水冲洗干净，再用蒸馏水冲洗，切取顶芽，将顶芽 组织置于超净工作台中，用75 %酒精消毒60秒，再用10%次氯酸钠溶液消毒8分钟，无菌 水冲洗5次，最后用无菌滤纸吸干无菌水，无菌条件下剥取茎尖；
[0024] (2)丛生芽诱导培养：将剥取的茎尖接种到丛生芽诱导培养基MS+BA 2. Omg/ L+GA30. lmg/L+NAA 0. 5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L中诱导丛生芽，培养期为40天，接种第 15天茎尖变绿膨大，开始形成绿色愈伤组织，30天丛生芽明显伸长，生长较快，40天时丛生 芽的诱导率为100%，如表1所示；
[0025] 表 1
[0026]
【权利要求】
1. 一种大薯脱毒组培苗的培养方法，其特征在于：包括如下步骤： (1) 植物外植体的选择及无菌处理：选择大薯带芽茎段为外植体，用水冲洗干净，切取 顶芽，顶芽用75%酒精消毒30?60秒，再用浓度为5%?10%次氯酸钠溶液消毒6?10 分钟，消毒后，取出顶芽，无菌水冲洗3?5次，最后用无菌滤纸吸干无菌水，无菌条件下剥 取茎尖； (2) 丛生芽诱导培养：将上述剥取的茎尖接种到丛生芽诱导培养基中诱导丛生芽， 培养期为40天，得丛生芽；所述丛生芽诱导培养基的组份组成为：MS+BA 1. 5?2. Omg/ L+GA30. 1 ?0· 5mg/L+NAA 0· 1 ?0· 5mg/L+ 鹿糖 20 ?30g/L+ 琼脂 4 ?6g/L ; (3) 增殖培养：将上述诱导出的丛生芽接种到增殖培养基中进行继代培养，30天继代 一次，连续转接4次，培养期为120天；所述增殖培养基的组份组成为：MS+BA 2. 0?3. Omg/ L+NAA 0· 2 ?0· 5mg/L+ 鹿糖 20 ?30g/L+ 琼脂 4 ?6g/L ; (4) 壮苗培养：将上述增殖培养出的丛生芽切成单芽或者小丛芽，接种到壮苗培养 基中，培养期为20天；所述壮苗培养基的组份组成为：MS+BA 0. 5?1. Omg/L+IBA 0. 1? 0· 6mg/L+ 鹿糖 20 ?30g/L+ 琼脂 4 ?6g/L ; (5) 生根培养：将上述壮苗培养后的开叶的小苗接种到生根培养基中，培养期为35天， 即得大薯脱毒组培苗；所述生根培养基的组份组成为：1/2MS+IBA 0. 1?0. 5mg/L+蔗糖 20 ?30g/L+ 琼脂 4 ?6g/L。
2. 根据权利要求1所述的大薯脱毒组培苗的培养方法，其特征在于：所述步骤（1)中， 用水清洗干净的具体操作方式为：先用自来水冲洗干净，再用蒸馏水冲洗。
3. 根据权利要求1所述的大薯脱毒组培苗的培养方法，其特征在于：所述步骤（2)? (5)中，培养的条件为：培养温度23?27°C，光照时间10?16小时/天，光照强度2000? 30001x。
4. 根据权利要求1所述的大薯脱毒组培苗的培养方法，其特征在于：所述步骤（2) 中，丛生芽诱导培养基的组份组成优选为：MS+BA 2. 0mg/L+GA3 0. lmg/L+NAA 0. 5mg/L+蔗糖 30g/L+ 琼脂 5g/L，pH 值为 5· 5 ?5· 8。
5. 根据权利要求1所述的大薯脱毒组培苗的培养方法，其特征在于：所述步骤（3)中， 增殖培养基的组份组成优选为：MS+BA 2. 5mg/L+NAA 0. 5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH值 为 5. 5 ?5. 8。
6. 根据权利要求1所述的大薯脱毒组培苗的培养方法，其特征在于：所述步骤（4)中， 壮苗培养基的组份组成优选为：MS+BA 0. 5mg/L+IBA 0. 5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH值 为 5· 5 ?5· 8。
7. 根据权利要求1所述的大薯脱毒组培苗的培养方法，其特征在于：所述步骤（5)中， 生根培养基的组份组成优选为：1/2MS+IBA 0· lmg/L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH值为5. 5? 5. 8。
【文档编号】A01H4/00GK104041419SQ201410336067
【公开日】2014年9月17日 申请日期:2014年7月16日 优先权日:2014年7月16日
【发明者】王晓娟 申请人:无锡中农科生物育种技术研究院有限公司