一种香港四照花组织培养方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种香港四照花组织培养方法。
【背景技术】
[0002] 香港四照花（Dendrobenthemia japonica )，又名山蒸枝、青皮树，为山茱萸科四 照花属常绿乔木。幼枝及幼叶疏被褐色细毛。因花序外有2对黄白色花瓣状大苞片；果熟 红色或紫红色状如草莓和荔枝，而得名山荔枝。聚花果球形红色。核果聚为球形的聚合果 肉质，9~10月成熟，成熟后变为紫红色，果实味甜可食及酿酒用。 香港四照花树形圆整，呈伞形，叶片光亮，树姿优美。花序苞片洁白，果序球形红艳，是 观姿、观叶、观花、观果兼而有之的优良观赏植物。花瓣状苞片大而洁白覆盖满树，衬于光 亮绿叶丛中，经风吹动如同群蝶起舞十分别致；成熟果实紫红色颇鲜艳。叶片嫩时红色夏季 绿色秋天变为褐色，在绿树丛中格外注目。抗寒、抗旱、尚无病虫害、且耐贫瘠、耐移植。集 观叶、观花、观果于一体的优良景观绿化材料，尤其是冬季及早春全树紫红色极其壮观，是 极具开发前景的乡土彩叶树种，为景观绿化的新优树种。
[0003] 在2009年出版的安徽农学通报中，吴方星、瞿彦长等公开了一种香港四照花的利 用及育苗造林技术，先进行苗圃地选择，在播种前20d左右，用0.5%的高锰酸钾溶液浸 种2h，捞出，用清水冲洗2次，然后用50e左右的温水浸种，待水温自然冷却后浸泡 36h。捞出置于室温25e催芽。催芽过程中要勤观察、勤翻动、少量喷水，保持种子水分， 约20d即可播种。播种时控制行距和深度，及时浇水，注意松土除草，同时每7d喷施012% 高锰酸钾和1%的硫酸亚铁1次，预防苗木猝倒病，苗木生长期可喷施多菌灵或代森锌防 治叶斑病。
[0004] 同样，在2006年第8期出版的期刊经验交流中，张剑芳也公开了一种香港秀丽四 照花的培育技术，通过采种与种子处理、圃地选择管理等，如播种后要经常观察，连续7天 天晴，应浇水或灌溉一次。出苗达到40%时要逐步选择阴天揭草。如果出苗太密，应在 出苗后1个月内及时间苗，保持每亩产苗2. 2-2. 5万株。出苗后1个月以内，如果天气 炎热，要用40%透光率的遮阳网遮荫。出苗20天后至9月前，分别施三次肥，第1次施 尿素5%;第2、3次施复合肥8%和10%。此外，在夏天梅雨季节要注意排水和灌溉。香港 秀丽四照花抗逆性强，病虫害较少，如果出现根腐病，可用农用链霉素500倍液和退菌 特800倍液混合浇根。叶斑病可用多菌灵700倍液喷雾，连续7天。
[0005] 在2011年第19期公开的现代农业科技中，吴伟华、钟亚萍等公开了一种优良乡土 绿化苗木秀丽香港四照花特征特性及育苗技术，与上述公开了两个技术类似。
[0006] 可见，香港四照花现有繁殖技术主要采用种子播种育苗、也采用扦插、分蘖繁殖， 大都存在以下缺点： 现有技术种子繁殖苗木会产生变异，不能保持优良性状和苗木不整齐，影响苗木质 量； 现有技术扦插、分蘖繁殖虽然属于无性繁殖能保持优良性状，但是繁殖效率低、速度 慢，不利于优良品种的大量繁殖和推广。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的是为了提供一种增殖系数高、生根率高、可以短期内大量规模化生 产的香港四照花组织培养方法。
[0008] 为了实现本发明的目的，采用的技术方案是： 一种香港四照花组织培养方法，其特征在于，包括以下步骤： ① 前处理：选取生长较整齐的香港四照花茎段，用无菌水冲洗干净后，切成〇. 7~ 0. 8cm长的小段， ② 初代培养：将上述得到的小段用初代培养基进行诱导培养，PH5. 8~6. 0,培养温度 23~25°C，光照周期为8~10h/d，光照强度为1800~20001ux，增殖培养周期为40~45 天，选取生长状态好、颜色浓绿的芽进入下一阶段； 其中初代培养基包括：母培养基+蔗糖20000~35000 mg/L+卡拉胶6000~7000mg/ L+6-BA 3 ~4mg/L+NAA 0. 1 ~0. 2mg/L ; ③ 增殖培养：将诱导出来的健康小芽转入继代增殖培养基中进行增殖培养，PH5. 8~ 6. 0,培养温度23~25°C，光照周期为8~10h/d，光照强度为1800~20001ux，增殖培养周 期为30~35天，待新芽高度长至3. 5~4. Ocm时，选取颜色正常，生长健壮的芽开始下一 阶段；高度未达到3. 5cm的芽单独取出，再次进行增殖培养， 其中继代增殖培养基包括：母培养基+蔗糖20000~35000 mg/L+卡拉胶6000~ 7000mg/L+6_BA 2 ~3mg/L+NAA 0. 06 ~0. 12mg/L, ④ 壮苗培养：将增殖培养基中培养后的芽在壮苗培养基中进行培养30~35天， PH5. 8~6. 0,培养温度23~25°C，光照周期为8~10h/d，光照强度为1800~20001ux， 其中壮苗培养基包括：母培养基+蔗糖20000~35000 mg/L+卡拉胶6000~7000mg/ L+6-BA 1 ~2mg/L+NAA 0. 1 ~0. 3mg/L, ⑤ 生根培养：继续接种到生根培养基中进行生根培养，培养30~35天，PH5. 8~6. 0， 培养温度23~25°C，光照周期为8~10h/d，光照强度为1800~20001ux，待根长至2. 0~ 2. 5cm时，开始下一阶段，生根率达到80%以上， ⑥ 移栽：将长高至3~5cm、生根了的培养苗根部洗净后移植于含有砻糠灰与黄心土 体积比为1:1的营养杯中，放置大棚内，控制培养温度25~28°C，保持相对湿度85%~ 95%，前期用遮阳网遮阴处理20d，后逐渐除去遮阳网，成活后全光照。
[0009] 其中生根培养基包括：母培养基+蔗糖20000mg/L+卡拉胶6000~7000mg/L+ IBA 0? 2 ~lmg/L+NAA 0? 1 ~0? 3mg/L。
[0010] 作为优选的技术方案：所述母培养基组成包括大量元素、微量元素、铁盐、有机附 加物，所述母培养基按浓度计，包括： 大量元素：硝酸钾1600~4000mg/L、硝酸铵1400~3200mg/L、七水硫酸镁300~ 340mg/L、硫酸二氢钾 150 ~180mg/L、二水氯化钙 200 ~480mg/L ; 微量元素：碘化钾〇? 8~1.0 mg/L、四水硫酸锰20~25mg/L、七水硫酸锌、8~10mg/L、 硼酸6~7mg/L、五水硫酸铜0? 02~0? 03mg/L、氯化钴0? 02~0? 03mg/L、二水钥酸钠0? 2~ 0. 3mg/L ； 铁盐：七水硫酸亚铁25~30mg/L、乙二胺四乙酸二钠35~40mg/L ; 有机成分：盐酸硫胺素〇? 1~〇? 3mg/L、盐酸吡哆辛0? 4~0? 8mg/L、烟酸0? 4~0? 8mg/ L、甘氨酸1~3mg/L、肌醇100~130mg/L。
[0011] 其中，所述初代培养培养基中大量元素的组成为：硝酸钾3500~4000mg/L、硝酸 铵2800~3200mg/L、七水硫酸镁300~340mg/L、硫酸二氢钾150~180mg/L、二水氯化钙 400 ~480mg/L。
[0012] 所述继代增殖培养基和壮苗培养基中大量元素的组成为：硝酸钾1600~2000mg/ L、硝酸铵1400~2000mg/L、七水硫酸镁300~340mg/L、硫酸二氢钾150~180mg/L、二水 氯化1丐400~480mg/L。
[0013] 所述生根培养基中大量元素的组成为：硝酸钾1600~2000mg/L、硝酸铵1400~ 2000mg/L、七水硫酸镁300~340mg/L、硫酸二氢钾150~180mg/L、二水氯化钙200~ 280mg/L。
[0014] 实际上，继代增殖培养基、壮苗培养基和生根培养基中的微量元素、铁盐和有机成 分与初代培养培养基中的相同，只是大量元素含量不同，因此它们的基本培养基都是类似 的。初代培养培养基主要作用是诱导芽的生长，继代增殖培养基主要作用是刺激苗的生长 速度，壮苗培养基可以使得苗长的更加健壮，而生根培养基有利于根的生长。
[0015] 6-BA，化学名称：6_苄氨基腺嘌呤，IBA又叫"吲哚丁酸"，NAA为萘乙酸。母培养 基与MS培养基类似，两者所含的成分基本相同，而区别在于每个成分的含量不同。而都以 母培养基为基本培养基的初代培养培养基、继代增殖培养基、壮苗培养基和生根培养基，所 含成分也基本相同，只是成分含量不同。
[0016] 本发明具有的有益效果： 将香港四照花组织的培养过程分成四个阶段，且根据香港四照花组织每个阶段生长特 性的不同，对应配有一个培养基，并控制好培养过程中的外部条件，使得香港四照花表现出 了很好的生长特性： 1、 采用该培养方法培养，增殖系数高、生根率高，培养的植物具有优良的生长特性； 2、 本发明的培养方法可以短期内大量规模化生产，繁殖效率高。
【具体实施方式】
[0017] 下面结合实施例对本发明作进一步描述，但本发明的保护范围不仅仅局限于实施 例。
[0018] 实施例1 其中初代培养基包括：母培养基+蔗糖20000mg/L+卡拉胶6500mg/L+6-BA 3. 2mg/ L+NAA 0. 15mg/L ； 其中继代增殖培养基包括：母培养基+蔗糖20000mg/L+卡拉胶6500mg/L+6-BA 2. 5mg/L+NAA 0. 061mg/L, 其中壮苗培养基包括：母培养基+蔗糖20000mg/L+卡拉胶6500mg/L+6-BA I. 5mg/ L+NAA 0. 2mg/L, 其中生根培养基包括：母培养基+蔗糖20000mg/L+卡拉胶6500mg/L+ IBA 0. 5mg/ L+NAA 0. 2mg/L〇
[0019] 初代培养培养基中大量元素组成为：硝酸钾3600mg/L、硝酸铵3000mg/L、七水硫 酸镁320mg/L、硫酸二氢钾160mg/L、二水氯化钙440mg/L。
[0020] 继代增殖培养基和壮苗培养基中大量元素的组成为：硝酸钾1800mg/L、硝酸铵 1500mg/L、七水硫酸镁320mg/L、硫酸二氢钾160mg/L、二水氯化钙440mg/L。
[0021] 生根培养基中大量元素的组成为：硝酸钾1800mg/L、硝酸铵1500mg/L、七水硫酸 镁320mg/L、硫酸二氢钾160mg/L、二水氯化钙240mg/L。
[0022] 继代增殖培养基、壮苗培养基和生根培养基中的微量元素、铁盐和有机成分与初 代培养基中的相同。微量元素：碘化钾〇. 8mg/L、四水硫酸锰22. 5mg/L、七水硫酸锌8. 6mg/ U硼酸6mg/L、五水硫酸铜0? 025mg/L、氯化钴0? 025mg/L、二水钥酸钠0? 25mg/L ; 铁盐：七水硫酸亚铁27. 5mg/L、乙二胺四乙酸二钠37. 5mg/L ; 有机成分：盐酸硫胺素0. lmg/L、盐酸批咳辛0. 5mg/L、烟酸0. 5mg/L、甘氨酸2mg/L、肌 醇 100mg/L。
[0023] 实施例2 其中初代培养基包括：母