彩桂试管苗的继代增殖培养方法
【专利摘要】本发明涉及一种彩桂试管苗继代增殖培养方法，包括如下步骤：以彩桂新萌发的嫩枝为外植体，将外植体消毒灭菌后，在无菌条件切成1～1.5cm的小段，接种到腋芽诱导培养基中，培养4～5周后产生腋芽；将腋芽切割成1～1.5cm的顶芽或茎段，接种到相同的培养基中进行继代增殖培养，经4～5周培养获得丛生芽；其中，培养过程是在每天光照14小时、光合有效光量子束密度为40～50μmol/m2·s以及温度为24～26℃的条件下进行，所述腋芽诱导培养基或继代增殖培养基为：基本培养基+TDZ0.1-0.5mg/L+KT0.1-1.0mg/L+琼脂5.5g/L+白砂糖30g/L，调节pH至5.8。本发明具有：繁殖速度更快，生产不受限于季节变化的特点。有效弥补了扦插苗的缺陷。
【专利说明】彩桂试管苗的继代增殖培养方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及组培试管苗快繁【技术领域】，具体是一种彩桂试管苗继代增殖培养方 法。
【背景技术】
[0002] 彩桂为木犀科（Oleaceae)木犀属常绿小乔木或灌木，彩桂叶片独特的色泽变化而 显示出其观赏价值高，作为我国重要的园林和经济树种，市场前景广阔。尤其是彩桂品种中 的五色彩叶桂。
[0003] 木犀属植物多数为中国的观赏花木和优良的园林树种，其中，桂花为中国的十大 名花之一，形、色、香、韵俱佳，具有很高的观赏价值。目前，国内的彩叶桂有云田彩桂、银边 彩桂等品种，叶片最终呈花叶状态，类似金边黄杨，喧宾夺主，反而掩盖了秋天赏花的本性。 唯独五色彩叶桂随季节的变化，叶色在春、夏和早秋出现逐步变色过程，到秋季开花时节， 叶片恢复常绿，一如传统八月桂，陪衬出花的娇美。桂花一年三季基本都在长芽，五色彩叶 桂的每一片新叶都有这个变色过程，也就是五色彩叶桂树全年基本是色彩斑斓，所以观赏 价值极高。
[0004] 五色彩桂的繁殖一般采用嫩枝扦插，生产受限于季节变化且其扦插繁殖需要大量 的插穗，由于插穗来源的不一致可能导致扦插苗生长整齐度较组培苗差等。
[0005] 快繁技术在农业【技术领域】得到了广泛应用，但对于每个品种的植物，技术方法千 差万别，目前尚未见关于利用组织培养技术进行五色彩叶桂试管苗的快繁技术的报道。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于提供一种彩桂试管苗继代增殖培养方法，不但保持彩桂的优良 特性，而且克服扦插技术之不足。
[0007] 本发明所解决的问题可以采用以下技术方案来实现： 一种彩桂试管苗的继代增殖培养方法，包括如下步骤： 以彩桂新萌发的嫩枝为外植体，将外植体消毒灭菌后，在无菌条件切成1?I. 5cm的 小段，接种到腋芽诱导培养基中，培养4?5周后产生腋芽；将腋芽切割成1?I. 5cm的 顶芽或茎段，接种到相同的培养基中进行继代增殖培养，经过4?5周培养获得丛生芽；其 中，培养条件是在每天光照14小时，光合有效光量子束密度为40?50 μ mol/m2 · s以及温 度为24?26°C的条件下进行，所述的腋芽诱导培养基或继代增殖培养基为：基本培养基 +TDZ0. 1-0. 5mg/L+KT0. 1-1. 0 mg/L+ 琼脂 5. 5g/L+ 白砂糖 30g/L，调节 pH 至 5. 8。
[0008] 在此培养基上培养，平均增殖比例达到1:3. 5,且长势良好，经过多代培养增殖系 数稳定，此方法不仅保持了彩桂的优良特性，而且，较常规的扦插技术相比，繁殖速度更快， 生产不受限于季节变化。
[0009] 在上述方案基础上，所述的基本培养基由：大量元素、微量元素、有机物和铁盐组 成，具体为： 大量元素：硝酸钾1100 mg/L、硝酸铵412mg/L、七水硫酸镁1500mg/L、磷酸二氢钾340 mg/L、二水氯化興440mg/L、氯化钾500 mg/L、硝酸興417mg/L ; 微量元素：硼酸12. 4mg/L、一水硫酸锰16. 9mg/L、二水钥酸钠0· 25mg/L、七水硫酸锌 14. 3mg/L、碘化钾(λ 83mg/L、六水氯化钴(λ 025mg/L、五水硫酸铜(λ 25mg/L ; 有机物：肌醇108mg/L、烟酸5mg/L、维生素 BI 13. 5mg/L、维生素 B6 I. 2mg/L、甘氨酸 3. 75mg/L ;和 铁盐：七水硫酸亚铁27. 8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37. 3mg/L。
[0010] 本发明中，细胞分裂素为TDZ0. 1-0. 5mg/L和ΚΤ0. 1-1. 0 mg/L，再进一步优选，所 述细胞分裂素为TDZO. 3mg/L和KIU 5mg/L。 toon] 本发明所述的彩桂试管苗继代增殖培养方法具有：繁殖速度更快，生产不受限于 季节变化的特点。有效弥补了扦插苗的缺陷。
【具体实施方式】
[0012] 以下通过实施例进一步阐述本发明。
[0013] 本发明的彩桂试管苗继代增殖培养方法，它包括如下步骤： 以彩桂新萌发的嫩枝为外植体，将外植体消毒灭菌后，在无菌条件切成1?I. 5cm的小 段，接种到腋芽诱导培养基中，培养4?5周后产生腋芽；将腋芽切割成1?I. 5cm的顶芽 或茎段，接种到相同的培养基中进行继代增殖培养，培养4?5周获得丛生芽；其中，上述培 养过程是在每天光照14小时、光合有效光量子束密度为40?50 μ mol/m2 · s以及温度为 24?26°C的条件下进行，所述腋芽诱导培养基或继代增殖培养基由基本培养基、细胞分裂 素、琼脂5. 5g/L和白砂糖30g/L组成，并调节pH至5. 8。
[0014] 所述基本培养基包括： 大量元素：硝酸钾1100 mg/L、硝酸铵412mg/L、七水硫酸镁1500mg/L、磷酸二氢钾340 mg/L、二水氯化興440mg/L、氯化钾500 mg/L、硝酸興417mg/L ; 微量元素：硼酸12. 4mg/L、一水硫酸锰16. 9mg/L、二水钥酸钠0· 25mg/L、七水硫酸锌 14. 3mg/L、碘化钾(λ 83mg/L、六水氯化钴(λ 025mg/L、五水硫酸铜(λ 25mg/L ; 有机物：肌醇108mg/L、烟酸5mg/L、维生素 B113. 5mg/L、维生素 B61. 2mg/L、甘氨酸 3. 75mg/L ； 铁盐：七水硫酸亚铁27. 8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37. 3mg/L。
[0015] 所述细胞分裂素为TDZ0. 1-0. 5mg/L和ΚΤ0. 1-1. 0 mg/L，再进一步优选，所述细胞 分裂素为 TDZ0. 3 mg/L 和 ΚΤ0. 5mg/L。
[0016] 彩桂组培继代增殖培养基最佳激素配比筛选试验，结果如下：
【权利要求】
1. 一种彩桂试管苗继代增殖培养方法，包括如下步骤： 以彩桂新萌发的嫩枝为外植体，将外植体消毒灭菌后，在无菌条件切成1?1. 5cm的小 段，接种到腋芽诱导培养基中，培养4?5周后产生腋芽；将腋芽切割成1?1. 5cm的顶芽 或茎段，接种到相同的培养基中进行增殖培养，获得丛生芽；其中，培养过程是在每天光照 14小时、光合有效光量子束密度为40?50 y mol/m2 ? s以及温度为24?26°C的条件下进 行，所述的腋芽诱导培养基或继代增殖培养基为：基本培养基+TDZ0. 1-0. 5mg/L+KT0. 1-1. 0 mg/L+琼脂5. 5g/L+白砂糖30g/L，调节pH至5. 8。
2. 根据权利要求1所述的外植体消毒灭菌方法，其特征在于：所述的消毒是将外植体 在75%酒精溶液进行30秒钟表面消毒，再用0. 05%的HgCl2溶液消毒12分钟，最后用无菌 水冲洗5?6次完成消毒过程。
3. 根据权利要求1所述的彩桂试管苗继代增殖培养方法，其特征在于：所述的基本培 养基由： 大量元素：硝酸钾1100 mg/L、硝酸铵412mg/L、七水硫酸镁1500mg/L、磷酸二氢钾340 mg/L、二水氯化興440mg/L、氯化钾500 mg/L、硝酸興417mg/L ; 微量元素：硼酸12. 4mg/L、一水硫酸锰16. 9mg/L、二水钥酸钠0? 25mg/L、七水硫酸锌 14. 3mg/L、碘化钾0? 83mg/L、六水氯化钴0? 025mg/L、五水硫酸铜0? 25mg/L ; 有机物：肌醇108mg/L、烟酸5mg/L、维生素B1 13. 5mg/L、维生素B6 1. 2mg/L、甘氨酸 3. 75mg/L ;和 铁盐：七水硫酸亚铁27. 8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37. 3mg/L。
4. 根据权利要求1所述的彩桂试管苗继代增殖培养方法，其特征在于：TDZ0. 3mg/L和 KTO. 5mg/L作为细胞分裂素。
【文档编号】A01H4/00GK104365477SQ201410461693
【公开日】2015年2月25日 申请日期:2014年9月12日 优先权日:2014年9月12日
【发明者】陈权, 肖建梅 申请人:上海绿力农业科技有限公司