本发明涉及一种微生物菌剂，尤其涉及一种能显著提高胡萝卜中β-胡萝卜素含量的菌剂，属于微生物技术领域。
背景技术：
随着经济的发展和社会的进步以及生活节奏的不断加快，现在人们在工作、生活各方面的压力都比较大，在正常锻炼和保健的同时，越来越多的消费者也在日常的生活中适当补充营养。
β-胡萝卜素是类胡萝卜素(carotenoids)之一，也是橘黄色脂溶性化合物，它是自然界中最普遍存在也是最稳定的天然色素。许多天然食物中例如：绿色蔬菜、甘薯、胡萝卜、菠菜、木瓜、芒果等，皆存有丰富的β-胡萝卜素，但是存在最多的还是胡萝卜中。β-胡萝卜素是一种抗氧化剂，具有非常强的抗氧化性，可以预防、延缓和治疗某些疾病，尤其是癌症，同时也能提高机体的免疫功能。同时，β-胡萝卜素具有解毒作用，是维护人体健康不可缺少的营养素，在预防心血管疾病、白内障及抗氧化上有显著的功能，并进而防止老化和衰老引起的多种退化性疾病，目前被广泛应用于食品、药品、化妆品和保健品行业，是联合国粮农组织和世界卫生组织食品添加剂联合专家委员会认定的A类优秀有营养的食品添加剂，全世界已有52个国家、地区批准使用，国际上需求量在1000吨以上，年增长率达10％～15％，具有广阔的市场前景。
目前，生产β-胡萝卜素的方法主要有植物提取法，化学合成法，微生物发酵法。天然胡萝卜素具有很好的抗染色体畸变，防癌作用以及较强的生理活性，而市场上的胡萝卜素产品大多数为化学合成法制备的合成品，因此生理活性较低。植物提取法是指从胡萝卜等富含β-胡萝卜素的植物中提取β-胡萝卜素，且胡萝卜中提取β-胡萝卜素已经是主流趋势。但受胡萝卜中β-胡萝卜素含量的限制，当前天然胡萝卜素的价格是化学品的两倍，成本相对较高。如果能够提高胡萝卜中β-胡萝卜素的含量，则可以降低成本，提高产量和效益。
技术实现要素：
鉴于目前胡萝卜中β-胡萝卜素含量普遍较低的问题，本发明的目的在于提供了一种提高胡萝卜中β-胡萝卜素含量的复合菌剂及其应用。
为了实现本发明的目的，发明人通过大量试验研究并不懈努力，最终获得了如下技术方案：
一种复合菌剂，该菌剂由植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)P-8和干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)Zhang组成。
需要说明的是，本发明所采用的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)P-8，分离自内蒙古传统自然发酵酸牛奶中，具有优异的抗胃肠道消化液耐受能力，能够存活于动物肠道内；该菌株已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏时间为2012年06月28日，保藏号为CGMCC No.6312。另外，本发明所采用的干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)Zhang，是从酸马奶中分离的耐酸和耐胆汁酸的益生菌菌株；该菌株于2006年4月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心，保藏号CGMCC No.1697。
优选地，如上所述的复合菌剂，该菌剂由植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum P-8)和干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)Zhang按1∶(0.5～3)的活菌数量比组成。
本发明人在筛选抑制胡萝卜病原菌的拮抗菌时意外发现，含有植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)P-8和干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)Zhang的复合菌液对病原菌没有明显抑制作用，但对胡萝卜的生长代谢有明显的影响，尤其可以提高胡萝卜中β-胡萝卜素的含量。基于此发现，本发明人通过接种于MRS培养液中培养发酵，将这两种菌制备成了复合菌剂。因此，本发明提供了上述复合菌剂的应用，即：上述的复合菌剂在提高胡萝卜中β-胡萝卜素含量中的应用。以及，上述的复合菌剂在制备胡萝卜生长液中的应用。
本发明涉及的复合菌剂可以采用如下方法制备：
(1)将所述干酪乳杆菌菌株(Lactobacillus casei)Zhang和植物乳杆菌菌株(Lactobacillus plantarum)P-8接种于MRS培养液，在37℃条件下培养12-24小时，经离心洗涤后，在菌体沉淀上加入8％-12％灭菌脱脂牛乳液，并调整其菌数为2.0×1010cfu/mL，混匀后倾注培养；
(2)将步骤(1)得到的菌株培养物接种于MRS培养液，在37℃条件下培养12-24小时，再接种8％-12％的灭菌脱脂牛乳液，在37℃条件下培养6-10小时，调整其菌数为3×109cfu/mL，pH值为4.4～4.6。
与现有技术相比，本发明涉及的复合菌剂由植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)P-8和干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)Zhang组成，这两种菌对胡萝卜的生长代谢有明显的影响，尤其可以协同提高胡萝卜中β-胡萝卜素的含量，从而为天然胡萝卜素的制备提供了较为理想的原料，最终降低了β-胡萝卜素的生产成本，提高产量和效益。
附图说明
图1为标准曲线，横坐标为β-胡萝卜素含量(μg/ml)，纵坐标为吸光值。
具体实施方式
以下通过实施例形式对本发明的上述内容再作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。另外，下述实施例中的实验方法，如无特别说明，均为常规方法。
实施例1：植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum P-8)和干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)Zhang在提高胡萝卜中β-胡萝卜素含量的试验
实验地点：莱西店埠后屯(植物乳杆菌组、干酪乳杆菌组、复合菌组和空白对照组各1.7亩)
种植管理：棚规格长115m，宽10m，每棚起垄13垄，每垄上种植萝卜2行，株距5-6cm，每棚施基肥：硫酸钾复合肥(N∶P∶K为15∶15∶15)300斤，有机肥600-700斤，后期不追肥。
实验时间：2016.04.26-2016.6.23
实验作物：胡萝卜(品种为：孟德尔808)
使用量及方法：胡萝卜播种结束之后，立即随水滴灌微生物菌剂(实验组采用的菌剂中活菌总数含量大于109cfu/mL，复合菌组中两种菌的数量比为1∶1)2升/棚，后期不在滴灌含菌水，而根据作物长势灌溉不含菌水，保证各处理灌溉量相同。
β-胡萝卜素含量测定方法(高效液相法)：
样品前处理：取不同胡萝卜不同部位的组织4.0g研磨成浆，转移到100ml锥形瓶中，分别加入0.5g维生素C，30ml乙醇，10ml饱和氢氧化钾溶液，于53℃水浴中震荡皂化30min，然后用75ml石油醚反复萃取分离，提取液醚层反复用水洗至近中性(pH6.0以上)，蒸馏浓缩并用氮气吹干，然后用50％三氯甲烷(液相专用)50％石油醚混合液定容至25ml，吸取1ml过0.45μm滤膜后进行HPLC测定。
色谱条件：C18色谱柱，流动相甲醇-乙腈-三氯甲烷，检测波长448nm。
标准曲线配制：称取β-胡萝卜素标准品10mg(测定时称取的量为10.8mg)然后用50％三氯甲烷和50％石油醚混合液定容100ml，相当于108μg/ml，然后稀释到72，54，36，21.6，13.5μg/ml，吸取1ml过0.45μm滤膜后进行HPLC测定。制作的标准曲线如图1所示。
计算公式：
c--从标曲查得的胡萝卜素含量，μg/ml；
25--样品定容总体积
m--样品重量
表1实施例1各处理β-胡萝卜素含量
与空白对照组比较，▲P＜0.01；与植物乳杆菌组比较，P＜0.01；与干酪乳杆菌组比较，■P＜0.01。
实施例2：植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum P-8)和干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)Zhang在提高胡萝卜中β-胡萝卜素含量的试验
实验地点：莱西店埠后屯，(实验组和对照组各1.7亩)
种植管理：实验组和对照组各约1.7亩，棚规格长115m，宽10m，每棚起垄13垄，每垄上种植萝卜2行，株距5-6cm，每棚施基肥：硫酸钾复合肥(N∶P∶K为15∶15∶15)300斤，有机肥600-700斤，后期不追肥。
实验时间：2016.04.26-2016.6.23
实验作物：胡萝卜(品种为：诺利红)
使用量及方法：胡萝卜播种之后，随水滴灌微生物菌剂(两种菌的数量比为1∶1，活菌总数含量大于109cfu/mL)2升/棚，后期不再滴灌含菌水，而根据作物长势灌溉不含菌水，保证各处理灌溉量相同。
β-胡萝卜素含量测定方法(高效液相法)：同实施例1
表2实施例2各处理β-胡萝卜素含量
与空白对照组比较，▲P＜0.01；与植物乳杆菌组比较，P＜0.01；与干酪乳杆菌组比较，■P＜0.01。
由表1中检测结果可知，在胡萝卜品种“孟德尔808”上，与空白对照组相比，实验组可提高胡萝卜中β-胡萝卜素的含量，尤其是复合菌组可显著提高胡萝卜中β-胡萝卜素的含量(p＜0.01)；相对于空白对照，复合菌组β-胡萝卜素含量提高了112.67％。由表2中检测结果可知，在胡萝卜品种“诺利红”上，与空白对照组相比，复合菌组也显著提高了胡萝卜中β-胡萝卜素的含量(p＜0.01)；相对于空白对照，复合菌组β-胡萝卜素含量提高了67.63％。值得注意的是，无论是在胡萝卜品种“诺利红”上还是在胡萝卜品种“孟德尔808”上，复合菌组对β-胡萝卜素含量的提高程度相比单菌组均有显著性差异(p＜0.01)。