一种利用实验室人工饲养蜜蜂幼虫评价农药对蜜蜂幼虫毒性的方法与流程

文档序号:12042790阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种利用实验室人工饲养蜜蜂幼虫评价农药对蜜蜂幼虫毒性的方法,其特征在于包括如下步骤:

(1)蜜蜂幼虫的准备:向含有蜂群的蜂箱内插入空蜂脾,将产卵期内的蜂王固定在所述空蜂脾上进行产卵,20~28小时后将蜂王放出至含有蜂卵的蜂脾外,该含有蜂卵的蜂脾继续留在蜂箱内,直到其中的蜂卵孵化成蜜蜂幼虫;

(2)蜜蜂幼虫的实验室饲养:从蜂箱内取出所插入的蜂脾,挑取所述蜜蜂幼虫用基础口粮进行适应性饲养3天,于第4天进行健康检查,选取健康幼虫;

(3)受试农药的添加:将步骤(2)选取的健康幼虫分成对照组幼虫和处理组幼虫并继续饲养3天,其中处理组幼虫用受试饲料饲养,所述受试饲料含有各浓度的受试农药和基础日粮;

(4)化蛹及观察:将步骤(3)中饲养3天后的即将进入蛹化期的幼虫转移至化蛹板的板孔中准备化蛹,观察幼虫在板孔中完成排便、吐丝、化蛹和羽化的过程,统计各幼虫的存活、化蛹或/和羽化情况。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于步骤(1)中,所述蜂群为四周内未用药的、健康的、已知来源和生理状态的蜂群;产卵期内的蜂王在所述空蜂脾上进行产卵的时间优选为24小时;步骤(2)中,所挑取的蜜蜂幼虫为1日龄后期幼虫,其体色为白色。

3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于所述基础日粮的质量组成为:新鲜蜂王浆50±5%,无菌水37±2%,葡萄糖6±1%,果糖6±1%,酵母提取物1±0.5%;基础日粮的优选质量组成为:新鲜蜂王浆50%,无菌水37%,葡萄糖6%,果糖6%,酵母提取物1%。

4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于步骤(2)中,所述适应性饲养采用装有基础日粮的孔板进行;孔板中每孔分配一只蜜蜂幼虫,每孔蜜蜂幼虫基础日粮的饲料量为40~60μL,孔板中的基础日粮每24小时更换;优选的,步骤(2)中的适应性饲养和步骤(3)中的饲养的环境条件均为:温度34±2℃,湿度95±1%,优选温度34±1℃,湿度95%;更优选的,饲养时孔板置于箱底部装有甘油水混合液的密闭箱中,再放于34±1℃培养箱内培养。

5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于步骤(3)中,所述对照组幼虫分为空白对照组幼虫或/和溶剂对照组幼虫;所述空白对照组幼虫用基础日粮饲养,所述溶剂对照组幼虫用添加了溶剂的基础日粮作为饲料饲养,其中每41~61μL饲料中含有溶剂0.5~5μL;所述处理组幼虫分为多个处理组,优选分为至少5个处理组,每个处理组分别用含有不同浓度受试农药的受试饲料饲养。

6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于步骤(3)中,受试饲料的制备方法为:受试农药用蒸馏水或/和对蜜蜂幼虫无毒性的有机溶剂溶解后,配制成一个或多个不同浓度的受试农药溶液,将其分别加入基础日粮中配制得到受试饲料,其中每41~61μL受试饲料中含有受试农药溶液0.5~5μL;优选的,步骤(3)中继续饲养过程中每只蜜蜂幼虫的饲料量为41~61μL,饲料每24小时更换。

7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于步骤(4)中,所述化蛹板孔中垫有干燥的灭菌纸;优选的,即将进入蛹化期的幼虫在转移至化蛹板之前先吸干幼虫体表的饲料;更优选的,转移至化蛹板中的幼虫不再移动,直至蜜蜂幼虫发育完全。

8.一种实验室人工饲养蜜蜂幼虫的方法,其特征在于包括如下步骤:

(1)蜜蜂幼虫的准备:向含有蜂群的蜂箱内插入空蜂脾,将产卵期内的蜂王固定在所述空蜂脾上进行产卵,20~28小时后将蜂王放出至含有蜂卵的蜂脾外,该含有蜂卵的蜂脾继续留在蜂箱内,直到其中的蜂卵孵化成蜜蜂幼虫;

(2)蜜蜂幼虫的实验室饲养:从蜂箱内取出所插入的蜂脾,挑取所述蜜蜂幼虫用基础口粮进行适应性饲养3天,于第4天进行健康检查,选取健康幼虫继续饲养3天;

(3)化蛹及观察:将步骤(2)中继续饲养3天后的即将进入蛹化期的幼虫转移至化蛹板的板孔中准备化蛹,观察幼虫在板孔中完成排便、吐丝、化蛹和羽化的过程,统计各幼虫的存活、化蛹或/和羽化情况。

9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于在步骤(2)中,所挑取的蜜蜂幼虫为1日龄后期幼虫,其体色为白色;优选的,所述基础日粮的质量组成为:新鲜蜂王浆50±5%,无菌水37±2%,葡萄糖6±1%,果糖6±1%,酵母提取物1±0.5%;基础日粮的优选质量组成为:新鲜蜂王浆50%,无菌水37%,葡萄糖6%,果糖6%,酵母提取物1%;在步骤(3)中,所述化蛹板孔中垫有干燥的灭菌纸。

10.权利要求8所述的实验室人工饲养蜜蜂幼虫的方法在评价农药对蜜蜂幼虫毒性方面的用途。

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