一种广州管圆线虫体外培养基和体外培养方法与流程

文档序号:11072623阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种广州管圆线虫体外培养基,其特征在于,所述培养基包括虫卵培养基、I期幼虫培养基、III期幼虫培养基、IV期幼虫培养基和V期幼虫培养基,所述虫卵培养基、I期幼虫培养基、III期幼虫培养基、IV期幼虫培养基和V期幼虫培养基中均含有两性霉素B。

2.根据权利要求1所述的广州管圆线虫体外培养基,其特征在于,所述两性霉素B分别在虫卵培养基、I期幼虫培养基、III期幼虫培养基、IV期幼虫培养基和V期幼虫培养基中的终浓度为0.5μg/mL。

3.根据权利要求1所述的广州管圆线虫体外培养基,其特征在于,所述虫卵培养基包含Ham’s F-12培养基和复合抗生素,所述复合抗生素含有青霉素G钾、硫酸链霉素和两性霉素B。

4.根据权利要求1所述的广州管圆线虫体外培养基,其特征在于,所述I期幼虫培养基包含DMEM 基础培养基、胆固醇乙醇溶液、胎牛血清、螺组织提取液和复合抗生素,所述复合抗生素含有青霉素G钾、硫酸链霉素和两性霉素B。

5.根据权利要求4所述的广州管圆线虫体外培养基,其特征在于,所述I期幼虫培养基包含DMEM 基础培养基、0.1%的5 mg/ml胆固醇乙醇溶液、20%胎牛血清、1%螺组织提取液和0.1%复合抗生素,所述复合抗生素含有青霉素G钾、硫酸链霉素和两性霉素B。

6.根据权利要求1所述的广州管圆线虫体外培养基,其特征在于,所述III期幼虫培养基、IV期幼虫培养基、V期幼虫培养基均包含Waymouth’s 培养基、胎牛血清和复合抗生素,所述复合抗生素含有青霉素G钾、硫酸链霉素和两性霉素B。

7.根据权利要求6所述的广州管圆线虫体外培养基,其特征在于,所述III期幼虫培养基、IV期幼虫培养基、V期幼虫培养基均包含Waymouth’s 培养基、20%胎牛血清和0.1%复合抗生素,所述复合抗生素含有青霉素G钾、硫酸链霉素和两性霉素B。

8.根据权利要求4或5所述的广州管圆线虫体外培养基,其特征在于,所述螺组织提取液的制备方法为:将螺清洗后,加入氯化钠等渗溶液,经组织破碎、离心后取上清,过滤即得。

9.一种广州管圆线虫虫卵的分离培养方法,其特征在于,将已感染广州管圆线虫60d的大鼠进行解剖处理,挑出血管内的成虫,将成虫清洗后放入虫卵培养基中孵育,孵育一段时间后,挑出成虫,剩余的虫卵置于培养箱中培养7~10d即可;所述虫卵培养基包含Ham’s F-12培养基和复合抗生素,所述复合抗生素含有青霉素G钾、硫酸链霉素和两性霉素B。

10.一种广州管圆线虫体外的分离培养方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)虫卵的分离培养:将已感染广州管圆线虫60d的大鼠进行解剖处理,挑出血管内的成虫,将成虫清洗后放入虫卵培养基中孵育,孵育一段时间后,挑出成虫,剩余的虫卵置于培养箱中培养7~10d即可;所述虫卵培养基包含Ham’s F-12培养基和复合抗生素,所述复合抗生素含有青霉素G钾、硫酸链霉素和两性霉素B;

(2)I期幼虫的分离培养:按常规方法分离出I期幼虫,并置于I期幼虫培养基中培养即可;所述I期幼虫培养基包含DMEM 基础培养基、胆固醇乙醇溶液、胎牛血清、螺组织提取液和复合抗生素,所述复合抗生素含有青霉素G钾、硫酸链霉素和两性霉素B;

(3)III期幼虫的分离培养:按常规方法分离出III期幼虫,并置于III期幼虫培养基中培养即可;所述III期幼虫培养基包含Waymouth’s 培养基、胎牛血清和复合抗生素,所述复合抗生素含有青霉素G钾、硫酸链霉素和两性霉素B;

(4)IV期幼虫的分离培养:按常规方法分离出IV期幼虫,并置于IV期幼虫培养基中培养即可;所述IV期幼虫培养基包含Waymouth’s 培养基、胎牛血清和复合抗生素,所述复合抗生素含有青霉素G钾、硫酸链霉素和两性霉素B;

(5)V期幼虫的分离培养:按常规方法分离出V期幼虫,并置于V期幼虫培养基中培养即可;所述V期幼虫培养基包含Waymouth’s 培养基、胎牛血清和复合抗生素,所述复合抗生素含有青霉素G钾、硫酸链霉素和两性霉素B。

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