本发明涉及农业植物栽培领域的百合栽培方法，特别是一种利用龙牙百合杂交后代鳞茎膨大发育及生根的方法。
背景技术：
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百合是百合科百合属（学名：Lilium）多年生草本球茎植物。龙牙百合是我国三大主栽食用百合品种之一，久负盛名，是食用、药用、观赏百合中的名特优品种，也是营养价值最好的品种之一。其鳞茎呈球形，一般横径4～6厘米，鳞片披针形，白色，曝晒时呈黄白色或稍带粉红色。淀粉含量高，营养丰富，味淡不苦，地上茎高约90～120厘米，叶散生，倒披针形。花乳白色有香气，其鳞茎可食用兼药用。据医药典籍《金匮要略》、《本草纲目》、《中国药典》记载，百合有润肺止咳、宁心安神、理脾健胃、补中益气、利大小便、解无名肿毒及止血等功效。现代医学研究证明，百合含有的秋水仙碱、秋水仙胺等对人体细胞有丝分裂有明显的抑制作用，抑制癌细胞及急性痛风等，均有明显疗效。百合还可以提练葡萄糖和奎宁等药品。其鳞茎个头大、片长、肉厚、心实、色泽白、味道美、营养丰富、药效明显，经检测，每百克百合中含水份65%，碳水化含物23.8%，总膳食纤维5.9%，其中果胶4.8%、蛋白质4%、脂肪0.1%、水分1.1%、钙0.9%、铁0.09%、热量132千卡。因此，百合是集食品、药品于一身的绿色保健食品。
龙牙百合被人们称为“南方人参”、“食中珍品”。目前，有关龙牙百合小鳞茎快速膨大并生根培养优化等方面的研究较少。同时近年国内构建百合杂交后代无性系群体的方法报道较多,但多数侧重于切花百合的研究,鲜见食用百合相关研究。有关龙牙百合x兰州百合杂交后代组培鳞茎快速膨大发育并生根的方法更是未见相关报道。
另一方面，食用百合杂交后代种球的培育周期较长，选育一个品种至少需要6-7年时间，如此长的育种周期严重制约着食用百合育种行业的规模化、产业化发展，难于满足市场对自育百合新品种的需求。
因此，如何来加快百合品种的育种进程，并对现有的百合育种技术进行改进，以缩短百合新品种的培育时间。建立起完善的龙牙百合杂交后代快繁技术方法,通过优化杂交百合小鳞茎快速膨大并生根培养等影响因素进行详细研究,以适应龙牙百合杂交后代试管苗规模化生产，从而满足市场对培育百合新品种的需求。
技术实现要素：
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本发明提供一种龙牙百合杂交后代鳞茎膨大发育及生根的方法。通过优化杂交百合小鳞茎快速膨大并生根培养等影响因素,从而为龙牙百合杂交后代试管苗规模化生产提供技术支持。并为食用龙牙百合杂交后代试管苗规模化生产提供技术保证；满足市场对食用百合杂交新品种的需要；从而降低龙牙百合种植成本。
本发明公开一种龙牙百合杂交后代鳞茎膨大发育、生根的方法，以龙牙百合杂交后代蒴果为外植体原料，制龙牙百合杂交后代群体，包括如下方法步骤：1）龙牙百合杂交后代胚挽救，制幼苗；2）丛芽增殖，快速增殖幼苗数量，制丛芽苗；3）小鳞茎诱导，培育分化鳞茎；4）小鳞茎膨大、生根；培育较大的鳞茎并生根，作为生产用的繁殖原始材料直接移入大田种植；所述1）龙牙百合杂交后代胚挽救，是从蒴果中取出种子，挤出幼胚，接种到培养基上，控制培养条件为，培养温度为20-25℃，先在黑暗条件培养至萌发后转入光照培养，控制条件是，光照强度为2000-5000Lx，光照时间12小时/天的条件，培养30-80天，得到幼苗。
本发明一种龙牙百合杂交后代鳞茎膨大发育及生根的方法，所述 2）丛芽增殖是将1）幼苗接种于相应培养基中进行培养,培养条件为：采用光培养，控制培养周期为25-40天,培养温度为22-28℃,光照强度为2000-4000Lux,光周期为12光/12h暗 ,制成丛芽苗。
本发明一种龙牙百合杂交后代鳞茎膨大发育及生根的方法，优选是所述3）小鳞茎诱导，是将2）丛芽增殖制的丛芽苗切去叶片,余下的芽体转接于相应的培养基中培养，进行小鳞茎诱导形成及增殖，制分化鳞茎；采用光培养，控制光培养条件为：培养周期为30-40天,培养温度为20-30℃,培养光照强度为2000-4000Lux,光周期为12光/12h暗。
本发明一种龙牙百合杂交后代鳞茎膨大发育及生根的方法，优选所述4）小鳞茎膨大、生根：是将3）所得的分化鳞茎切割,并切除叶片后,移植于鳞茎膨大发育培养基中培养,进行小鳞茎的膨大生长并生根,控制鳞茎膨大发育培养基的组成组分为包含1-2倍的MS培养基、1.0-5.0g/L多效唑、0.2-0.8mg/L萘乙酸、60-120g/L蔗糖、活性炭1.0-5.0g/L和3.5-10.5g/L琼脂，pH=5.6-6.2。
进一步的，是所述制龙牙百合杂交后代群体，是采用龙牙百合杂交后代蒴果为外植体原料，进行胚挽救，制杂种胚，经不定芽扩繁，再进行结球培养为籽球，待籽球重量为2-3g时，进行春化处理，即制成龙牙百合杂交后代群体。
优选的，是所述龙牙百合杂交后代为龙牙百合和兰州百合杂交后代。
优选的，是控制1）幼苗接种于相应培养基中进行培养1-2次。
进一步的，是控制鳞茎膨大发育培养基中培养二次以上。
优选的，是控制春化处理时间为40-60天。
本发明采用上述方法，经反复进行科学实验，即使用本发明的鳞茎膨大发育培养基，培养60天后,可以使龙牙百合x兰州百合杂交后代组培鳞茎由55mg/个增加到300 mg/个，净增重245mg/个；由102mg/个增加到432mg/个净增重330mg/个，并且生根良好。
本发明通过改进龙牙百合杂交后代组培快繁方法，使用相应的培养试管苗，培养完成后获得具有膨大的鳞茎，可作为生产用的繁殖原始材料直接移入大田种植，大幅度提高了繁殖系数，缩短了龙牙百合杂交后代的生长周期。提高种植效益，能满足龙牙百合产业化、规模化栽培及用种需求。有利于龙牙百合的广泛种植和推广，具有良好的经济效益和社会效益。
具体实施方式：
下面结合具体实例对本发明作进一步说明。
本发明所述各物料均可通过市售获得，或者通过现有技术方法制备得到。
本发明一种龙牙百合杂交后代鳞茎膨大发育生根的方法，以龙牙百合杂交后代蒴果为外植体原料，制龙牙百合杂交后代群体，包括如下方法步骤：1）龙牙百合杂交后代胚挽救，制幼苗；2）丛芽增殖，制丛芽苗；3）小鳞茎诱导，制分化鳞茎；4）小鳞茎的膨大生长并生根。所述1）龙牙百合杂交后代胚挽救，是从蒴果中取出种子，挤出幼胚，接种到于培养基上，控制培养条件为，培养温度为20-25℃，先黑暗培养至萌发后转入光照培养，控制条件是，光照强度为2000-5000Lx，光照时间8-12小时/天的条件下，培养30-80天，得到幼苗。
本发明方法所述龙牙百合杂交后代群体是采用龙牙百合杂交后代蒴果为外植体材料，对采集杂交果实进行胚挽救，胚挽救获得的杂种胚不定芽扩繁，再进行结球培养，当籽球重量生长到2-3g左右时，再经温度为3-5℃下，春化处理40-60天，即形成龙牙百合杂交后代群体。
本发明龙牙百合杂交后代鳞茎膨大发育生根的方法或者是叫龙牙百合杂交后代组培鳞茎膨大发育的方法,包括如下阶段：
1）龙牙百合杂交后代胚挽救，制幼苗：从龙牙百合杂交后代的蒴果中取出种子，挤出幼胚，接种到适宜的相应的培养基上，在培养温度为20-25℃，先黑暗培养，待其萌发后转入光照培养，控制光照强度为2000-5000Lx，光照时间8～12小时/天的条件下，培养30-80天，得到幼苗；
2）丛芽增殖，制丛芽苗，快速增殖幼苗数量；将上述1）得到幼苗，将幼苗接种到适宜的相应的培养基中进行培养,培养条件为：培养周期为30天,培养温度为25℃,光照强度为2000-4000Lux,光周期为12h光/12h暗 ,该阶段培养控制进行2次，也可以2次以上，形成丛芽苗；
3）小鳞茎诱导，制分化鳞茎：将2）所得的丛芽苗切割除去叶片,将余下的芽体转接到适宜的相应的培养基，进行鳞茎的诱导形成及增殖，培养条件为：培养周期为30-40天,培养温度为25℃,培养光照强度为2000-4000Lux,光周期为12h光/12h暗；得分化鳞茎；
4）小鳞茎膨大生根；小鳞茎的膨大生长并生根：将3）所得的分化鳞茎切割下来,并切除叶片后，移植于鳞茎膨大发育培养基中培养,进行小鳞茎的膨大生长并生根,控制培养条件为：培养周期为60天,培养温度为25℃,避光暗培养,所述鳞茎膨大发育培养基其组分组成包含1倍MS培养基、1g/L多效唑、0.2mg/L萘乙酸、80g/L蔗糖、活性炭2g/L和6.5g/L琼脂，pH=5.8；该阶段培养进行2次以上。
本发明通过改善龙牙百合杂交后代组培快繁技术方案，操作过程与培养试管苗类似，培养完成后获得具有膨大的鳞茎，可作为生产用的繁殖原始材料直接移入大田种植，大幅度提高了繁殖系数，缩短了龙牙百合杂交后代的生长周期，有利于龙牙百合杂交种的广泛种植和推广，具有良好的经济效益和社会效益。
上述实施方案中使用的培养基除已公开的外，未说明之处如上述使用的相应的培养基均是使用现有技术市场上市售的应用于本发明技术方面的培养基。