一种盆栽非洲菊组织培养快速繁殖方法与流程

本发明涉及一种盆栽非洲菊组织培养快速繁殖方法，属于农业科学技术领域。

背景技术：

非洲菊(Gerbera jamesonii Bolus)又名扶郎花、大丁草，为菊科大丁草属，多年生草本植物，其花朵硕大、花色丰富、易于栽培管理，在温暖地区可常年供应，近几年已成为世界鲜花市场中最畅销的花卉之一。我国切花非洲菊的栽培比较普遍，在鲜切花市场占有很大份额。而盆栽非洲菊是近年国际上新育成的盆花品种，目前市场上非洲菊的品种几乎都是组培繁殖的切花品种，而专门用于盆花栽培的品种很少。盆花非洲菊或盆栽型非洲菊相对切花非洲菊而言,不同之处主要在于株型上植株较矮，花茎粗壮，叶片较短，花径略小。盆花非洲菊喜光照充足，光线充足能使叶片生长健壮、花梗挺拔粗壮、花色鲜艳，对日照长度无明显反应，温度适宜时可周年开花。目前，市场上的盆栽非洲品种均为杂种F1代，采用种子繁殖，每粒种子约2元造成成本较高，因此，采用组织培养技术进行快速繁殖可为园艺市场提供大量优质种苗，对于促进国内盆栽非洲菊产业的发展具有重要的意义。

技术实现要素：

本发明提出了一种盆栽非洲菊组织培养快速繁殖方法，解决了现有技术中采用种子繁殖盆栽非洲菊成本较高的问题，通过剥取成熟健壮的非洲菊母株花蕾，并按照外植体的选择与消毒步骤、初代培养诱导不定芽步骤、继代培养步骤以及生根培养和移栽驯化步骤进行盆栽非洲菊的培育得到大量植株。

为了解决上述技术问题，本发明提供了如下的技术方案：

本发明涉及一种盆栽非洲菊组织培养快速繁殖方法，包括外植体的选择与消毒、初代培养诱导不定芽、继代培养、生根培养和移栽驯化，所述外植体的选择与消毒是在天气晴朗时 选取成活的盆栽非洲菊母株并置于通风处一周，然后取健壮完整的花蕾，用洗洁精轻轻擦洗后置于流动的自来水下冲洗一小时，然后取该花蕾放置于超净台下，花托部分剪成边长约0.5公分的小块作为外植体，先用70％酒精清洗10秒后用无菌水冲洗3次且每次15秒左右，再移入0.1％升汞中加一滴吐温20，振荡5-8分钟，最后用无菌水漂洗8-12次，所述初代培养诱导不定芽是将所述外植体的选择与消毒得到的外植体接种到含0.8mg/L 6-BA，0.2mg/L NAA的MS培养基中，先暗培养一周，然后置于光合有效辐射(PAR)为40μmolm^-2s^-1的组培架上，保持光照时间12小时，当培养18天后出现外植体增厚、边缘出现大量不定芽且芽粗壮密集，继续培养至第6周直至芽发育为完整的植株，所述继代培养是将所述初代培养诱导不定芽得到的幼株在超净工作台中无菌条件下取出，并将幼株的叶片剥下并切成边长是0.5公分宽的小块，重新接种含有0.8mg/L 6-BA，0.01mg/L NAA的MS培养基上，培养3周后出现不定芽，继续培养3周至不定芽全部成苗，并及时进行分株转接到新的培养基上，继续培养3周，所述生根培养将所述继代培养中获得的健壮植株转接于含有0.5g/L的IBA、32g/L蔗糖和6.5g/L琼脂，pH值为5.8的MS生根培养基中，培养25-30天可得到根长约2cm,植株长至3-4cm高生根的完整植株，所述移栽驯化是将所述生根培养获得的生根苗从培养瓶内挑出，洗净根部的培养基，移栽于预先装满基质的72孔穴盘中，每穴一株，然后放置于苗床上，喷洒杀菌剂后，苗床立即覆盖小拱棚，小拱棚内配备喷雾装置，定期喷雾保湿，移栽后温室遮阳，小拱棚内最大光强不高于160μmolm^-2s^-1的光合有效辐射，温室内的最高温度控制在28℃以下，且最低夜温维持在18℃以上，移栽后逐步降低空气相对湿度进行驯化栽培6周后，将穴盘苗进一步移栽于花盆。

作为本发明的一种优选技术方案，所述移栽驯化步骤中的移栽基质的配比为草炭、珍珠岩按照体积比7:3配制，基质pH调整到6.5。

作为本发明的一种优选技术方案，所述移栽驯化步骤中的杀菌剂为0.2％的甲基托布津溶液。

作为本发明的一种优选技术方案，所述移栽驯化步骤中的逐步降低驯化拱棚内的空气相对湿度的具体特征为：第一周小拱棚内空气相对湿度通过喷雾和拱棚密闭保持95％以上，拱棚薄膜全封闭。一周后，新根长出后逐步揭开薄膜，继续维持空气相对湿度在85％以上一周，然后再加大通风面积，空气湿度逐步降到75％，直至全部揭开拱棚薄膜。

本发明所达到的有益效果是：本发明的方法简单、操作简便，解决了现有技术中采用种子繁殖盆栽非洲菊成本较高的问题，通过剥取成熟健壮的非洲菊母株花蕾，并按照外植体的选择与消毒步骤、初代培养诱导不定芽步骤、继代培养步骤以及生根培养和移栽驯化步骤进 行盆栽非洲菊的培育得到大量植株，具有繁殖系数高，移栽成活率高的优点，可在短期内提供大量盆栽非洲菊的优质种苗，对盆栽非洲菊规模化推广具有重要作用。

附图说明

附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：

图1是不同培养基初代培养不定芽诱导效果比较；

图2不同激素水平组合对盆栽非洲菊继代培养增殖的影响；

图3培养基不同激素水平和蔗糖含量对盆栽非洲菊瓶内生根的影响；

具体实施方式

以下结合研发实施过程对本发明的技术方案进一步说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。

实施例1

一种盆栽非洲菊的组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：(1)外植体的选择和消毒：在引种成活生长健壮的盆栽非洲菊母株在天气晴朗时，置于通风处一周后，取健壮完整的花蕾(花柄长2-3cm)，用洗洁精轻轻擦洗后置于流动的自来水下冲洗1小时。取该花蕾放置于超净台下，先用70％酒精清洗10s后用无菌水冲洗3次(每次15s左右)，再移入0.1％升汞中加一滴吐温20，振荡5-8分钟，最后用无菌水漂洗7-10次。将花托部分剪成边长约0.5cm的小块作为外植体，(2)初代培养诱导不定芽：将步骤(1)得到的外植体接种到1种不含生长素和3种添加不同生长素的MS培养基中，即培养基处理含0.5mg/L的6-BA，0.1mg/L的NAA、IBA、或IAA，6g/L的琼脂，30g/L蔗糖，pH5.8。每瓶接种5个外植体。培养室温度为25℃士2℃，先暗培养一周后，而后置于光合有效辐射(PAR)为40μmolm^-2s^-1的组培架上，光照时间12h。仅添加0.5mg/L的培养基处理培养26天后外植体增厚，但未见明显的愈伤组织，边缘出现不定芽，芽粗壮，但每个外植体只有14个芽。添加0.5mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA的MS培养基在培养19天后即出现不定芽，每个外植体共产生21个不定芽，芽体比较均匀。添加0.1mg/L的IBA、IAA的两个培养基每个外植体产生的不定芽数分别为16个和18个，介于两者之间。继续培养至第6周，芽发育为完整但未生根的植株，(3)继代培养：将步骤(2)中得到的幼株在超净工作台中无菌条件下取出，将幼株重新接种到继代培养基中。继代培养基共设置不同激素水平组合的10个处理，以不加任何激素的MS培养基为对照(图2)。每瓶接种5个幼株。培养室温度为25℃士2℃，光合有效辐射(PAR)为40μ molm^-2s^-1，光照时间12h。通过数据分析可以看出，6-BA浓度对不定芽产生数量有显著影响(P＝0.005，而NAA浓度对其没有显著影响(P＝0.247两种激素的交互作用也有显著影响。每个外植体产生的不定芽数量总体随6-BA浓度的升高而增加，但6-BA浓度过高，芽密集且小，而且芽体玻璃化现象严重。综合增殖系数和苗体质量，含有0.5mg/L的6-BA，0.01mg/L的NAA，6g/L的琼脂，30g/L蔗糖，pH5.8的MS培养基为最佳，培养3周后外植体3周出现不定芽，继续培养3周不定芽全部成苗，及时进行分株转接到新的培养基上，每瓶转接20株，继续培养3周，(4)生根培养：将步骤(3)中获得的健壮植株转接于MS生根培养基中，培养室温度为25℃士2℃，光合有效辐射(PAR)为40μmolm^-2s^-1，光照时间12h，培养25-30天可得到生根的完整植株。蔗糖浓度对瓶苗株高和根数有显著影响，而IBA浓度对瓶苗叶片数、根数、根长、株高都有显著影响。两种蔗糖浓度下，0.5mg/L IBA时根数均最多，根长也最长，植株也最高。但高浓度IBA处理瓶苗的根细长不均匀，苗体较弱；而MS生根培养基含有0.3g/L的IBA、30g/L蔗糖和5.5g/L琼脂时，瓶苗较为健壮，根均匀粗壮，易于移栽，在根长约15mm,植株长至1.5-2cm高时即可用于移栽，(5)移栽驯化：将步骤(4)获得的生根苗从培养瓶内挑出，洗净根部的培养基，移栽于装满基质的72孔穴盘中，每穴一株，放置于苗床上，喷施0.2％的甲托溶液，苗床覆盖小拱棚，小拱棚内配备喷雾装置，定期喷雾保湿。移栽基质的配比为草炭：珍珠岩＝7:3，基质pH为6.5，装满穴盘后浇透水。移栽后温室遮阳，小拱棚内最大光强不高于160μmolm^-2s^-1的光合有效辐射。驯化第一周小拱棚内空气相对湿度通过喷雾和拱棚密闭保持95％以上，拱棚薄膜全封闭。一周后，新根长出后逐步揭开薄膜，继续维持空气相对湿度在85％以上一周，然后再加大通风面积，空气湿度逐步降到75％。温室内的最高温度控制在30℃以下，最低夜温维持在15℃以上。移栽驯化栽培6周后，可将穴盘苗进一步移栽于花盆。移栽成活率达到96％以上。

进一步，移栽驯化5步骤中的移栽基质的配比为草炭、珍珠岩按照体积比7:3配制，基质pH调整到6.5。

移栽驯化5步骤中的杀菌剂为0.2％的甲基托布津溶液。

本发明的方法简单、操作简便，解决了现有技术中采用种子繁殖盆栽非洲菊成本较高的问题，通过剥取成熟健壮的非洲菊母株花蕾，并按照外植体的选择与消毒1步骤、初代培养诱导不定芽2步骤、继代培养3步骤以及生根培养和移栽驯化4步骤进行盆栽非洲菊的培育得到大量植株，具有繁殖系数高，移栽成活率高的优点，可在短期内提供大量盆栽非洲菊的优质种苗，对盆栽非洲菊规模化推广具有重要作用。

最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管 参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。