本发明涉及一种花卉育苗和繁殖技术，尤其涉及一种卡特兰高效组织培养的培养方法。
背景技术：
卡特兰(Cattleya)属兰科(Orchidaceae)卡特兰属植物，原产于中南美洲，尤其以哥伦比亚和巴西最为有名，与石斛兰、蝴蝶兰、文心兰并称为世界四大观赏洋兰。卡特兰一年四季都有不同的品种开花，因其花大形美、色彩丰富艳丽并且大多具有芳香，被世界公认为“洋兰之王”，不仅是优良的室内盆花，同时还是重要的高档切花。
近几年来随着我国花卉产业日新月异的发展，人民生活水平的提高，卡特兰生产也快速崛起，并且占有相当的市场份额，越来越受人们的重视。通过组培手段实现卡特兰的快繁，不仅有利于保持和增殖一些珍贵的卡特兰资源，同时也有利于其产业化发展，然而褐化、愈伤组织的诱导和增殖是卡特兰在组织培养过程中存在的难题，这制约着卡特兰工厂化育苗和繁殖，限制了产业的发展。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种育苗优良、组培效率高的卡特兰高效组织培养的培养方法。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
本发明的卡特兰高效组织培养的培养方法，包括步骤：
外植体消毒：采用10％NaClO、5％NaClO、2％NaClO、1％NaClO、0.5％NaClO消毒；
防止褐化及初代培养：1/2MS+蔗糖20g/L+琼脂0g/L+PVP 6g/L，10天暗培养处理，培养温度18至22℃；
愈伤组织诱导及继代培养：MS+蔗糖20g/L+琼脂5.8g/L+6-BA3mg/L+NAA0.5mg/L+PVP3g/L，接种后以21d为继代周期培养效果最好，pH＝5.7，培养温度23至27℃，光照强度为60μmol·m-2s-1，光照时间12小时/天。
生根壮苗：MS+NAA0.1mg/L+6-BA2.0mg/L+香蕉10g/L+土豆泥100g/L+蔗糖30g/L+活性炭1g/L+琼脂4g/L，pH＝5.7，培养温度23至27℃左右，光照强度为60μmol·m-2s-1，光照时间12小时/天。
由上述本发明提供的技术方案可以看出，本发明实施例提供的卡特兰高效组织培养的培养方法，通过对现有的卡特兰组织培养的培养方法进行创新改良，以MS为基本培养基，培养基中配有NAA植物生长调节剂、6-BA细胞分裂素、活性炭、土豆、香蕉等物质。通过调节培养基中的成分、控制培养条件，给出卡特兰外植体消毒的最佳条件以及防褐化效果最好的培养基以及培养条件，卡特兰外植体经过初代培养以及愈伤组织继代培养，最后生根壮苗，优化了卡特兰愈伤组织诱导和增殖体系，提高了卡特兰工厂化生产的组培效率。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明的保护范围。
本发明的卡特兰高效组织培养的培养方法，其较佳的具体实施方式是：
包括步骤：
外植体消毒：采用10％NaClO、5％NaClO、2％NaClO、1％NaClO、0.5％NaClO消毒；
防止褐化及初代培养：1/2MS+蔗糖20g/L+琼脂0g/L+PVP 6g/L，10天暗培养处理，培养温度18至22℃；
愈伤组织诱导及继代培养：MS+蔗糖20g/L+琼脂5.8g/L+6-BA3mg/L+NAA0.5mg/L+PVP3g/L，接种后以21d为继代周期培养效果最好，pH＝5.7，培养温度23至27℃，光照强度为60μmol·m-2s-1，光照时间12小时/天。
生根壮苗：MS+NAA0.1mg/L+6-BA2.0mg/L+香蕉10g/L+土豆泥100g/L+蔗糖30g/L+活性炭1g/L+琼脂4g/L，pH＝5.7，培养温度23至27℃左右，光照强度为60μmol·m-2s-1，光照时间12小时/天。
本发明的卡特兰高效组织培养的培养方法，通过对现有的卡特兰组织培养的培养方法进行创新改良，以MS为基本培养基，培养基中配有NAA植物生长调节剂、6-BA细胞分裂素、活性炭、土豆、香蕉等物质。通过调节培养基中的成分、控制培养条件，给出卡特兰外植体消毒的最佳条件以及防褐化效果最好的培养基以及培养条件，卡特兰外植体经过初代培养以及愈伤组织继代培养，最后生根壮苗，优化了卡特兰愈伤组织诱导和增殖体系，提高了卡特兰工厂化生产的组培效率。
具体实施例：
(1)外植体消毒：健壮植株上选取的新芽为外植体，芽长6cm左右为宜，将芽体切离母株后在实验室里用流动自来水冲洗30min，在超净台中剥除最外面的一层苞叶，在70％酒精中蘸一下(1-2s)，立即浸泡在10％的NaClO水溶液中10min，稍加摇动，取出后立即用无菌水冲洗，再剥去一层苞叶，放入5％的NaClO水溶液中5min后用无菌水冲洗，以此类推，消毒时间逐渐缩短，直至剥至留下最后的芽体。以生长点为中心，在培养皿上切取直径5mm左右的茎尖，泡在0.5％的NaClO水溶液中，1min后取出，用无菌水冲洗数次后放在已准备好的培养基上。
(2)将外植体接种到培养基1/2MS+蔗糖20g/L+琼脂0g/L+PVP 6g/L，10天暗培养处理。温度为20℃左右。
(3)转接到MS+蔗糖20g/L+琼脂5.8g/L+6-BA 3mg/L+NAA0.5mg/L+PVP 3g/L的培养基上，进行愈伤组织诱导及继代培养，pH＝5.7。培养温度25℃左右，光照强度为60μmol·m-2s-1，光照时间12小时/天。接种后以21d为继代周期培养效果最好。继代培养中，愈伤组织很容易形成丛生芽，可以利用丛生芽的增殖替代原球茎的增殖。具体做法是：将丛生芽切下移入新培养基中作为种苗，大苗按大小分开栽种，种苗瓶内丛生芽长大，其基部又长出新的丛生芽，这样可以通过分苗，不断得到新的大苗和种苗。
(4)当分化出2-3片叶，可转入生根和壮苗培养基，MS+NAA0.1mg/L+6-BA2.0mg/L+香蕉10g/L+土豆泥100g/L+蔗糖30g/L+活性炭1g/L+琼脂4g/L，pH＝5.7，培养温度25℃左右，光照强度为60μmol·m-2s-1，光照时间12小时/天。
(5)当苗高5-8cm，具有2-3条健壮的根时进行出瓶移栽。试管苗出瓶前必须先进行炼苗，将瓶苗置于散射阳光处，均匀照射20天左右，使试管苗长得更健壮，出瓶后能更快地适应外界环境条件。
(6)出瓶后的小苗经清洗、消毒、晾干后用直径5cm的白色透明、透气良好的小塑料盆种植。基质用水苔。瓶苗种完后当天必须立即喷施多菌灵1500倍，以预防病害传染。先置于光线较弱(400μmol·m-2s-1)的温室(20～25℃)，3～4周后将光线提高到正常种植的栽培光度。空气相对湿度不宜低于80％。在此过程中应随时清除病叶，并根据植株生长情况，及时调整水肥管理和病虫害防治。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应该以权利要求书的保护范围为准。