本发明涉及甘薯脱毒领域，尤其涉及一种遗字138甘薯的脱毒快繁方法。
背景技术：
遗字138甘薯食味好，含糖量高，粘软度好，是城乡人民喜欢食用的品种之一。它适宜作为春、夏薯栽培，耐肥、耐渍性较好，块数较多，薯块大小较均匀适中。遗字138甘薯以薯块和茎蔓等营养器官进行无性繁殖，在引种、繁殖和生产过程中易造成甘薯病毒病的积累和蔓延，从而导致产量降低、品质下降、种性退化等问题。因此利用健康种苗进行快繁就成为了必然选择，但是一般的脱毒方法脱毒效果并不是很明显，不仅耗费原料，还影响收益。
技术实现要素：
本发明旨在解决现有技术的不足，而提供一种遗字138甘薯的脱毒快繁方法。
本发明为实现上述目的，采用以下技术方案：
一种遗字138甘薯的脱毒快繁方法，具体步骤为：
(1)无菌外植体的获得：
选取遗字138甘薯苗顶部1.5cm长的茎尖，先用70％的酒精浸泡10-15s，再用0.1％的氯化汞消毒6-8min，然后将其用无菌水冲洗6-8次，在超净工作台上，采用解剖镜观察进行茎尖的剥离，获得0.3-0.4mm的茎尖分生组织；
(2)茎尖分生组织培养脱毒：
将剥离获得的茎尖分生组织接种在茎尖诱导培养基上，静置于温度为30℃、光照强度为3000lx的条件下，每天进行18h光照培养，培养时间为18-25天，将其转入普通培养基上，每天进行15h光照培养，培养时间为55-60天，得到茎尖试管苗；
(3)脱毒鉴定：
首先采取目测法，淘汰弱苗和显症苗，然后再采用血清学法鉴定甘薯病毒，淘汰没有脱毒的遗字138甘薯苗；
(4)脱毒甘薯苗快繁：
在无菌条件下，将经过茎尖分生组织培养和脱毒鉴定后的优质遗字138甘薯苗茎尖，切成单节接种到普通培养基上，静置于温度为30℃，光照强度为3000lx的条件下，每天进行15h光照培养，培养时间为20-23天，按此程序不断的转接培养，进行脱毒遗字138甘薯苗的快繁。
所述茎尖诱导培养基的组成为MS+3％蔗糖+0.7％琼脂+1mg/L6-BA。
所述普通培养基的组成为MS+3％蔗糖+0.7％琼脂。
所述血清学法鉴定遗字138甘薯病毒的具体操作方法为：每试管苗取基部2-3片叶装入塑料袋中，加入1mlTBS-DIECA提取缓冲液，轻轻碾压，使样品与组织液混匀，4℃下静置70-80min，取上清液点样在准备好的硝酸纤维素样膜上，进行斑点酶联免疫吸附实验，然后冲洗、显色，如果呈现蓝紫色为没有脱毒，无色为脱去病毒。
本发明的有益效果是：本发明提供了一种简单易行的遗字138甘薯脱毒快繁的方法，能够达到很好的脱毒效果，提供了大量的优质种苗，利用这种优质健康种苗进行快繁，能够提高种植收益，惠及广大种植户和开发企业。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明：
实施例1：
一种遗字138甘薯的脱毒快繁方法，具体步骤为：
(1)无菌外植体的获得：
选取遗字138甘薯苗顶部1.5cm长的茎尖，先用70％的酒精浸泡10s，再用0.1％的氯化汞消毒8min，然后将其用无菌水冲洗8次，在超净工作台上，采用解剖镜观察进行茎尖的剥离，获得0.3mm的茎尖分生组织；
(2)茎尖分生组织培养脱毒：
将剥离获得的茎尖分生组织接种在茎尖诱导培养基上，静置于温度为30℃、光照强度为3000lx的条件下，每天进行18h光照培养，培养时间为18天，将其转入普通培养基上，每天进行15h光照培养，培养时间为60天，得到茎尖试管苗；
(3)脱毒鉴定：
首先采取目测法，淘汰弱苗和显症苗，然后再采用血清学法鉴定甘薯病毒，淘汰没有脱毒的遗字138甘薯苗；
(4)脱毒甘薯苗快繁：
在无菌条件下，将经过茎尖分生组织培养和脱毒鉴定后的优质遗字138甘薯苗茎尖，切成单节接种到普通培养基上，静置于温度为30℃，光照强度为3000lx的条件下，每天进行15h光照培养，培养时间为23天，按此程序不断的转接培养，进行脱毒遗字138甘薯苗的快繁。
所述茎尖诱导培养基的组成为MS+3％蔗糖+0.7％琼脂+1mg/L6-BA。
所述普通培养基的组成为MS+3％蔗糖+0.7％琼脂。
所述血清学法鉴定遗字138甘薯病毒的具体操作方法为：每试管苗取基部2片叶装入塑料袋中，加入1mlTBS-DIECA提取缓冲液，轻轻碾压，使样品与组织液混匀，4℃下静置70min，取上清液点样在准备好的硝酸纤维素样膜上，进行斑点酶联免疫吸附实验，然后冲洗、显色，如果呈现蓝紫色为没有脱毒，无色为脱去病毒。
本发明提供了一种简单易行的遗字138甘薯脱毒快繁的方法，能够达到很好的脱毒效果，提供了大量的优质种苗，利用这种优质健康种苗进行快繁，能够提高种植收益，惠及广大种植户和开发企业。
实施例2：
一种遗字138甘薯的脱毒快繁方法，具体步骤为：
(1)无菌外植体的获得：
选取遗字138甘薯苗顶部1.5cm长的茎尖，先用70％的酒精浸泡15s，再用0.1％的氯化汞消毒6min，然后将其用无菌水冲洗6次，在超净工作台上，采用解剖镜观察进行茎尖的剥离，获得0.4mm的茎尖分生组织；
(2)茎尖分生组织培养脱毒：
将剥离获得的茎尖分生组织接种在茎尖诱导培养基上，静置于温度为30℃、光照强度为3000lx的条件下，每天进行18h光照培养，培养时间为25天，将其转入普通培养基上，每天进行15h光照培养，培养时间为55天，得到茎尖试管苗；
(3)脱毒鉴定：
首先采取目测法，淘汰弱苗和显症苗，然后再采用血清学法鉴定甘薯病毒，淘汰没有脱毒的遗字138甘薯苗；
(4)脱毒甘薯苗快繁：
在无菌条件下，将经过茎尖分生组织培养和脱毒鉴定后的优质遗字138甘薯苗茎尖，切成单节接种到普通培养基上，静置于温度为30℃，光照强度为3000lx的条件下，每天进行15h光照培养，培养时间为20天，按此程序不断的转接培养，进行脱毒遗字138甘薯苗的快繁。
所述茎尖诱导培养基的组成为MS+3％蔗糖+0.7％琼脂+1mg/L6-BA。
所述普通培养基的组成为MS+3％蔗糖+0.7％琼脂。
所述血清学法鉴定遗字138甘薯病毒的具体操作方法为：每试管苗取基部3片叶装入塑料袋中，加入1mlTBS-DIECA提取缓冲液，轻轻碾压，使样品与组织液混匀，4℃下静置80min，取上清液点样在准备好的硝酸纤维素样膜上，进行斑点酶联免疫吸附实验，然后冲洗、显色，如果呈现蓝紫色为没有脱毒，无色为脱去病毒。
本发明提供了一种简单易行的遗字138甘薯脱毒快繁的方法，能够达到很好的脱毒效果，提供了大量的优质种苗，利用这种优质健康种苗进行快繁，能够提高种植收益，惠及广大种植户和开发企业。
实施例3：
一种遗字138甘薯的脱毒快繁方法，具体步骤为：
(1)无菌外植体的获得：
选取遗字138甘薯苗顶部1.5cm长的茎尖，先用70％的酒精浸泡13s，再用0.1％的氯化汞消毒7min，然后将其用无菌水冲洗7次，在超净工作台上，采用解剖镜观察进行茎尖的剥离，获得0.3mm的茎尖分生组织；
(2)茎尖分生组织培养脱毒：
将剥离获得的茎尖分生组织接种在茎尖诱导培养基上，静置于温度为30℃、光照强度为3000lx的条件下，每天进行18h光照培养，培养时间为22天，将其转入普通培养基上，每天进行15h光照培养，培养时间为57天，得到茎尖试管苗；
(3)脱毒鉴定：
首先采取目测法，淘汰弱苗和显症苗，然后再采用血清学法鉴定甘薯病毒，淘汰没有脱毒的遗字138甘薯苗；
(4)脱毒甘薯苗快繁：
在无菌条件下，将经过茎尖分生组织培养和脱毒鉴定后的优质遗字138甘薯苗茎尖，切成单节接种到普通培养基上，静置于温度为30℃，光照强度为3000lx的条件下，每天进行15h光照培养，培养时间为21天，按此程序不断的转接培养，进行脱毒遗字138甘薯苗的快繁。
所述茎尖诱导培养基的组成为MS+3％蔗糖+0.7％琼脂+1mg/L6-BA。
所述普通培养基的组成为MS+3％蔗糖+0.7％琼脂。
所述血清学法鉴定遗字138甘薯病毒的具体操作方法为：每试管苗取基部3片叶装入塑料袋中，加入1mlTBS-DIECA提取缓冲液，轻轻碾压，使样品与组织液混匀，4℃下静置75min，取上清液点样在准备好的硝酸纤维素样膜上，进行斑点酶联免疫吸附实验，然后冲洗、显色，如果呈现蓝紫色为没有脱毒，无色为脱去病毒。
本发明提供了一种简单易行的遗字138甘薯脱毒快繁的方法，能够达到很好的脱毒效果，提供了大量的优质种苗，利用这种优质健康种苗进行快繁，能够提高种植收益，惠及广大种植户和开发企业。
上面对本发明进行了示例性描述，显然本发明具体实现并不受上述方式的限制，只要采用了本发明的方法构思和技术方案进行的各种改进，或未经改进直接应用于其它场合的，均在本发明的保护范围之内。