本发明属于生物防治领域，具体涉及枯草芽孢杆菌菌株bab-1在防治瓜类白粉病上的应用。
背景技术：
：瓜类白粉病是瓜类生产上最主要的叶部病害之一，该病害主要由二孢白粉菌(erysiphecichoracearumhe)和单囊壳菌(sphaerothecafuliginea)两种真菌引起，我国以单囊壳菌(sphaerothecafuliginea)为主。瓜类白粉病主要危害黄瓜、甜瓜、西葫芦、南瓜和苦瓜等作物，尤其黄瓜和甜瓜是我国北方温室主栽蔬菜和水果，其白粉病的发生，严重影响黄瓜和甜瓜的产量和品质；通常因白粉病而导致的黄瓜或甜瓜减产约在10％，而流行年份高达30％左右。该病菌从幼苗期到成株期都能侵染瓜类植株，具有流行性强、发病率高、潜育期短和再侵染频繁的特点，是瓜类生产中亟待解决的问题。瓜类白粉病以化学防治为主，如托布津、粉锈宁、瑞毒铜、多菌灵、氟硅唑、仙生、世高等是用于防治黄瓜白粉病的主要化学农药。但是长期大量使用化学农药，具有病原菌容易产生抗药性，致使防治效果降低，同时容易造成农产品和环境污染、引起新病害或次生病害大发生等问题。生物防治由于具有专化性强、药效持久性好、不易产生抗药性、不会造成环境污染以及成本低等优点，日益受到青睐。目前防治瓜类白粉病的微生物主要有：地衣芽孢杆菌(bacilluslicheniformis，cn102399712a)、绿色木霉(trichodermaviride，cn101724572a)、黄麻链霉菌(streptomycescorchorusii，cn102870821a)枯草芽孢杆菌(bacillussubtilis，cn1934241a，cn104403970a)、淡紫灰链霉菌(strepomyceslavendulae，cn101481669a)、哈茨木霉菌(trichodermaharziamum，cn101575574a)和蕈状芽孢杆菌(bacillusmycoides，cn105002120a)等，但是商品化的微生物制剂并不多。另外，由于生物多样性和共同进化作用，需要不断筛选新的生物微生物，以应对病原菌的生物多样性和生理小种的不断进化。专利《一种枯草芽孢杆菌及其菌剂和应用》(cn101148650a)中公开了枯草芽孢杆菌菌株bab-1在防治棉花立枯病菌、小麦纹枯病菌、番茄灰霉病菌、黄瓜灰霉病菌、番茄早疫病菌、黄瓜枯萎病菌、玉米穗腐病菌、小麦赤霉病菌、棉花枯萎病菌、玉米黄斑病菌和小麦全蚀病菌等植物病害上的应用，但是没有发现将bab-1用于防治瓜类白粉病的报道。技术实现要素：本发明目的在于提供枯草芽孢杆菌菌株bab-1在防治瓜类白粉病上的用途。本发明另一目的在于提供含有bab-1的微生物菌剂在防治瓜类白粉病上的用途。本发明第三目的在于提供利用枯草芽孢杆菌菌株bab-1防治瓜类白粉病的方法。本发明通过以下技术方案实现：本发明提供了枯草芽孢杆菌(bacillussubtilis)菌株bab-1在防治瓜类白粉病上的应用。所述的枯草芽孢杆菌(baci11ussubtilis)菌株bab-1的保藏编号为cgmccno.2099(参见cn101148650a)。上述应用中所述的瓜类白粉病是指黄瓜白粉病或甜瓜白粉病等。上述应用中所述的瓜类白粉病的病原菌为二孢白粉菌(erysiphecichoracearumhe)或瓜单囊壳菌(sphaerothecafuliginea)。本发明还提供了含有枯草芽孢杆菌bab-1的微生物菌剂在防治瓜类白粉病上的应用。所述的微生物菌剂的活性成分为枯草芽孢杆菌bab-1菌体。所述的微生物菌剂为液体制剂。所述的微生物菌剂的制备方法，参见cn101148650a说明书。所述的瓜类白粉病是指黄瓜白粉病或甜瓜白粉病等。所述的瓜类白粉病的病原菌为二孢白粉菌(erysiphecichoracearumhe)或瓜单囊壳菌(sphaerothecafuliginea)。本发明还提供了利用含有枯草芽孢杆菌bab-1的微生物菌剂防治瓜类白粉病的方法，包括将含有枯草芽孢杆菌bab-1的微生物菌剂用水稀释至活菌体数为107cfu/ml，于瓜类白粉病发病前进行叶面喷雾。本发明具有的优点和有益效果：(1)本发明为防治瓜类白粉病提供了一种有效生物防治方法；(2)枯草芽孢杆菌bab-1对瓜类白粉病的药效高，平均防效在85.0％以上；(3)利用枯草芽孢杆菌bab-1及其菌剂防治瓜类白粉病专化性强，且不易产生抗药性；(4)本发明涉及的微生物菌剂对人、畜安全，没有环境污染问题；(5)本发明涉及的微生物菌剂制备方法简单、成本低、使用简单。具体实施方式下面以具体实施例来进一步清楚地解释本发明，但是不以任何方式构成对本发明的限制。下述实施例中的实验方法，如无特别说明，均为常规方法；下述实施例中的百分含量，如无特别说明，均为重量百分含量。实施例1bab-1微生物菌剂的制备按照如下步骤进行：(1)菌种活化：将保存于-80℃的枯草芽孢杆菌(baci11ussubtilis)菌株bab-1(保藏编号为cgmccno.2099)在lb平板培养基(其组成成分及其重量比为：胰蛋白胨1g，酵母提取物0.5g，氯化钠1g，琼脂粉15g，水1000ml)上进行活化(30℃)，挑取单菌落在lb斜面培养基(其组成成分及其重量比同lb平板培养基)上在32℃下培养20小时，得活化的菌株；(2)种子液的制备：按常规方法制作lb液体培养基(其组成成分及其重量比为：胰蛋白胨1g，酵母提取物0.5g，氯化钠1g，水1000ml)，在250ml三角瓶中装入lb培养液100ml，高压湿热灭菌，待温度降到室温后，每瓶中接入一接种环步骤(1)中活化好的菌株，在30℃、摇床转速190rpm的条件下进行振荡培养24h小时，得种子液；(3)蔗糖豆饼培养基的制备：按照重量百分比将蔗糖3.0％，豆饼粉2％，nacl0.1％，caco30.3％，kh2po40.02％和mgso4·7h2o0.03％加入水中，搅拌混合均匀，即得蔗糖豆饼培养基；分装于500ml三角瓶中，每瓶200ml；在121℃对蔗糖豆饼培养基进行灭菌30分钟，再降温到30℃备用；(4)发酵培养：向步骤(3)所得每瓶蔗糖豆饼培养基200ml中接种步骤(2)所得种子液2ml；在30℃、摇床转速190rpm条件下进行发酵培养36h，以后每隔30分钟从三角瓶中取样进行镜检，对视野中的芽孢和总菌体数进行计数，并计算芽孢率(芽孢率(％)＝成熟芽孢数/(成熟芽孢数+菌体数)×100)；芽孢率达到90％时停止发酵培养；共发酵培养约48h，得枯草芽孢杆菌bab-1的液体制剂。实施例2bab-1微生物菌剂对黄瓜白粉病防效盆栽对比试验(一)试验材料：(1)黄瓜品种：津优1号。(2)黄瓜白粉病病原菌(sphaerothecafuliginea)sf-1分生孢子悬浮液。初始菌株来自河北农业大学，接种用黄瓜白粉病病原菌分生孢子悬浮液由初始菌株在河北省农林科学院植物保护研究所植病生防实验室扩繁得来。(二)试验处理：(1)bab-1液体制剂：实施例1制备的bab-1液体制剂的100倍水稀释液。(2)空白对照：清水。(三)试验方法：本试验在河北省农林科学院植物保护研究所植病生防实验室内进行。在直径6cm的营养钵中培育津优1号黄瓜苗，育苗基质为蛭石，每个营养钵播种两粒种子，出苗后留取一棵壮苗。待黄瓜苗子叶完全展平开展试验。试验设2个处理，处理1为在黄瓜子叶上喷施实施例1制备的bab-1液体制剂100倍水稀释液，处理2为空白对照，喷施等量清水；每个处理重复4次，每个重复20株黄瓜苗。在25℃条件下保湿24h，然后喷雾接种黄瓜白粉病病原菌sf-1分生孢子悬浮液(1×105个/ml)，于25℃恒温培养(光照14小时，黑暗10小时)。待空白对照子叶充分发病后,调查黄瓜子叶白粉病病情并计算病情指数和防效。调查方法、分级标准和防治效果计算方法参照中华人民共和国国家标准农药田间药效试验准则(一)杀菌剂防治黄瓜白粉病(gb/t17980.30-2000)。结果(见表1)经枯草芽孢杆菌(bacillussubtilis)bab-1液体制剂处理的黄瓜子叶的病情指数为1.37，显著低于空白对照的病情指数31.83，bab-1液体制剂对黄瓜白粉病的防效为95.70％。说明枯草芽孢杆菌菌株bab-1及其bab-1液体制剂对黄瓜白粉病具有突出的防治效果。表1bab-1液体制剂对黄瓜白粉病防效对比试验结果处理病情指数防效(％)bab-1液体制剂1.37b95.70空白对照31.83a/实施例3bab-1微生物菌剂对黄瓜白粉病防效盆栽对比试验(一)试验材料：(1)黄瓜品种：津优1号。(2)黄瓜白粉病病原菌(sphaerothecafuliginea)sf-1分生孢子悬浮液(同实施例2)。(二)试验处理：(1)bab-1液体制剂：实施例1制备的bab-1液体制剂的100倍水稀释液；(2)空白对照：清水。(三)试验方法：本试验在河北省农林科学院植物保护研究所植病生防实验室内进行。在直径6cm的营养钵中培育津优1号黄瓜苗，育苗基质为蛭石，每个营养钵播种两粒种子，出苗后留取一棵壮苗。待黄瓜苗生长出两片真叶时移栽到直径15cm的塑料花盆中(花盆中装填蛭石与田园土按照1:1比例配成的基质)，在25℃恒温培养(光照14小时，黑暗10小时)。将黄瓜苗用竹竿支撑固定，待长出5-7片真叶后开展试验。处理1喷施实施例1制备的bab-1液体制剂100倍水稀释液；处理2为空白对照，喷施等量清水。每个处理重复4次，每个重复5盆黄瓜苗。在25℃条件下保湿24h；然后喷雾接种黄瓜白粉病病原菌sf-1分生孢子悬浮液(1×105个/ml)，继续于25℃恒温培养(光照14小时，黑暗10小时)。待空白对照真叶充分发病后,调查黄瓜真叶白粉病病情并计算病情指数和防效(gb/t17980.30-2000)。结果(见表2)经bab-1液体制剂处理的黄瓜真叶的病情指数为6.42，显著低于空白对照的病情指数87.05；bab-1液体制剂对黄瓜白粉病的防效为92.62％。说明枯草芽孢杆菌菌株bab-1及其bab-1液体制剂对黄瓜白粉病具有突出的防治效果。表2bab-1液体制剂对黄瓜白粉病防效对比试验结果处理病情指数防效(％)bab-1液体制剂6.42b92.62空白对照87.05a/实施例4bab-1微生物菌剂对黄瓜白粉病防效田间对比试验(一)试验材料：黄瓜品种：津优1号。(二)试验处理：(1)bab-1液体制剂：实施例1制备的bab-1液体制剂的100倍水稀释液。(2)化学药剂：10％苯醚甲环唑水分散粒剂(瑞士先正达作物保护有限公司)。(3)空白对照：清水。(三)试验方法：本试验于2015年春季在河北省保定市徐水县遂城镇城北庄村杨宝山黄瓜大棚内开展。翻地、施肥、播种、浇水同当地农事操作。试验设置3个处理，处理1为微生物菌剂，喷施实施例1制备的bab-1液体制剂100倍水稀释液；处理2为化学药剂，喷施10％苯醚甲环唑水分散粒剂(瑞士先正达作物保护有限公司生产)800倍水稀释液；处理3为空白对照，喷施等量清水；每个处理重复4次，每个重复3行，每行约25棵黄瓜苗。在黄瓜白粉病发病之前开始试验，间隔7-10天处理一次，直到空白对照充分发病，调查黄瓜白粉病病情并计算病情指数和防效(gb/t17980.30-2000)。结果(见表3)经bab-1液体制剂处理的病情指数为6.28，显著低于空白对照的病情指数76.25；bab-1液体制剂对黄瓜白粉病的防效达91.76％，优于化学药剂的防治效果89.04％。说明枯草芽孢杆菌菌株bab-1及其液体制剂对黄瓜白粉病具有突出的防治效果。表3bab-1液体制剂对黄瓜白粉病防效对比试验结果处理病情指数防效(％)bab-1液体制剂6.28bc91.76化学药剂8.36b89.04空白对照76.25a/实施例5bab-1微生物菌剂对甜瓜白粉病防效田间对比试验(一)试验材料：甜瓜品种：玉金香和红瑞红，购自河北农业大学科技市场种子销售处。(二)试验处理：(1)bab-1液体制剂：实施例1制备的bab-1液体制剂100倍水稀释液。(2)化学药剂：10％苯醚甲环唑水分散粒剂(来源同实施例4)。(3)空白对照：清水。(三)试验方法：本试验于2015年春季在河北省保定市清苑县张登店村刘铁军甜瓜大棚内开展。试验在两个甜瓜品种上同时开展。试验设置3个处理，处理1为微生物菌剂，喷施实施例1制备的bab-1液体制剂100倍水稀释液；处理2为化学药剂，喷施10％苯醚甲环唑水分散粒剂(瑞士先正达作物保护有限公司生产)800倍水稀释液；处理3为空白对照，喷施等量清水。每个处理重复4次，每个重复3行，每行20棵甜瓜苗。在甜瓜白粉病发病之前开始试验，间隔7-10天处理一次，直到空白对照充分发病，调查甜瓜白粉病病情并计算病情指数和防效(参照gb/t17980.30-2000)。结果(见表4)在甜瓜品种玉金香的田间小区试验中，经bab-1液体制剂处理和化学药剂处理的病情指数分别为11.1和13.0，显著低于空白对照的病情指数(100.0)，防治效果分别为88.9％和87.0％；在甜瓜品种红瑞红的田间小区试验中，经bab-1液体制剂处理和化学药剂处理的病情指数分别为11.7和12.2，显著低于空白对照的病情指数100.0，防治效果分别为88.3％和87.8％。说明bab-1及其bab-1液体制剂对甜瓜白粉病具有很好的防治效果。表4bab-1液体制剂对甜瓜白粉病防效对比试验结果当前第1页12