本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种民间药材小通草的快速繁殖方法。
背景技术：
小通草(stachyurushimalaicushook.f.etthoms.exbenth)又名通条树，即西域旌节花，为旌节花科旌节花属灌木或小乔木植物。旌节花科仅有旌节花属，约有10种，均为东亚特有，在我国的分布很广,从东部的台湾到西南部的云南、四川和西北部的陕西以及从两广到两湖。西域旌节花茎杆髓部可用作中药，即民间药材“小通草”，有利尿、催乳、清湿热功效，常用于水肿、淋病等疾病的治疗。
目前，西域旌节花基本上处于野生状态，但近年来被大量砍伐导致其野生资源锐减，因此规模化人工种植势在必行。西域旌节花主要采用种子繁殖，但由于西域旌节花的种子较小，收集困难，加之落果严重，难以从成熟的果实中获得足够用于繁殖的种子。因此有必要建立西域旌节花组织培养快繁体系，本发明选择西域旌节花种子为外植体，经无菌播种、茎段诱导、不定芽增殖、试管苗生根以及移栽等步骤，实现了西域旌节花的快速繁殖。本发明具成本低、工艺简便、繁殖系数高等特点，可直接用于西域旌节花的工厂化繁育，对于西域旌节花的遗传改良、种质资源保护、促进资源的可待续利用具有重要意义。
目前，国内外尚未有西域旌节花组织培养技术的报道，也未有西域旌节花组培快繁专利的申请。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种民间药材小通草的快速繁殖方法，本发明选择西域旌节花种子为外植体，经无菌播种、茎段诱导、不定芽增殖、试管苗生根以及移栽等步骤，达到了非常高的诱导效率，实现了西域旌节花的快速繁殖，从而实现了本发明的目的。
本发明提供的技术方案为：一种民间药材小通草的快速繁殖方法，包括依次进行的如下步骤：获取小通草植株的外植体、无菌播种、不定芽诱导、增殖培养、生根培养、移栽；
所述的不定芽诱导的不定芽诱导培养基包括ms、2.0～3.0mg/l6-ba、0.1～0.5mg/lnaa、0.01～0.05mg/lzt、25～30g/l蔗糖、3.5～4.0g/l琼脂、0.5～1.0g/l活性炭，不定芽诱导培养基ph为5.4～5.8。
在上述的民间药材小通草的快速繁殖方法中，所述的不定芽诱导的方法为：将经过无菌播种得到的种子苗生长至3～5个茎段时，将种子苗剪切成1.0～1.5cm带节茎段并接种到不定芽诱导培养基中在25～28℃进行全暗培养30～45天即可诱导形成不定芽。
在上述的民间药材小通草的快速繁殖方法中，所述的无菌播种操作所用到的种子萌发培养基包括：ms、0.5～1.0mg/lnaa、25～30g/l蔗糖、3.5～6.0g/l琼脂，种子萌发培养基ph为5.4～5.8。
在上述的民间药材小通草的快速繁殖方法中，所述的无菌播种操作为将作为外植体的果实消毒后取出种子置于种子萌发培养基中培养一段时间。
在上述的民间药材小通草的快速繁殖方法中，所述的增殖培养操作所用到的增殖培养基包括：ms培养基、1.0～1.5mg/l6-ba、0.5～1.0mg/lnaa、20～30g/l蔗糖、3.5～5.0g/l琼脂、0.3～0.5g/l活性炭，增殖培养基ph为5.4～5.8。
在上述的民间药材小通草的快速繁殖方法中，所述的增殖培养操作的方法为：将不定芽诱导操作得到的不定芽切成长1～2cm的茎段并接种到增殖培养基中培养25～30天即可实现不定芽的增殖。
在上述的民间药材小通草的快速繁殖方法中，所述的生根培养操作所用到的生根培养基包括：1/2ms、0.1～0.5mg/liba、1.0～2.0mg/lnaa、15～20g/l蔗糖、3.5～4.0g/l琼脂，生根培养基ph为5.4～5.8。
在上述的民间药材小通草的快速繁殖方法中，所述的生根培养操作具体为：切取增殖培养操作得到的长2.5～3.5cm的不定芽并接种到生根培养基中培养25～30天即能实现试管苗的生根。
在上述的民间药材小通草的快速繁殖方法中，所述的移栽操作的具体方法为：将生根培养操作得到的试管苗在温室的自然光下炼苗1～2天，洗净根部的培养基移栽于体积比为1:1的腐殖土、河沙混合基质中栽培成苗即得种苗。
在上述的民间药材小通草的快速繁殖方法中，无菌播种操作、增殖培养操作、生根培养操作中培养条件均为：培养温度为25～28℃，光照强度为2500～3000lx，光照时间为11～13小时/天。
有益效果：
本发明利用植物组织培养技术实现了民间药材小通草的快速繁殖，本发明具成本低、工艺简便、繁殖系数高等特点，可直接用于小通草的工厂化繁育。
具体实施方式
下面结合具体实施方式，对本发明的技术方案作进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制。
实施例一
(1)外植体采集：2012年秋季，当西域旌节花果实成熟时，选择成熟但尚未开裂的果实作为外植体并及时带回实验室。
(2)无菌播种：将带回实验室的果实先用洗洁精清洗3次后，置于超净工作台中于75％的乙醇溶液中消毒15分钟，无菌水冲洗2次后用无菌滤纸吸干水分后，再置于0.1％的升汞溶液中消毒20分钟，无菌水冲洗3次后用无菌滤纸吸干水分后用解剖刀纵向切开果实后，用无菌镊子将种子接种到种子萌发培养基中培养15天即可萌发，萌发率为87.6％，污染率低于15％，所述的种子萌发培养基为：ms+1.0mg/lnaa+25g/l蔗糖+3.5g/l琼脂，ph为5.4。
(3)不定芽诱导：当步骤(2)获得的种子苗生长至3个茎段时，将种子苗剪切成1.0～1.5cm左右的带节茎段并接种到不定芽诱导培养基中在25℃进行全暗培养30天即可诱导形成不定芽，诱导率为90.1％。所述的不定芽诱导培养基为：ms+3.0mg/l6-ba+0.5mg/lnaa+0.05mg/lzt(玉米素)+25g/l蔗糖+3.5g/l琼脂+0.5g/l活性炭，ph为5.4。
(4)增殖培养：将步骤(3)所得的不定芽切成长约1～2cm的茎段并接种到增殖培养基中培养25天即可实现不定芽的增殖，增殖系数达到5倍。所述的增殖培养基为：ms培养基+1.5mg/l6-ba+1.0mg/lnaa+20g/l蔗糖+3.5g/l琼脂+0.3g/l活性炭，ph为5.4。
(5)生根培养：切取步骤(4)增殖得到的长约2.5～3.5cm的不定芽并接种到生根培养基中培养25天即能实现试管苗的生根，生根率91.6％。所述的生根培养基为：1/2ms+0.5mg/liba+2.0mg/lnaa+15g/l蔗糖+3.5g/l琼脂，ph为5.4。
(6)移栽：将步骤(5)得到的健壮的试管苗在温室的自然光下炼苗1天，洗净根部的培养基移栽于体积比为1:1的腐殖土、河沙混合基质中栽培成苗即得种苗,移栽30天后成活率达到93.5％。
上述步骤(2)、(4)、(5)的培养条件为：培养温度为25℃，光照强度为2500lx，光照时间为11小时/天。
实施例二
(1)外植体采集：2013年秋季，当西域旌节花果实成熟时，选择成熟但尚未开裂的果实作为外植体并及时带回实验室。
(2)无菌播种：将带回实验室的果实先用洗洁精清洗4次后，置于超净工作台中于75％的乙醇溶液中消毒24分钟，无菌水冲洗3次后用无菌滤纸吸干水分后，再置于0.1％的升汞溶液中消毒25分钟，无菌水冲洗4次后用无菌滤纸吸干水分后用解剖刀纵向切开果实后，用无菌镊子将种子接种到种子萌发培养基中培养18天即可萌发，萌发率为85.3％，污染率为8.4％。所述的种子萌发培养基为：ms+0.8mg/lnaa+28g/l蔗糖+3.8g/l琼脂，ph为5.6。
(3)不定芽诱导：当步骤(2)获得的种子苗生长至4个茎段时，将种子苗剪切成1.0～1.5cm左右的带节茎段并接种到不定芽诱导培养基中在26℃进行全暗培养37天即可诱导形成不定芽，诱导率为89.2％。所述的不定芽诱导培养基为：ms+2.5mg/l6-ba+0.3mg/lnaa+0.03mg/lzt(玉米素)+28g/l蔗糖+3.7g/l琼脂+0.7g/l活性炭，ph为5.6。
(4)增殖培养：将步骤(3)所得的不定芽切成长约1～2cm的茎段并接种到增殖培养基中培养27天即可实现不定芽的增殖，增殖系数达到4倍。所述的增殖培养基为：ms培养基+1.3mg/l6-ba+0.7mg/lnaa+25g/l蔗糖+4.3g/l琼脂+0.4g/l活性炭，ph为5.6。
(5)生根培养：切取步骤(4)增殖得到的长约2.5～3.5cm的不定芽并接种到生根培养基中培养28天即能实现试管苗的生根，生根率为87.8％。所述的生根培养基为：1/2ms+0.3mg/liba+1.5mg/lnaa+17g/l蔗糖+3.7g/l琼脂，ph为5.6。
(6)移栽：将步骤(5)得到的健壮的试管苗在温室的自然光下炼苗1.5天，洗净根部的培养基移栽于体积比为1:1的腐殖土、河沙混合基质中栽培成苗即得种苗，移栽30天后成活率为92.6％。
上述步骤(2)、(4)、(5)的培养条件为：培养温度为26℃，光照强度为2700lx，光照时间为12小时/天。
实施例三
(1)外植体采集：2014年秋季，当西域旌节花果实成熟时，选择成熟但尚未开裂的果实作为外植体并及时带回实验室。
(2)无菌播种：将带回实验室的果实先用洗洁精清洗5次后，置于超净工作台中于75％的乙醇溶液中消毒30分钟，无菌水冲洗3次后用无菌滤纸吸干水分后，再置于0.1％的升汞溶液中消毒30分钟，无菌水冲洗5次后用无菌滤纸吸干水分后用解剖刀纵向切开果实后，用无菌镊子将种子接种到种子萌发培养基中培养20天即可萌发，萌发率为83.1％，污染率低于3％。所述的种子萌发培养基为：ms+0.5mg/lnaa+30g/l蔗糖+6.0g/l琼脂，ph为5.8。
(3)不定芽诱导：当步骤(2)获得的种子苗生长至5个茎段时，将种子苗剪切成1.0～1.5cm左右的带节茎段并接种到不定芽诱导培养基中在28℃进行全暗培养45天即可诱导形成不定芽，诱导率为84.9％。所述的不定芽诱导培养基为：ms+2.0mg/l6-ba+0.1mg/lnaa+0.01mg/lzt(玉米素)+30g/l蔗糖+4.0g/l琼脂+1.0g/l活性炭，ph为5.8。
(4)增殖培养：将步骤(3)所得的不定芽切成长约1～2cm的茎段并接种到增殖培养基中培养30天即可实现不定芽的增殖，增殖系数达到3倍。所述的增殖培养基为：ms培养基+1.0mg/l6-ba+0.5mg/lnaa+30g/l蔗糖+5.0g/l琼脂+0.5g/l活性炭，ph为5.8。
(5)生根培养：切取步骤(4)增殖得到的长约2.5～3.5cm的不定芽并接种到生根培养基中培养30天即能实现试管苗的生根，生根率为85.7％。所述的生根培养基为：1/2ms+0.1mg/liba+1.0mg/lnaa+20g/l蔗糖+4.0g/l琼脂，ph为5.8。
(6)移栽：将步骤(5)得到的健壮的试管苗在温室的自然光下炼苗2天，洗净根部的培养基移栽于体积比为1:1的腐殖土、河沙混合基质中栽培成苗即得种苗，移栽30天后成活率为95％。
上述步骤(2)、(4)、(5)的培养条件为：培养温度为28℃，光照强度为3000lx，光照时间为13小时/天。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其它的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。