本发明涉及种子生物学技术领域，具体涉及采用不同处理条件使来自于单芽滇重楼的种子变成多芽滇重楼种苗的方法。
背景技术：
滇重楼(parispolyphyllavar.yunnanensis)是百合科重楼属多年生草本植物，是药典收录的药用重楼原植物种。其根茎有清热解毒、镇惊止痛的功能，可用于咽喉肿痛、小儿惊风、毒蛇咬伤、疔疮肿毒，外治疖肿，腮腺炎，是云南白药、宫血宁、片仔黄等中成药的主要原料。长期以来，人们对重楼的利用一直依靠天然野生资源，由于长期过度的掠夺式的采挖，野生重楼遭到了毁灭性的破坏，现己濒临枯竭，人工种植成为解决重楼资源匮乏的必然选择。
滇重楼种子具有休眠特性，如让其自然萌发，则需15个月才能出苗，且出苗率低约50％。而采用低温层积，二次变温的方法，一年内可出苗，出苗率约为60％。其原因是滇重楼种胚分化不完全(形态后熟)和胚轴后熟(生理后熟)。形态后熟即指从种子成熟到胚成熟的阶段，胚胎在种子中缓慢生长及定型。滇重楼果实成熟后采收的种子，即为种子成熟。成熟种子的胚十分幼小，这时胚的形态建构尚不完善，不能发芽。在适当的温、湿度和空气条件下，胚开始分化和生长，分化出子叶、胚芽、胚轴及胚根，基本完成了胚体的建造，此期为形态后熟。种胚完成形态后熟之后，给予适合发芽的环境条件，种子仍不能马上出土萌发，需要一定时间的低温条件，胚轴通过其生理后熟，种子才能萌发。关于滇重楼的繁育国内学者已做了大量研究，近年来多项研究表明，低温层积能使滇重楼种胚较好发育，温度是影响滇重楼种子层积效果的重要因素。
另外，滇重楼从性状上看可分为单芽重楼和多芽重楼，单芽重楼的生长特征是每年出苗时只有一个芽，进而发育成单株，叶面积光合作用有限，生长较慢，生育期也较长，从播种到收获为8～10年；而多芽重楼与单芽重楼相比其根茎具有众多的丛生芽，光合作用的面积显著增加，地下根茎营养物质积累加快，每个植株根茎的体积、重量均比单芽者显著增加。采用重楼多芽种苗繁育技术，可以大大缩短重楼生长周期。与用种子繁殖需8～10年才能采挖相比，用多芽重楼繁殖一般只需5年时间，可以缩短种植周期3～5年。且幼苗健壮，地下块茎增大比单芽重楼明显。因此，可以快速繁殖和显著增产。但至今为止，关于如何利用单茎品系的重楼种子繁育出多芽的重楼种苗技术还未见报道。
尽管当前关于如何提高滇重楼种子萌发率的研究不少，但研究者多将目光集中在外界条件对重楼种子萌发率及出苗率的影响上，尚未涉及将来源于单芽性状的滇重楼种子通过处理使之变成多芽性状的重楼种苗的研究。
本发明通过综合分析滇重楼种子萌发特点，发明了一种既可以将单芽滇重楼种子通过处理使之变成多芽性状重楼种苗，又可以大大缩短滇重楼种子出苗时间(5-6个月)的方法。通过2014年到2016年两次查新检索，目前在国内外未发现有此种方法的相关报道。
技术实现要素：
为解决现有技术中单芽滇重楼种子不能繁育成多芽滇重楼种苗，以及单芽滇重楼种子的种苗繁育时间较长的技术问题，本发明提供不同其它方法的能将单芽滇重楼种子通过处理使之变成多芽性状滇重楼种苗的一种获得多芽滇重楼种苗的方法。
本发明所提供的一种获得多芽滇重楼种苗的方法，包括以下步骤：
(1)将成熟的单芽滇重楼果实放至外种皮腐烂，搓去所述单芽滇重楼果实的外种皮得到种子，然后将种子至于无阳光直射的室内阴干，后进行沙藏变温处理，所述沙藏变温处理是：将阴干的种子埋入湿沙中，保持湿沙的湿度为70％～75％，在黑暗条件下4℃处理30天，后20℃处理30天；
(2)将步骤(1)经沙藏变温处理的种子在无菌条件下用70％酒精消毒5分钟，无菌水冲洗2～3次，播种在1/2ms+赤霉素0.5mg/l的培养基表面，置于无菌条件下的恒温22℃培养室内：黑暗下培养1个月，后转至光强为500lx，12h光照/12h黑暗下培养1～2个月出芽后，播入苗床，盖土，覆松针，搭建遮阳网。
进一步，步骤(2)所述的遮阳网的遮光率为50～60％。
与现有技术相比，本发明方法的主要创新点及有益效果是：
本发明在深入研究滇重楼种子的生理特性和总结前人研究成果的基础上，将独特的他人未发现的有利于促进种子多芽萌发与出苗的方法与传统的促进滇重楼种子萌发的方法进行有机的整合，首次，使单芽滇重楼种子能够多芽出苗，且出苗时间缩短至4-5月，而对照单芽滇重楼种子在沙藏变温处理后直播入土，其滇重楼种子出苗都是单芽，出苗时间为7-8个月，本发明出苗时间缩短了3-4个月。
与现有的综合种子出苗方法相比，出苗性状由单芽变为多芽，且获得的多芽滇重楼种苗的比例为97％±2％，出苗时间大大缩短，产生了预料不到的技术效果。
本发明方法所用仪器简单，操作方便，因此，易于进行工厂化滇重楼多芽种苗生产。
附图说明
图1是采用本发明方法在组培瓶里的多芽滇重楼苗。
具体实施方式
以下实施例和对照无特殊说明的为常规方法。
术语：
1、单芽滇重楼果实是指该滇重楼品种的性状为单芽性状，每年只能长出单茎，结一个果实。
2、成熟的单芽滇重楼果实是指待单芽性状滇重楼品种果实完全开裂，其植株叶子出现枯萎时采摘的单芽滇重楼果实。
3、多芽滇重楼种苗是指滇重楼品种的性状为多芽性状，每年能发出多个茎。
实施例1本发明方法
本发明的主要仪器：人工气候箱(rgx-250)。
本发明所提供的一种获得多芽滇重楼种苗的方法，步骤以下：
(1)将成熟的单芽滇重楼果实放至外种皮腐烂，搓去所述单芽滇重楼果实的外种皮得到种子，然后将种子至于无阳光直射的室内阴干，所述阴干是将种子至于无阳光直射的室内至种子表面无水残留，后进行沙藏变温处理，所述沙藏变温处理是：将阴干的种子埋入湿沙中，保持湿沙的湿度为70％～75％，在黑暗条件下4℃处理30天，后20℃处理30天(仍黑暗条件下)；
(2)将步骤(1)经过沙藏变温处理的种子在无菌条件下用体积分数为70％酒精消毒5分钟，无菌水冲洗2～3次，播种在1/2ms+赤霉素0.5mg/l的培养基表面，置于无菌条件下的恒温22℃培养室内：黑暗下培养1个月，后转至光强为500lx，12h光照/12h黑暗下培养1～2个月出芽后，播入苗床，盖土、覆松针，搭建遮光率为50％的遮阳网。
对照：种子沙藏变温处理后直接播种入土培育滇重楼种苗与实施例1的比较
对照是通过改变直播入土与播种于在1/2ms+赤霉素0.5mg/l的培养基表面培养这一单一因子，比较其对滇重楼种子出苗性状的影响。
对照与实施例1不同的是：用实施例1步骤(1)经过沙藏变温处理的种子直播入苗床，盖土、覆松针，搭建遮光率为50％的遮阳网。
实验结果：采用实施例1经过沙藏变温处理的种子在无菌条件下用体积分数为70％酒精消毒5分钟，无菌水冲洗2～3次，播种在1/2ms+赤霉素0.5mg/l的培养基表面，置于无菌条件下的恒温22℃培养室内：先黑暗下培养1个月，后转至光强为500lx，12h光照/12h黑暗下培养1～2个月，其滇重楼种子出苗为多芽，其获得的多芽滇重楼种苗的比例为97％±2％；出苗时间缩短至4-5月。而对照直播入土，其滇重楼种子出苗都是单芽，出苗时间7-8个月。