以叶片为外植体的玉露离体快繁方法与流程

文档序号:11237805阅读:809来源:国知局

本发明属于花卉繁殖方法,具体涉及花卉的无性快速繁殖方法。



背景技术:

玉露,是百合科,十二卷属,多年生草本植物,叶片肉质,肥厚饱满。原产于南非,耐干旱,不耐寒,忌高温潮湿和烈日暴晒。玉露幼株多为单生,后逐渐呈群生状,肉质叶呈紧凑的莲座状排列。玉露外形玲珑小巧,种类丰富,叶色晶莹剔透,富于变化,深受国内外花卉爱好者的喜爱,具有十分高的市场需求和经济价值。玉露的传统繁殖方法,多采用播种繁殖,扦插繁殖和分株繁殖。其中,扦插繁殖和分株繁殖为无性繁殖,可以保持植株的性状稳定,但是繁殖周期长,产出效率较低,另外,播种繁殖为有性繁殖,容易使性状产生分离,丢失母本的优良性状,并且幼苗成活率低,以上因素都极大的影响了生产效率和产品质量。植物组织培养即植物离体培养技术,根据植物细胞的全能性,利用植物体离体的器官(如根、茎、叶、茎尖、花、果实等)、组织(如形成层、表皮、皮层、胚乳等)或细胞(如大孢子、小孢子、体细胞等)以及原生体,在无菌和适宜的人工培养基及光照、温度等人工条件下,能诱导出愈伤组织、不定芽、不定根,形成完整的植株或产生具有经济价值的其它产品的技术。由植物组织培养所产生的再生植株除了极低的变异外,基本都能保持亲本(外植体来源植株)的优良性状。植株组织培养技术发明以来已经取得了很大的进展。利用植物组织培养技术离体快速繁殖玉露可以大规模产生株型齐整的植株,进一步满足市场需求。前人所做的玉露组培实验虽然也有成功的先例,但是愈伤组织丛生芽诱导分化率低,导致产出效率低,极大阻碍了玉露的组织培养离体快繁在实际生产的大规模应用,并不具备市场化生产条件。本发明可使玉露在一年以内实现快速繁殖,而且繁殖效率高,非常适合工厂化生产。



技术实现要素:

本发明的目的是为克服传统玉露繁殖方法存在的繁殖速度慢,性状不稳定,成活率低等缺点;也为了克服前人玉露组织培养试验中丛生芽诱导分化率低,再生周期长,不适合工厂化生产等缺点。提供一种玉露的离体快速繁殖方法,使玉露在相对短的时间内产生大量遗传背景稳定,株型一致的再生植株。

本发明所采用的技术方案是:

1.外植体接种及愈伤组织诱导:取玉露植株的幼嫩叶片,放入无菌超净台中,用75%(体积/体积)酒精浸泡30~60s,用无菌水冲洗2~3次后,迅速倒入1.5~3%(质量/体积)次氯酸钠溶液中浸泡8~10min,倾去次氯酸钠溶液,再用无菌水冲洗4~5次,将处理好的玉露叶片,横切成1cm左右小段;接种在含6-ba0.5mg/l,naa0.1mg/l,kt1mg/l,蔗糖3.0%(质量/体积),琼脂6.0%(质量/体积),ph值为5.6~6.0的ms固体培养基上,光照强度为1500~2000lux,光照时间每天12~14小时,培养温度在24℃~28℃,40~50天继代一次,待长出黄绿色粒状愈伤时即可诱导分化。

2.丛生芽的诱导:将愈伤转接到诱导分化培养基:ms+kt0.5mg/l+6-ba(0.1~0.2mg/l)+naa(0~0.1mg/l)+iaa(0.1~0.5mg/l)+20.0%天然椰汁(体积/体积),琼脂6.0%(质量/体积),ph值为5.6~6.0的ms培养基上。光照强度为1500~2000lux,光照时间每天12~14小时,培养温度在24℃~28℃,40~50天继代一次,该愈伤分化能力可持续一年以上。从一块愈伤经过反复继代可分化出800株左右的再生苗。

3.壮苗培养:再生苗转到1/2ms+20%天然椰汁(体积/体积),ph值为5.6~6.0的壮苗培养基上,光照强度1500~2000lux,光照时间每天12~14小时,培养温度在24℃~28℃。

4.再生植株移栽:壮苗植株长到3~4厘米后,将壮苗植株的组培瓶拿到温室中打开,使壮苗植株适应温室环境5~7天后,将壮苗植株从组培瓶中取出,将培养基清洗干净,移栽至100%蛭石或是赤玉土栽培基质中,栽培基质需要经过121℃灭菌30~60分钟。7~15天左右浇一次透水便可成活。

本发明使玉露在相对较短的时间内大量产生基因背景相同、株型统一的再生植株。以玉露叶片切块为外植体,通过合理的培养基协同搭配以及外界的环境调控措施,脱分化率可达43%,丛生芽诱导率可达84.1%现对于现有技术培养提高15%以上,叶片外植体产生的愈伤组织,分化后产生丛生芽,丛生芽经继代后可分化出800株左右的再生苗,再生苗的壮苗存活率可达95%,在适宜环境下移栽成活率达100%,现对于现有技术提高20%以上。本发明可以在不影响母株正常发育及繁殖的情况下使玉露在相对短的时间内大规模繁殖,并且取材不受季节限制,再生周期短,愈伤组织诱导率高,丛生芽分化率高,植株移栽后生长状态良好。非常适用于玉露稀缺品种的快速繁殖,平均单株再生苗的成本极低,非常适合工厂化生产。

具体实施方式

下面将结合实例对本发明做进一步的说明,但本发明的内容不仅限于以下2个实施例:

实施例一:

选择n1玉露叶片为外植体进行离体快繁。

1.外植体接种及愈伤组织诱导:取n1玉露植株的幼嫩叶片,放入无菌超净台中,用75%(体积/体积)酒精浸泡60s,用无菌水冲洗2~3次后,迅速倒入3%(质量/体积)次氯酸钠溶液中浸泡8min,倾去次氯酸钠溶液,再用无菌水冲洗4~5次,将处理好的玉露叶片,横切成1cm左右小段;接种在含6-ba0.5mg/l,naa0.1mg/l,kt1mg/l,蔗糖3.0%(质量/体积),琼脂6.0%(质量/体积),ph值为5.8的ms固体培养基上,光照强度为2000lux,光照时间每天12小时,培养温度在25℃,50天继代一次,待长出黄绿色粒状愈伤时即可诱导分化。

2.丛生芽的诱导:将愈伤转接到诱导分化培养基:ms+kt0.5mg/l+6-ba0.1mg/l+iaa0.1mg/l+20.0%天然椰汁(体积/体积),琼脂6.0%(质量/体积),ph值为5.8的ms培养基上。光照强度为1800lux,光照时间每天12小时,培养温度在25℃,45天继代一次,该愈伤分化能力可持续一年以上。从一块愈伤经过反复继代可分化出820株的再生苗。

3.壮苗培养:再生苗转到1/2ms+20%天然椰汁(体积/体积),ph值为5.8的壮苗培养基上,光照强度2000lux,光照时间每天12小时,培养温度在25℃。

4.再生植株移栽:壮苗植株长到3~4厘米后,将壮苗植株的组培瓶拿到温室中打开,使壮苗植株适应温室环境5天后,将壮苗植株从组培瓶中取出,将培养基清洗干净,移栽至100%蛭石栽培基质中,蛭石需要经过121℃灭菌30~60分钟。15天左右浇一次透水便可成活。实施例二:

选择ob1玉露叶片为外植体进行离体快繁。

1.外植体接种及愈伤组织诱导:取ob1玉露植株的幼嫩叶片,放入无菌超净台中,用75%(体积/体积)酒精浸泡45s,用无菌水冲洗2~3次后,迅速倒入1.5%(质量/体积)次氯酸钠溶液中浸泡10min,倾去次氯酸钠溶液,再用无菌水冲洗4~5次,将处理好的玉露叶片,横切成1cm左右小段;接种在含6-ba0.5mg/l,naa0.1mg/l,kt1mg/l,蔗糖3.0%(质量/体积),琼脂6.0%(质量/体积),ph值为6.0的ms固体培养基上,光照强度为1500lux,光照时间每天14小时,培养温度在24℃,50天继代一次,待长出黄绿色粒状愈伤时即可诱导分化。

2.丛生芽的诱导:将愈伤转接到诱导分化培养基:ms+kt0.5mg/l+6-ba0.1mg/l+naa0.1mg/l+iaa0.1mg/l+20.0%天然椰汁(体积/体积),琼脂6.0%(质量/体积),ph值为6.0的ms培养基上。光照强度为1500lux,光照时间每天14小时,培养温度在24℃,45天继代一次,该愈伤分化能力可持续一年以上。从一块愈伤经过反复继代可分化出795株的再生苗。

3.壮苗培养:再生苗转到1/2ms+20%天然椰汁(体积/体积),ph值为6.0的壮苗培养基上,光照强度1500lux,光照时间每天14小时,培养温度在24℃。

4.再生植株移栽:壮苗植株长到3~4厘米后,将壮苗植株的组培瓶拿到温室中打开,使壮苗植株适应温室环境7天后,将壮苗植株从组培瓶中取出,将培养基清洗干净,移栽至100%赤玉土栽培基质中,赤玉土需要经过121℃灭菌30~60分钟。7天左右浇一次透水便可成活。

以玉露叶片切块为外植体,通过合理的培养基协同搭配以及外界的环境调控措施,脱分化率可达43%,丛生芽诱导率可达84.1%现对于现有技术培养提高15%以上,叶片外植体产生的愈伤组织,分化后产生丛生芽,丛生芽经继代后可分化出800株左右的再生苗,再生苗的壮苗存活率可达95%,在适宜环境下移栽成活率达100%,现对于现有技术提高20%以上。本发明可以在不影响母株正常发育及繁殖的情况下使玉露在相对短的时间内大规模繁殖,并且取材不受季节限制,再生周期短,愈伤组织诱导率高,丛生芽分化率高,植株移栽后生长状态良好。非常适用于玉露稀缺品种的快速繁殖,平均单株再生苗的成本极低,非常适合工厂化生产。

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