本发明涉及农业生产技术领域，尤其涉及一种合理控制外源型添加物提高胚挽救无核葡萄育种的方法。
背景技术：
近年来，世界鲜食葡萄育种目标趋于大粒、无核、优质、香气、抗病。无核葡萄以其食用方便，且在鲜食和制干方面有独特优势，一直以来备受消费者的喜爱。在我国利用植物生长调节剂进行调控是诱导形成无核果实最主要的途径，赤霉素是调节植物生长发育的五大激素之一，是最早用于诱导形成无核果的植物生长调节剂，但是经过无核化处理的果实因缺乏内源激素，果粒会小于正常栽培管理的果粒，所以通常在花后进行膨大处理，这样种植出来的葡萄就会出现化学残留较多的情况，不利用人体健康。为了得到安全美味的无核葡萄，需要解决的首要问题就是无核葡萄的育种问题，然而国内现有技术无核品种的主要育种方法为有性杂交育种，传统杂交育种只能以有核品种为母本无核品种为父本，后代无核率低且选育一个无核品种所需的时间较长（10～20年），且国内培育的无核葡萄品种存在果粒小、坐果率低等问题，限制了我国鲜食无核葡萄的发展。
上世纪90年代，胚挽救技术为无核葡萄育种带来了新的途径，使无核葡萄作为母本成为了可能，该技术扩大了亲本的选择范围，提高了后代无核率，简化了育种程序，大大缩短了育种周期，然而这种杂交技术得到的葡萄胚胎容易败育，这种现象严重制约着胚挽救技术的发展，就就需要针对通过调整胚胎发育培养基的养分以及合理控制母体的取样时间，以提高无核葡萄幼胚的萌发成苗率。
技术实现要素：
本发明目的就是为了弥补已有技术的缺陷，提供一种合理控制外源型添加物提高胚挽救无核葡萄育种的方法。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种合理控制外源型添加物提高胚挽救无核葡萄育种的方法，包括以下具体步骤：
（1）田间杂交：在始花期采下正常发育的父本花序用于花粉收集；在始花期前1-3天对母本进行去雄，去雄后立即套袋，去雄后第2天利用收集的父本花粉进行授粉，每天授粉2次，连续授粉3天，授粉结束后即刻套袋；
（2）幼果采集以及处理：在授粉后杂交种子最佳摘果期进行摘果，剪去果柄，自来水冲洗15-20分钟，然后在超净工作台上将冲洗过的幼果先利用乙醇溶液冲洗1次，用无菌水冲洗干净后再次放入次氯酸钠溶液中浸泡2-3分钟，取出后再用无菌水冲洗干净；
（3）用消毒锅的解剖刀切开处理后的幼果，取出胚珠，科学合理的选择适合胚珠发育的外源物质进行培养基的配制，然后将胚珠接种到胚珠发育培养基中进行胚珠发育培养；
（4）将胚珠培养60天后，在超净工作台上对胚珠进行剥胚处理，科学合理的选择适合萌发阶段胚的外源物质进行培养基的配制，然后将剥离出的胚接种到胚萌发培养基中，在光照条件下进行培养30-40天，即得试管苗，最后将试管苗放入自然光下进行炼苗即可。
所述的一种合理控制外源型添加物提高胚挽救无核葡萄育种的方法，步骤（1）中所述的父本、母本，最佳选择为红宝石无核作母本，玫瑰香优系作为父本。
所述的一种合理控制外源型添加物提高胚挽救无核葡萄育种的方法，步骤（2）中所述的最佳摘果期是指红宝石无核与玫瑰香优系杂交授粉后的60天。
所述的一种合理控制外源型添加物提高胚挽救无核葡萄育种的方法，步骤（2）中所述的乙醇溶液为体积分数为75%的乙醇溶液；所述的次氯酸钠溶液是指质量分数为4%的次氯酸钠溶液。
所述的一种合理控制外源型添加物提高胚挽救无核葡萄育种的方法，步骤（3）中所述的科学合理的选择适合胚珠发育的外源物质进行培养基的配制，培养基的营养成分具体包括：0.5mol/l细胞分裂素、1.0mmol/l甘氨酸、1.5mol/l吲哚乙酸、0.5mol/l赤霉素、60g/l蔗糖、5g/l琼脂、1g/l活性炭。
所述的一种合理控制外源型添加物提高胚挽救无核葡萄育种的方法，步骤（4）中所述的科学合理的选择适合萌发阶段胚的外源物质进行培养基的配制，培养基的营养成分具体包括：0.2mol/l细胞分裂素、0.1mol/l吲哚丁酸、30g/l蔗糖、5g/l琼脂、1.5g/l活性炭。
本发明的优点是：本发明首先确定最佳的无核葡萄杂交品种，通过选择最佳的摘果期进行胚珠发育，提高了胚珠发育率，减少胚珠发生败育的比例；然后根据胚珠离体培养过程中胚发育和胚萌发营养需求不同，分别配制适宜的培养基，在胚发育时期的培养基中添加了细胞分裂素、吲哚乙酸、甘氨酸，通过科学合理的浓度复配有助于促进胚发育、萌发和成苗，活性炭可吸附有害物质，防止胚珠褐化；本发明采用的方法能有效促进无核葡萄杂交胚在离体条件下继续发育，提高胚珠与胚发育率，促进胚萌发，成苗率高，且胚挽救苗健壮整齐，移栽成活率高，且提高了无核葡萄育种的效率，可操作性强，适合推广。
具体实施方式
一种合理控制外源型添加物提高胚挽救无核葡萄育种的方法，包括以下具体步骤：
（1）田间杂交：红宝石无核作母本，玫瑰香优系作为父本，在始花期采下正常发育的父本花序用于花粉收集；在始花期前1天对母本进行去雄，去雄后立即套袋，去雄后第2天利用收集的父本花粉进行授粉，每天授粉2次，连续授粉3天，授粉结束后即刻套袋；
（2）幼果采集以及处理：在红宝石无核与玫瑰香优系杂交授粉后的60天进行摘果，剪去果柄，自来水冲洗15分钟，然后在超净工作台上将冲洗过的幼果先利用体积分数为75%的乙醇溶液冲洗1次，用无菌水冲洗干净后再次放入质量分数为4%的次氯酸钠溶液中浸泡2分钟，取出后再用无菌水冲洗干净；
（3）用消毒锅的解剖刀切开处理后的幼果，取出胚珠，科学合理的选择适合胚珠发育的外源物质进行培养基的配制，然后将胚珠接种到胚珠发育培养基中进行胚珠发育培养；
（4）将胚珠培养60天后，在超净工作台上对胚珠进行剥胚处理，科学合理的选择适合萌发阶段胚的外源物质进行培养基的配制，然后将剥离出的胚接种到胚萌发培养基中，在光照条件下进行培养30天，即得试管苗，最后将试管苗放入自然光下进行炼苗即可。
根据权利要求书1所述的一种合理控制外源型添加物提高胚挽救无核葡萄育种的方法，步骤（3）中所述的科学合理的选择适合胚珠发育的外源物质进行培养基的配制，培养基的营养成分具体包括：0.5mol/l细胞分裂素、1.0mmol/l甘氨酸、1.5mol/l吲哚乙酸、0.5mol/l赤霉素、60g/l蔗糖、5g/l琼脂、1g/l活性炭。
根据权利要求书1所述的一种合理控制外源型添加物提高胚挽救无核葡萄育种的方法，步骤（4）中所述的科学合理的选择适合萌发阶段胚的外源物质进行培养基的配制，培养基的营养成分具体包括：0.2mol/l细胞分裂素、0.1mol/l吲哚丁酸、30g/l蔗糖、5g/l琼脂、1.5g/l活性炭。