控制嘧霉胺耐性真菌的方法与流程

文档序号:15879022发布日期:2018-11-09 17:32阅读:547来源:国知局
微生物在例如像酒精发酵,干酪成熟,面包烘烤,青霉素生产,废水净化,沼气生产等过程中是非常有用的,并且甚至是不可或缺的。然而,微生物也可能是有害的或高度危险的;通过引起传染性疾病,通过形成有毒的或致癌的代谢物以及通过攻击有价值的材料,干扰生产过程,或损害产品的品质。组分(i)的嘧霉胺是一种抑制蛋氨酸生物合成的接触杀真菌剂,并且具有保护和治疗特性。它可以作为种子处理或叶面喷雾被应用到许多作物中。嘧霉胺预防由多种真菌引起的疾病,包括链格孢属物种、葡萄孢菌、尾孢属物种、枝孢属物种、刺盘孢属物种、念珠菌属物种、球腔菌属物种、青霉菌属以及黑星菌属物种。嘧霉胺(i)是4,6-二甲基-n-苯基-2-嘧啶胺的总称,其可由下式表示不幸的是,真菌可以产生对嘧霉胺的抗性,导致需要增加所用嘧霉胺的量或甚至需要使用不同的杀真菌剂。因此存在控制此类嘧霉胺抗性真菌或嘧霉胺耐性真菌或恢复嘧霉胺抗性真菌或嘧霉胺耐性真菌对嘧霉胺的敏感性的需要。现在已经发现通过将式ch3-(ch2)n-cooh(其中n式4至7)的链烷羧酸添加到包含嘧霉胺的组合物中,嘧霉胺抗性真菌或嘧霉胺耐性真菌可以被控制,或它们对嘧霉胺的敏感性可以被恢复。这个发现非常出人意料,因为这些式ch3-(ch2)n-cooh(其中n是4至7)的链烷羧酸几乎没有杀真菌活性。这些式ch3-(ch2)n-cooh的链烷羧酸(以下称为组分ii)具有以下结构,其中n是4至7:n结构名称组分(ii)4ch3-(ch2)4-cooh己酸(ii-a)5ch3-(ch2)5-cooh庚酸(ii-b)6ch3-(ch2)6-cooh辛酸(ii-c)7ch3-(ch2)7-cooh壬酸(ii-d)嘧霉胺(i)可以以游离碱的形式或以酸加成盐的形式存在,后者通过碱形式与适当的酸反应获得。适当的酸包括,例如,无机酸例如氢卤酸,即氢氟酸、氢氯酸、氢溴酸和氢碘酸,硫酸,硝酸,磷酸,次膦酸等;或有机酸,例如像,乙酸、丙酸、羟基乙酸、2-羟基丙酸、2-氧丙酸、乙二酸、丙二酸、丁二酸、(z)-2-丁烯二酸、(e)-2-丁烯二酸、2-羟基丁二酸、2,3-二羟基丁二酸,2-羟基-1,2,3-丙烷-三甲酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、4-甲基苯磺酸,环已烷氨基横酸、2-羟基苯甲酸、4-氨基-2-羟基苯甲酸等酸。组分(ii)-即式ch3-(ch2)n-cooh(其中n是4至7)的链烷羧酸与组分(i)-即嘧霉胺-恢复嘧霉胺抗性真菌或嘧霉胺耐性真菌对嘧霉胺的敏感性或控制嘧霉胺抗性真菌或嘧霉胺耐性真菌所需的相对重量比例是从100/1至10/1。本发明的一个实施例提供了用于控制嘧霉胺抗性真菌或嘧霉胺耐性真菌的方法,所述方法是通过将所述真菌与包含嘧霉胺与式ch3-(ch2)n-cooh的链烷羧酸(其中n是4至7,由此嘧霉胺与式ch3-(ch2)n-cooh的链烷羧酸的重量比是从1/10至1/100)的组合的组合物接触。嘧霉胺与式ch3-(ch2)n-cooh(其中n是4至7)的链烷羧酸的其他重量比是从1/25至1/75或从1/25至1/50。本发明还提供了用于保护有嘧霉胺抗性真菌或嘧霉胺耐性真菌侵染风险的材料、植物、种子、作物或果实的方法,所述方法是通过将所述材料、植物、种子、作物或果实和包含嘧霉胺与式ch3-(ch2)n-cooh的链烷羧酸(其中n是4至7,由此嘧霉胺与式ch3-(ch2)n-cooh的链烷羧酸的重量比是从1/10至1/100)的组合物接触。嘧霉胺与式ch3-(ch2)n-cooh(其中n是4至7)的链烷羧酸的其他重量比是从1/25至1/75或从1/25至1/50。本发明还提供了用于克服嘧霉胺抗性真菌或嘧霉胺耐性真菌对嘧霉胺抗性的方法,该方法包括将嘧霉胺抗性真菌或嘧霉胺耐性真菌与包含嘧霉胺与式ch3-(ch2)n-cooh的链烷羧酸(其中n是4至7,由此嘧霉胺与式ch3-(ch2)n-cooh的链烷羧酸的重量比是从1/10至1/100)的组合的组合物接触。嘧霉胺与式ch3-(ch2)n-cooh(其中n是4至7)的链烷羧酸的其他重量比是从1/25至1/75或从1/25至1/50。本发明的另一个实施例涉及:-嘧霉胺与式ch3-(ch2)n-cooh的链烷羧酸(其中n是4至7,由此嘧霉胺与式ch3-(ch2)n-cooh的链烷羧酸的重量比是从1/10至1/100)的组合在嘧霉胺抗性真菌的处理中降低对嘧霉胺抗性的用途;-嘧霉胺与式ch3-(ch2)n-cooh的链烷羧酸(其中n是4至7,由此嘧霉胺与式ch3-(ch2)n-cooh的链烷羧酸的重量比是从1/10至1/100)的组合在嘧霉胺抗性真菌或嘧霉胺耐性真菌的处理中恢复对嘧霉胺的敏感性的用途;-嘧霉胺与式ch3-(ch2)n-cooh的链烷羧酸(其中n是4至7,由此嘧霉胺与式ch3-(ch2)n-cooh的链烷羧酸的重量比是从1/10至1/100)的组合在降低嘧霉胺抗性真菌或嘧霉胺耐性真菌对嘧霉胺的抗性水平中的用途;以及-嘧霉胺与式ch3-(ch2)n-cooh的链烷羧酸(其中n是4至7,由此嘧霉胺与式ch3-(ch2)n-cooh的链烷羧酸的重量比是从1/10至1/100)的组合在管理对嘧霉胺抗性真菌或嘧霉胺耐性真菌的控制中的用途。本发明的进一步的实施例涉及用于处理嘧霉胺抗性真菌的组合物,该嘧霉胺抗性真菌包含嘧霉胺与式ch3-(ch2)n-cooh的链烷羧酸(其中n是4至7,由此嘧霉胺与式ch3-(ch2)n-cooh的链烷羧酸的重量比是从1/10至1/100),以及一种或多种载体。嘧霉胺与式ch3-(ch2)n-cooh(其中n是4至7)的链烷羧酸的其他重量比是从1/25至1/75或从1/25至1/50。本发明的组合物可用于保护培养植物或植物的部分,例如果实、开花、花朵、叶子、茎、根、插条、植物的块茎和种子对抗真菌攻击。针对致植物病的真菌的收获的作物的收获后处理可以防止或减少某些收获后储存病症,例如像晒焦,枯萎,软化,衰败病,皮孔斑,苦陷病,褐变,水心病,维管破裂等。作为可以使用根据本发明的组分(i)和(ii)的组合的多种培养植物的实例,可以列举例如谷类,例如小麦、大麦、黑麦、燕麦、稻、高粱等;甜菜,例如糖甜菜和饲料甜菜;梨果和核果以及浆果类,例如苹果、梨、李子、桃子、杏仁、樱桃、草莓、覆盆子和黑莓;豆科植物,例如豆类、扁豆、豌豆、大豆;含油植物,例如油菜、芥末、罂粟、橄榄、向日葵、椰子、蓖麻油植物、可可、花生;葫芦科,例如西葫芦,小黄瓜,甜瓜,黄瓜,南瓜;纤维植物,例如棉、亚麻、大麻、黄麻;柑橘类水果,例如橙子、柠檬、葡萄柚、柑橘;蔬菜,例如菠菜、生菜、芦笋,十字花科,例如卷心菜和萝卜、胡萝卜、洋葱、西红柿、土豆、辣椒和甜椒;月桂类植物,例如鳄梨、肉桂、樟树;或植物,例如玉米、烟草、坚果、咖啡、甘蔗、茶、藤本织物、啤酒花、香蕉、橡胶植物,以及观赏植物,例如花、灌木、落叶乔木和针叶树等常绿树木。给出培养植物的列举是为了说明本发明而不是将其限定于此。本发明的组合物还在保存木材、木制品、皮革、天然或合成纺织品、纤维、非纺织物、工业纺织品、增塑材料和非增塑热塑性塑料如聚丙烯、聚氯乙烯等,纸张、墙纸、绝缘材料、层压制品、氨基模塑化合物、油漆和涂料、织物、地面覆盖物、合成纤维如增塑聚合物、粗麻布、绳和纤维绳以及可生物降解材料中是有用的,并且保护所述材料抵抗细菌或真菌的攻击和破坏。作为可以用根据本发明的组合物保存的木材或木制品,例如木制品如原木、木料、铁路枕木、电线杆,栅栏,木材覆盖物,柳条制品,窗和门,胶合板,刨花板,华夫板,木屑压合板,细木工制品,在暴露的环境的地面以上所使用的原木(如在接触地面或淡水或盐水环境中所使用的盖板和原木),桥梁或通常在房屋建筑、建筑和木器中使用的木制品是被考虑的。除了可从用本发明的组合物处理中受益的木材以外的作为可生物降解材料包括纤维素材料如棉花。本发明的组合物在若干工业生产(像与流体接触或涉及流体运输的垫片、管道和管材,在食品运输、加工或生产中使用的输送带、表面和塑料部件)以及医疗活动(像医疗设备和装置(像医用导管、起搏器、植入物、外科手术设备和无菌纺织品))中预防微生物污染或生物膜形成也是有用的。本发明的组合物对保护工程材料抵抗微生物也是有用的。旨在被保护的工程材料可以是可以被微生物侵染或分解的胶类、胶料、油漆和塑料物品、冷却润滑剂、含水液压流体和其他非生命材料。根据本发明的组合物包含组分(i)嘧霉胺和组分(ii)式ch3-(ch2)n-cooh的链烷羧酸(其中n是4至7,由此嘧霉胺与式ch3-(ch2)n-cooh的链烷羧酸的重量比是从1/10至1/100)的组合,进一步包含一种或多种可接受的载体。这些载体是与组分(i)和(ii)的组合物配制在一起的以便促进其应用/散播到待处理的场所,例如通过溶解、分散、或扩散所述组合物,和/或便于其储存、运输或处理而不损害其抗真菌效力的任何材料或物质。所述可接受的载体可以是固体或液体或已经被压缩以形成包括被描述为超临界流体的物理条件的液体的气体,即,本发明的组合物可适合地用作浓缩物,乳液,乳油,油混溶悬浮液浓缩物,油混溶性液体,可溶性浓缩物,溶液,颗粒剂,粉剂,喷雾剂,气雾剂,丸剂或散剂。用于在本发明的组合物中使用的适当的载体和佐剂可以是固体或液体,并且对应于配制品领域中已知的合适的物质,例如像天然的或再生的矿物质,溶剂,分散剂,表面活性剂,润湿剂,粘合剂,增稠剂,粘结剂,肥料或防冻剂。在许多实例中待直接使用的组合物可由浓缩物,例如可乳化浓缩物、悬浮液浓缩物、或可溶性浓缩物在以水性或有机介质稀释后而获得,这种浓缩物意图被本发明定义中所用的术语组合物涵盖。这些浓缩物在使用前不久可以在喷雾罐中稀释成即用混合物。优选地,本发明的组合物包含按重量计从约0.01至95%的组分(i)和(ii)的组合。更优选地这个范围是按重量计从0.1至90%。最优选地这个范围是按重量计从1至80%,这取决于为特定应用目的所选择的制剂类型,如下文进一步详细解释的。可乳化浓缩物是作为在水中稀释后以乳液形式应用的组分(i)和(ii)的液体均匀制剂。悬浮液浓缩物是旨在于使用前用水稀释的在流体中的活性成分的稳定的悬浮液。可溶性浓缩物是在水中稀释后作为活性成分的真溶液应用的均匀液体制剂。根据本发明的组合物可以在作物,特别是水果的收获后处理中使用。在后者情况下,将水果喷洒或浸入或浸泡到液体配制品中,或者水果可用蜡状组合物包衣。后者的蜡状组合物便利地通过将悬浮液浓缩物与合适的蜡充分混合来制备。用于喷雾,浸渍或浸泡应用的配制品可以通过用水性介质稀释浓缩物例如像可乳化的浓缩物,悬浮液浓缩物或可溶性液体来制备。这种浓缩物在大多数情况下由活性成分,分散剂或悬浮剂(表面活性剂),增稠剂,少量有机溶剂,润湿剂,任选的一些防冻剂和水组成。本发明的杀生物组合物也可以用于保护种子抵抗真菌。为了那种效果,可以将本发明的杀真菌组合物涂布在种子上,在这种情况下,谷物种子用活性成分的液体组合物连续地浸泡,或者将它们用先前组合的组合物包衣。也可以使用例如旋转盘式雾化器将组合物喷雾或雾化到种子上。实验部分实验1毒性平盘检验组分(i)的名称:嘧霉胺组分(ii)的名称:己酸(=ch3-(ch2)n-cooh,其中n是4)测试设置向24孔微量滴定板的每个孔中加入2m1葡萄糖琼脂(ga:10g葡萄糖、1.5gk2hpo4、2gkh2po4、1g(nh4)2so4、0.5gmgso4和12.5g琼脂,在1升去离子水中)。将测试化合物嘧霉胺以及链烷羧酸(ii)以适当的浓度溶解在dmso中,并分别以5μl每滴加入液体琼脂中。通过添加2.5μl孢子/菌丝体悬浮液,用测试真菌接种营养培养基。然后将微孔板在20℃和60%的相对湿度的黑暗中孵育。两周后当未处理的对照物的生长直径已经达到15mm时评估真菌的生长。用作嘧霉胺抗性真菌或嘧霉胺耐性真菌的代表性模型生物的病原体(真菌):-青霉菌菌株pe110014,嘧霉胺抗性(ec50=15.40ppm,ec95>100ppm)-青霉菌菌株pe110030,嘧霉胺抗性(ec50=16.38ppm,ec95>100ppm)-青霉菌菌株pe110048,嘧霉胺抗性(ec50=22.39ppm,ec95>100ppm)(为了比较,嘧霉胺敏感的菌株像青霉菌菌株pe110101具有ec50=0.29ppm并且ec95=0.88ppm而嘧霉胺耐性菌像青霉菌菌株pe110091具有ec50=5.01ppm并且ec95=74.99ppm)。评估:在合适的孵育期后,测量琼脂上的菌落直径。然后通过比较菌落直径与未处理对照物(15mm)的直径来计算每次处理的百分比生长(不是%效应,见下文)。计算:使用科尔比协同公式(colbys.r.,weeds[除草剂](1967),15(1),20-22)计算添加式ch3-(ch2)n-cooh(其中n是4至7)的链烷羧酸恢复嘧霉胺抗性真菌或嘧霉胺耐性真菌对嘧霉胺的敏感性的效果。当a是在给定浓度下单独使用化合物a处理时仍然观察到的生长%(不是活性%),并且b是在给定浓度下仅用化合物b处理时仍观察到的生长%,用相同浓度下的两种化合物的组合处理的预期生长exp是:exp=(axb)/100。当在组合下观察到的测试病原体的生长低于预期生长时,存在协同作用。缩写exp:使用科尔比公式计算的测试病原体的预期生长:obs:观察到的测试病原体的生长。表1:嘧霉胺抗性真菌pe110014、pe110030和pe110048在葡萄糖琼脂培养基上的生长%,用嘧霉胺(0ppm和10ppm)和己酸(0ppm、250ppm、500ppm和750ppm)激发在表1中可以看出,当单独在250,500和750ppm测试时,己酸对三种嘧霉胺抗性真菌(具有0ppm嘧霉胺的柱)没有杀真菌作用。当向嘧霉胺中加入己酸时,观察到的嘧霉胺抗性真菌的生长低于预期生长,从而证明己酸恢复对嘧霉胺的敏感性的能力。实验2果实处理测试对象:通过用污染的针在两个点上刺伤果实,将未经处理的苹果或梨(详情见下文)接种真菌病原体,并在20℃和96%相对湿度下孵育。用作嘧霉胺抗性真菌或嘧霉胺耐性真菌的代表性模型生物的病原体(真菌):-青霉菌菌株pe110091,嘧霉胺抗性(ec50=5.01ppm,ec95>74.99ppm)处理:预防性:将果实在含有适当浓度的测试化合物的自来水中浸泡30秒。一小时后,用浸在测试真菌的孢子悬浮液中的刺针感染处理过的果实。治疗性:水果首先用刺针感染,然后在四小时后浸渍处理。评估:在合适的孵育期后,用卡尺测量感染斑点的直径。计算同一处理中所有斑点的平均直径(每次处理14至40个斑点,见下文)。然后通过比较平均斑点直径与未处理对照的平均值来计算处理的效果百分比。较高的效果百分比表明对减少真菌生长具有更好的效果。计算:使用利普尔协同公式(limpel,l.e.etal.(1962)“weedcontrolbydimethyltetrachloroterephthalatealoneandincertaincombinations”,proceedingsofthen.e.weedcontrolconference16:48-53[limpel,l.e等人,(1962)“单独使用四氯对苯二甲酸二甲酯和某些组合控制杂草”,杂草控制会议论文集16:48-53]),计算添加式ch3-(ch2)n-cooh(其中n是4至7)的链烷羧酸恢复嘧霉胺抗性真菌或嘧霉胺耐性真菌对嘧霉胺的敏感性的效果。当a是单独的化合物a在给定浓度下获得的效果%,b是单独的化合物b在给定浓度下获得的效果%,在相同浓度下两种化合物的组合的预期效果e为:e=a+b-(axb)/100.当观察到的组合效果高于预期效果时,存在协同作用,从而表明对嘧霉胺的敏感性已经恢复。配制品:将嘧霉胺作为40%市售penbotec400sc配制品加入自来水中,得到浓度为100ppm的嘧霉胺。将链烷羧酸加入自来水中以获得2000ppm溶液,或将链烷酸加入到浓度为2000ppm的嘧霉胺组合物中。果实:生物苹果“elstar”(bio-apple“elstar”)病原体:青霉菌菌株pe110091(嘧霉胺耐性)处理:治疗性重复:每个果实两个伤口,每次处理15个果实起始:2014年3月11日评估:3月17日(6天),3月20日(9天)未经处理的平均腐烂直径:6天21.3mm9天36.0mm表2:用嘧霉胺(0和100ppm)和己酸(0和2000ppm)激发对嘧霉胺耐性真菌pe110091的效果%在表2中可以看出,当在2000ppm单独测试时,己酸对嘧霉胺耐性性真菌pe110091(具有0ppm嘧霉胺的柱)几乎没有杀真菌作用。当向嘧霉胺中加入己酸时,观察到的效果%高于预期的效果%,从而证明己酸恢复对嘧霉胺的敏感性的能力。当前第1页12
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