本发明涉及白芨培养领域，具体而言，涉及一种白芨的快速繁殖方法。
背景技术：
白芨，是多年生草本球根植物(块根)，植株高18-60厘米。主要分布在中国、日本以及缅甸北部。白芨有广泛的药用价值及园林价值。主要用于收敛止血，消肿生肌。花有紫红、白、蓝、黄和粉等色，可盆栽室内观赏，亦可点缀于较为荫蔽的花台、花境或庭院一角。
目前，白芨的繁殖方法主要有分株繁殖和播种繁殖。分株繁殖，是指春季新叶萌发前或秋冬地上部枯萎后，掘起老株，分割假鳞茎进行分植，每株可分3～5株，须带顶芽。传统栽培主要依靠分株繁殖，但分株繁殖周期长，繁殖效率低，而且耗种量大，很难满足大量栽培的需要。而播种繁殖，由于白芨的种子非常细小且无胚乳，因此其在自然状况下很难萌发和生长，实生苗的栽培较为困难。
随着现代组织培养技术的应用和发展，也发展了一些白芨的快速繁殖技术，但此类技术的成苗率较低，且获得的白芨驯化苗性状不稳定，难以进一步推广使用。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种白芨的快速繁殖方法，该方法所得到的白芨驯化苗，性状稳定、发芽率高、生长速度快、长势一致、且大小均匀。
为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
一种白芨的快速繁殖方法，其包括：
将无菌处理后的白芨蒴果中的种子播种到种子萌发培养基上，进行萌发培养，得到白芨苗；
将白芨苗转接至假鳞茎诱导培养基中进行诱导培养，得到无根白芨苗，其中，假鳞茎诱导培养基是以MS培养基为基础并添加包括下列按质量体积浓度计的组分：0.5～1.5mg/L 6-苄氨基腺嘌呤、0.5～1.5mg/L萘乙酸、25～35g/L蔗糖、6～8g/L琼脂粉，假鳞茎诱导培养基的pH为5.8～6.0；
再将无根白芨苗转移至生根壮苗培养基中进行生根培养，得到白芨组培苗，其中，生根壮苗培养基是以MS培养基为基础并添加包括下列按质量体积浓度计的组分：1.5～5mg/L 6-苄氨基腺嘌呤、0.1-0.5mg/L萘乙酸、0.1～0.5mg/L吲哚丁酸吲哚丁酸，25～35g/L蔗糖、6～8g/L琼脂粉，生根壮苗培养基的pH为5.8～6.0；
再将白芨组培苗移植到大棚中进行驯化培养，得到白芨驯化苗。
与现有技术相比，本发明的有益效果例如包括：
本发明提供的这种白芨的快速繁殖方法，对最普通的MS培养基进行改良，得到适合白芨生长的假鳞茎诱导培养基和生根壮苗培养基，其通过研究发现，6-苄氨基腺嘌呤、萘乙酸以及吲哚丁酸这三种激素对白芨的生长促进作用较好，并同时优化了这三种激素在各培养基中的浓度，使其能够有效促进白芨正常萌发、生长。
这种白芨的快速繁殖方法的繁殖周期短，利用组织培养的方式繁育的白芨驯化苗，性状稳定，成苗率高(大于95％)，生长速度快，长势一致，大小均匀，可大幅降低白芨的培养成本。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
本实施方式提供的白芨的快速繁殖方法，其包括：
步骤S1，萌发培养：将无菌处理后的白芨蒴果中的种子播种到种子萌发培养基上，进行萌发培养，得到白芨苗。
进一步的，白芨蒴果的无菌处理过程包括：将白芨蒴果依次用70～80％的乙醇、0.05～0.15％的氯化汞溶液、以及4～6％的次氯酸钠溶液浸泡。较为具体的，该无菌处理的步骤包括：使用70～80％的酒精浸泡蒴果20～40秒后使用无菌水冲洗2～4次，然后换用浓度0.05～0.15％的氯化汞溶液浸泡110～130秒，再用无菌水冲洗3-4次，最后用4～6％的次氯酸钠溶液浸泡8～12分钟，再用无菌水冲洗3-4次，期间不断搅拌。
进一步的，上述白芨蒴果为白芨成熟且没有裂开的蒴果。采用没有裂开的蒴果进行无菌处理，能够有效避免消毒液浸入果壳内对种子造成污染，进而有效提高种子的萌发率。
进一步的，种子萌发培养基是以MS培养基为基础并添加包括下列按质量体积浓度计的组分：30-50g/L蔗糖、6-8g/L琼脂粉，种子萌发培养基的pH为5.8-6。优选的，蔗糖为35～45g/L、琼脂粉为7～8g/L。这种培养基以最简单的MS培养基为基础，并额外添加了蔗糖和琼脂粉，有利于提高白芨种子的萌发率。
进一步的，萌发培养的培养条件为：光照时间10～20h/d，光照强度2000～2500lx，培养室温度22～26℃，培养时间30～40d；或者，萌发培养的培养条件为：光照时间13～18h/d，光照强度2100～2400lx，培养室温度23～25℃，培养时间33～37d。
步骤S2，诱导培养：将白芨苗转接至假鳞茎诱导培养基中进行诱导培养，得到无根白芨苗，其中，假鳞茎诱导培养基是以MS培养基为基础并添加包括下列按质量体积浓度计的组分：0.5～1.5mg/L 6-苄氨基腺嘌呤、0.5～1.5mg/L萘乙酸、25～35g/L蔗糖、6～8g/L琼脂粉，pH为5.8～6.0；
上述假鳞茎诱导培养基中，在MS培养基的基础上，额外添加了6-苄氨基腺嘌呤和萘乙酸这两种生长激素，以及蔗糖和琼脂粉。其中，6-苄氨基腺嘌呤是为人工合成细胞分裂素，萘乙酸是一种植物生长调节剂，这两种激素共同使用，促进白芨的细胞分裂与扩大，诱导生根，从而提高白芨苗的生长速率。
进一步的，上述假鳞茎诱导培养基中，6-苄氨基腺嘌呤为0.7～1.3mg/L、萘乙酸为0.8～1.2mg/L、蔗糖为28～32g/L、琼脂粉为7～8g/L，假鳞茎诱导培养基的pH为5.8～6.0。
进一步的，诱导培养的培养条件为：光照时间10～20h/d，光照强度1500-2000lx，培养室温度22～26℃，培养时间30～45d。或者，诱导培养的培养条件为：光照时间12～16h/d，光照强度1800-2000lx，培养室温度24～25℃，培养时间35～40d。
步骤S3，生根培养：再将无根白芨苗转移至生根壮苗培养基中进行生根培养，得到白芨组培苗，其中，生根壮苗培养基是以MS培养基为基础并添加包括下列按质量体积浓度计的组分：1.5～5mg/L 6-苄氨基腺嘌呤、0.1-0.5mg/L萘乙酸、0.1～0.5mg/L吲哚丁酸，25～35g/L蔗糖、6～8g/L琼脂粉，生根壮苗培养基的pH为5.8～6.0。
上述生根壮苗培养基中，在MS培养基的基础上，额外添加了6-苄氨基腺嘌呤、萘乙酸以及吲哚乙酸这三种激素，以及蔗糖和琼脂粉。其中，6-苄氨基腺嘌呤是为人工合成细胞分裂素，萘乙酸和吲哚乙酸是植物生长调节剂，这三种激素共同使用，促进白芨的细胞分裂与扩大，促进白芨苗生根，从而提高白芨苗的成活率。
进一步的，在生根壮苗培养基中，6-苄氨基腺嘌呤为2～4mg/L、萘乙酸为0.2-0.4mg/L、吲哚丁酸为0.2～0.4mg/L，蔗糖为27～33g/L、琼脂粉为7～8g/L，生根壮苗培养基的pH为5.8～6.0。
进一步的，生根培养的培养条件为：光照时间10-20h/d，光照强度1500～2000lx，培养室温度22～26℃，培养时间40～60d；或者，生根培养的培养条件为：光照时间14-19h/d，光照强度1500～1800lx，培养室温度24～26℃，培养时间43～52d。
步骤S4，驯化培养：再将白芨组培苗移植到大棚中进行驯化培养，得到白芨驯化苗。
进一步的，将白芨组培苗移植到大棚中进行驯化培养时，白芨组培苗的苗高4～6cm、具有3～5片叶，叶色绿色，并长有3～5条2～4cm粗壮根。
进一步的，在驯化培养的过程中，还包括：在白芨驯化苗植株营养生长期，给白芨驯化苗的叶面喷施含硒的叶面肥，施肥浓度为2-4g/667m2。这种采用硒肥和叶面喷施含硒微量元素叶面肥配套补硒方法，操作简单，成本低，产品质量可控，能有效提高无机硒的转化率，生产的原料总硒含量达20微克/100克(干基)以上，从而提高白芨的附加值。
进一步的，在驯化培养中，驯化苗床的基质包括：质量比为4～6：1～3：1～3：1的腐殖土、泥炭土、珍珠岩和蛭石。这种组成的基质适宜白芨苗的生长，有利于白芨苗被快速驯化。
进一步的，该白芨的快速繁殖方法还包括：将白芨驯化苗移栽于大田，并在白芨植株营养生长期给白芨植株的叶面施含硒的叶面肥，施肥浓度为4～8g/667m2。在大田培养的过程中，采用硒肥和叶面喷施含硒微量元素叶面肥配套补硒方法，能够进一步提高白芨的富硒含量，提高白芨产品的品质。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述：
实施例1
本实施例提供一种白芨的快速繁殖方法，其包括以下步骤：
a.选择优良、生长健壮的白芨单株材料进行标记，采摘白芨成熟且没有裂开的蒴果作为组织培养的外植体并对其进行无菌处理。
b.将无菌处理后的蒴果纵向剖开，利用100目的实验筛将白芨种子均匀播种到种子萌发培养基的表面进行萌发培养，得到白芨苗。其中，萌发培养的条件是：光照时间10～16h/d，光照强度2000～2300lx，培养室温度22～24℃，培养时间37～40d。种子萌发培养基，以MS培养基为基础并额外添加按质量体积浓度计的下列组分：30g/L蔗糖、8g/L琼脂粉，pH为5.8。
c.将步骤b中所得的1.8～2.2cm的白芨苗转接至假鳞茎诱导培养基中进行诱导培养，得到无根白芨苗。其中，诱导培养的条件是：光照时间10～14h/d，光照强度1500-1700lx，培养室温度22～23℃，培养时间30～38d。假鳞茎诱导培养基是以MS培养基为基础并添加包括下列按质量体积浓度计的组分：1.5mg/L 6-苄氨基腺嘌呤、0.5mg/L萘乙酸、35g/L蔗糖、8g/L琼脂粉，假鳞茎诱导培养基的pH为5.8。
d.将步骤c中所得的苗高1.7～2.3cm的无根白芨苗转移至生根壮苗培养基中进行生根培养，得到白芨组培苗。其中，生根培养的培养条件为：光照时间12-20h/d，光照强度1500～1700lx，培养室温度22～23℃，培养时间40～45d。生根壮苗培养基是以MS培养基为基础并添加包括下列按质量体积浓度计的组分：1.5mg/L 6-苄氨基腺嘌呤、0.5mg/L萘乙酸、0.5mg/L吲哚丁酸，35g/L蔗糖、6g/L琼脂粉，生根壮苗培养基的pH为5.8。
e.将步骤d中所得的苗高4～6cm、具有3-5片叶，叶色绿色、长有3～5条2～4cm粗壮根的白芨组培苗从瓶子里取出来，密植在大棚里，均按株行距2～4㎝×2～4㎝规格移栽，进行驯化培养后，将白芨驯化苗移栽到大田中。
实施例2
本实施例提供一种白芨的快速繁殖方法，其包括以下步骤：
a.选择优良、生长健壮的白芨单株材料进行标记，采摘白芨成熟且没有裂开的蒴果作为组织培养的外植体并对其进行无菌处理；无菌处理的步骤包括：先用自来水冲洗蒴果35分钟，然后放于无菌操作工作台上待用。使用80％的酒精浸泡蒴果25秒后使用无菌水冲洗3次，然后换用浓度0.15％的氯化汞溶液浸泡110秒，再用无菌水冲洗4次，最后用4％的次氯酸钠溶液浸泡12分钟，再用无菌水冲洗4次，期间不断搅拌。用滤纸将蒴果吸干水分，置于灭菌的培养皿中备用。
b.将无菌处理后的蒴果纵向剖开，利用120目的实验筛将白芨种子均匀播种到种子萌发培养基的表面进行萌发培养，得到白芨苗。其中，萌发培养的条件是：光照时间14～20h/d，光照强度2200～2500lx，培养室温度24～26℃，培养时间30～33d。种子萌发培养基，以MS培养基为基础并额外添加按质量体积浓度计的下列组分：50g/L蔗糖、6g/L琼脂粉，pH为6。
c.将步骤b中所得的1.8～2.2cm的白芨苗转接至假鳞茎诱导培养基中进行诱导培养，得到无根白芨苗。其中，诱导培养的条件是：光照时间16～20h/d，光照强度1600-2000lx，培养室温度25～26℃，培养时间42～45d。假鳞茎诱导培养基是以MS培养基为基础并添加包括下列按质量体积浓度计的组分：0.5mg/L 6-苄氨基腺嘌呤、1.5mg/L萘乙酸、25g/L蔗糖、6g/L琼脂粉，假鳞茎诱导培养基的pH为6.0。
d.将步骤c中所得的苗高1.7～2.3cm的无根白芨苗转移至生根壮苗培养基中进行生根培养，得到白芨组培苗。其中，生根培养的培养条件为：光照时间10-18h/d，光照强度1800～2000lx，培养室温度25～26℃，培养时间55～60d。生根壮苗培养基是以MS培养基为基础并添加包括下列按质量体积浓度计的组分：5mg/L 6-苄氨基腺嘌呤、0.1mg/L萘乙酸、0.1mg/L吲哚丁酸，25g/L蔗糖、8g/L琼脂粉，生根壮苗培养基的pH为6.0。
e.将步骤d中所得的苗高4～6cm、具有3-5片叶，叶色绿色、长有3～5条2～4cm粗壮根的白芨组培苗从瓶子里取出来，密植在大棚里，均按株行距2～4㎝×2～4㎝规格移栽，进行驯化培养；同时在白芨苗植株营养生长期辅之以叶面喷施含硒微量元素叶面肥补硒，浓度为2-4g/667m2。经过半年及以上时间的驯化，基本适应外界环境，得到白芨驯化苗。
其中，驯化培养的苗圃环境及管理：建设避雨遮阳的白芨驯化苗农膜大棚，选取配比为5：2：2：1的腐殖土、泥炭土、珍珠岩和蛭石组成的基质作育苗圃苗床；配合生物有机肥(以天然富硒土壤区域内的畜禽粪便、农作物秸秆等为主要原料，通过无害化、腐熟处理，添加特定功能微生物，复合而成的微生物有机肥料)50～100千克作为基肥一次性施入苗床内。育苗圃要求遮阴、通风、温暖、稍微湿润，并注意排渍、除草，经常保持驯化苗圃清洁。
f.春季4-5月，或者11月初前后，将白芨驯化苗从大棚里挖出来，均按株行距10-15㎝规格移栽于大田。同时在白芨植株营养生长期辅之以叶面喷施含硒微量元素叶面肥补硒，浓度为4-8g/667m2。
其中，大田环境及管理：选择疏松肥沃的腐殖质土壤，温暖、湿润环境。把土壤翻15-25厘米，每亩施复合肥40-60千克以上，配合生物有机肥(以天然富硒土壤区域内的畜禽粪便、农作物秸秆等为主要原料，通过无害化、腐熟处理，添加特定功能微生物，复合而成的微生物有机肥料)100～200千克作为基肥一次性施入苗床内。栽前浅翻土壤，使土壤和肥料混匀。把土整细，耙平，作宽1.2-1.5厘米的高畦,沟25-35厘米。
实施例3
本实施例提供一种白芨的快速繁殖方法，其包括以下步骤：
a.选择优良、生长健壮的白芨单株材料进行标记，采摘白芨成熟且没有裂开的蒴果作为组织培养的外植体并对其进行无菌处理；无菌处理的步骤包括：先用自来水冲洗蒴果30分钟，然后放于无菌操作工作台上待用。使用75％的酒精浸泡蒴果30秒后使用无菌水冲洗3次，然后换用浓度0.1％的氯化汞溶液浸泡120秒，再用无菌水冲洗3次，最后用5％的次氯酸钠溶液浸泡10分钟，再用无菌水冲洗3次，期间不断搅拌。用滤纸将蒴果吸干水分，置于灭菌的培养皿中备用。
b.将无菌处理后的蒴果纵向剖开，利用100目的实验筛将白芨种子均匀播种到种子萌发培养基的表面进行萌发培养，得到白芨苗。其中，萌发培养的条件是：光照时间13～17h/d，光照强度2300～2400lx，培养室温度25～26℃，培养时间35～37d。种子萌发培养基，以MS培养基为基础并额外添加按质量体积浓度计的下列组分：40g/L蔗糖、7g/L琼脂粉，pH为5.9。
c.将步骤b中所得的1.8～2.2cm的白芨苗转接至假鳞茎诱导培养基中进行诱导培养，得到无根白芨苗。其中，诱导培养的条件是：光照时间14～16h/d，光照强度1700-1800lx，培养室温度24～25℃，培养时间38～42d。假鳞茎诱导培养基是以MS培养基为基础并添加包括下列按质量体积浓度计的组分：1mg/L 6-苄氨基腺嘌呤、1mg/L萘乙酸、30g/L蔗糖、7g/L琼脂粉，假鳞茎诱导培养基的pH为5.9。
d.将步骤c中所得的苗高1.7～2.3cm的无根白芨苗转移至生根壮苗培养基中进行生根培养，得到白芨组培苗。其中，生根培养的培养条件为：光照时间15-17h/d，光照强度1600～1700lx，培养室温度24～25℃，培养时间48～52d。生根壮苗培养基是以MS培养基为基础并添加包括下列按质量体积浓度计的组分：3mg/L 6-苄氨基腺嘌呤、0.3mg/L萘乙酸、0.3mg/L吲哚丁酸，30g/L蔗糖、7g/L琼脂粉，生根壮苗培养基的pH为5.9。
e.将步骤d中所得的苗高4～6cm、具有3-5片叶，叶色绿色、长有3～5条2～4cm粗壮根的白芨组培苗从瓶子里取出来，密植在大棚里，均按株行距2～4㎝×2～4㎝规格移栽，进行驯化培养后，将白芨驯化苗移栽到大田中。
综上，本实施方式提供的这种白芨的快速繁殖方法的繁殖周期短，利用组织培养的方式繁育的白芨驯化苗，性状稳定，成苗率高(大于95％)，生长速度快，长势一致，大小均匀，可大幅降低白芨的培养成本。
尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明，然而应意识到，在不背离本发明的精神和范围的情况下可以作出许多其它的更改和修改。因此，这意味着在所附权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些变化和修改。