本发明涉及兰花培养基领域，特别是一种利用蝴蝶兰花梗建立快繁体系的培养基及培养方法。
背景技术：
市场上通常蝴蝶兰组织培养采用ms培养基，其特点是无机盐含量高，特别是硝酸盐和铵盐含量大，可满足离体组织生长发育对营养的需要。此外，现有技术也发现了加入植物生长调节剂，可以诱导外植体的分化。
但利用ms培养基对蝴蝶兰花梗的诱导诱导率不是很高，这一方面与培养基有关，另一方面也与外源植物生长调节剂种类和浓度有关；市场需要找到一种能够提高蝴蝶兰花梗的诱导诱导率的生长调节剂和该生长调节剂合适的使用浓度；本发明解决这样的问题。
技术实现要素：
为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种利用蝴蝶兰花梗高效建立快繁体系的培养基及培养方法，本发明通过添加特定浓度的6-苄基嘌呤，提高了蝴蝶兰花梗诱导率,最高诱导率可达80％以上。
为了实现所述目标，本发明采用如下的技术方案：
一种利用蝴蝶兰花梗高效建立快繁体系的培养基，由基础培养基和生长调节剂混合构成，
基础培养基的成分包括：硝酸钾，硫酸铵，磷酸二氢钾，硫酸镁，磷酸钙，硫酸锰，乙二胺四乙酸二钠；
每升的培养基内的基础培养基的组成为：kno3：500-1900mg/l，(nh4)2so4：400-700mg/l，kh2po4：150-270mg/l，mgso4﹒7h2o：150-300mg/l，ca3(po4)：100-150mg/l，mnso4﹒4h2o：160-300mg/l，na2﹒edta：37.3mg/l；
生长调节剂为6-苄氨基腺嘌呤，每升的培养基内的生长调节剂的组成为：6-苄氨基腺嘌呤：4-6mg/l。
前述的一种利用蝴蝶兰花梗高效建立快繁体系的培养基，每升的培养基内的基础培养基的组成为：kno3:525mg/l，(nh4)2so4:500mg/l，kh2po4:250mg/l，mgso4﹒7h2o:250mg/l，ca3(po4):200mg/l，mnso4﹒4h2o:7.5mg/l，na2﹒edta:37.3mg/l。
前述的一种利用蝴蝶兰花梗高效建立快繁体系的培养基，还包括：辅助剂；辅助剂的成分包括：蔗糖，琼脂，活性炭，香蕉泥。
前述的一种利用蝴蝶兰花梗高效建立快繁体系的培养基，每升的培养基内的辅助剂的组成为：蔗糖：2％，琼脂：7～10g/l，活性炭：0.2～0.5g/l，香蕉泥：100～150g/l。
前述的一种利用蝴蝶兰花梗高效建立快繁体系的培养基，每升的培养基内的生长调节剂的组成为：6-苄氨基腺嘌呤：5-6mg/l。
前述的一种利用蝴蝶兰花梗高效建立快繁体系的培养基，每升的培养基内的生长调节剂的组成为：6-苄氨基腺嘌呤：5.2-5.6mg/l。
前述的一种利用蝴蝶兰花梗高效建立快繁体系的培养基，每升的培养基内的生长调节剂的组成为：6-苄氨基腺嘌呤：5.2mg/l。
一种利用蝴蝶兰花梗高效建立快繁体系的培养方法，包括如下步骤：
步骤一，将花梗从母体切下，选取基部3～5节；
步骤二，再将花梗切成2～3cm带芽的小段，除去节间刨片；
步骤三，将花梗消毒后用解剖刀将两端各切去0.5cm，将芽体向上竖直插入培养基中；
培养基，由基础培养基和生长调节剂混合构成，
基础培养基的成分包括：硝酸钾，硫酸铵，磷酸二氢钾，硫酸镁，磷酸钙，硫酸锰，乙二胺四乙酸二钠；
每升的培养基内的基础培养基的组成为：kno3：500-1900mg/l，(nh4)2so4：400-700mg/l，kh2po4：150-270mg/l，mgso4﹒7h2o：150-300mg/l，ca3(po4)：100-150mg/l，mnso4﹒4h2o：160-300mg/l，na2﹒edta：37.3mg/l；
生长调节剂为6-苄氨基腺嘌呤，每升的培养基内的生长调节剂的组成为：6-苄氨基腺嘌呤：4-6mg/l；
步骤四，置于光照1000lux，10h/d，温度25℃，60天后统计其萌芽率。
前述的一种利用蝴蝶兰花梗高效建立快繁体系的培养方法，步骤三，将花梗消毒后用解剖刀将两端各切去0.5cm，将芽体向上竖直插入培养基中；花梗消毒的具体过程为：先用75％的酒精漂洗30s，再用0.1％升汞消毒5～10min,无菌水冲洗3～5次，再放在干燥无菌滤纸上。
前述的一种利用蝴蝶兰花梗高效建立快繁体系的培养方法，步骤三，将花梗消毒后用解剖刀将两端各切去0.5cm，将芽体向上竖直插入培养基中；将插入培养基的形态学下端切成45°斜角。
本发明的有益之处在于：
本发明本发明通过添加特定浓度的6-苄基嘌呤，提高了蝴蝶兰花梗诱导率,最高诱导率可达80％以上；
蔗糖作为培养基的能源物质和渗透调节剂；香蕉泥具有较大的ph缓冲作用；琼脂作为凝固剂能够使离体的花梗能够稳定于培养基的表面，既能吸收必要的养分和水分，又可避免离体花梗沉没因缺氧而死亡；活性炭可以从培养基中吸附多种有机物和无机物分子，可以清除培养的花梗在代谢过程中产生的对营养物有不良和毒副作用的物质，降低花梗培养过程中褐变的发生，另外，活性炭还可以调节激素的供应。
将花梗的形态学下端切成45°斜角，一方面便于插入培养基，另一方面，增大了花梗与培养基的接触面积，提高了花梗吸收养分的效率。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明作具体的介绍。
一种利用蝴蝶兰花梗高效建立快繁体系的培养基，由基础培养基和生长调节剂混合构成，
基础培养基的成分包括：硝酸钾，硫酸铵，磷酸二氢钾，硫酸镁，磷酸钙，硫酸锰，乙二胺四乙酸二钠；
每升的培养基内的基础培养基的组成为：kno3：500-1900mg/l，(nh4)2so4：400-700mg/l，kh2po4：150-270mg/l，mgso4﹒7h2o：150-300mg/l，ca3(po4)：100-150mg/l，mnso4﹒4h2o：160-300mg/l，na2﹒edta：37.3mg/l；
作为一种优选，每升的培养基内的基础培养基的组成为：kno3:525mg/l，(nh4)2so4:500mg/l，kh2po4:250mg/l，mgso4﹒7h2o:250mg/l，ca3(po4):200mg/l，mnso4﹒4h2o:7.5mg/l，na2﹒edta:37.3mg/l。
生长调节剂为6-苄氨基腺嘌呤，每升的培养基内的生长调节剂的组成为：6-苄氨基腺嘌呤：4-6mg/l。
培养基，还包括：辅助剂；辅助剂的成分包括：蔗糖，琼脂，活性炭，香蕉泥；每升的培养基内的辅助剂的组成为：蔗糖：2％，琼脂：7～10g/l，活性炭：0.2～0.5g/l，香蕉泥：100～150g/l。
一种利用蝴蝶兰花梗高效建立快繁体系的培养方法，包括如下步骤：
步骤一，将花梗从母体切下，选取基部3～5节。
步骤二，再将花梗切成2～3cm带芽的小段，除去节间刨片。
步骤三，将花梗消毒后用解剖刀将两端各切去0.5cm，将芽体向上竖直插入培养基中；将插入培养基的形态学下端切成45°斜角；花梗消毒的具体过程为：先用75％的酒精漂洗30s，再用0.1％升汞消毒5～10min,无菌水冲洗3～5次，再放在干燥无菌滤纸上。
步骤四，置于光照1000lux，10h/d，温度25℃，60天后统计其萌芽率。
为了探索如何提高蝴蝶兰花梗的诱导诱导率；找到合适的生长调节剂和该生长调节剂合适的使用浓度；本发明做了如下实验：
实验一，
培养基包含：基础培养基，生长调节剂，辅助剂；每升的培养基内的基础培养基的组成为：kno3:525mg/l，(nh4)2so4:500mg/l，kh2po4:250mg/l，mgso4﹒7h2o:250mg/l，ca3(po4):200mg/l，mnso4﹒4h2o:7.5mg/l，na2﹒edta:37.3mg/l。
辅助剂的成分包括：蔗糖，琼脂，活性炭，香蕉泥；每升的培养基内的辅助剂的组成为：蔗糖：2％，琼脂：8g/l，活性炭：0.3g/l，香蕉泥：140g/l。
生长调节剂选用6-苄氨基腺嘌呤，将6-苄氨基腺嘌呤的浓度分别选取4mg/l,4.2mg/l,4.4mg/l,4.6mg/l,4.8mg/l，5mg/l，5.2mg/l，5.4mg/l,5.6mg/l,5.8mg/l,6mg/l，分别根据如下方法做11个梯度实验，每个梯度实验用60个花梗，实验数据如表一。
培养方法，包括如下步骤：
步骤一，将花梗从母体切下，选取基部4节。
步骤二，再将花梗切成2cm带芽的小段，除去节间刨片。
步骤三，将花梗消毒后用解剖刀将两端各切去0.5cm，将芽体向上竖直插入培养基中；花梗的下端切成斜角；花梗消毒的具体过程为：先用75％的酒精漂洗30s，再用0.1％升汞消毒10min,无菌水冲洗4次，再放在干燥无菌滤纸上。
步骤四，置于光照1000lux，10h/d，温度25℃，60天后统计其萌芽率。
表一
实验二：
培养基包含：基础培养基，生长调节剂，辅助剂；每升的培养基内的基础培养基的组成为：kno3:525mg/l，(nh4)2so4:500mg/l，kh2po4:250mg/l，mgso4﹒7h2o:250mg/l，ca3(po4):200mg/l，mnso4﹒4h2o:7.5mg/l，na2﹒edta:37.3mg/l。
辅助剂的成分包括：蔗糖，琼脂，活性炭，香蕉泥；每升的培养基内的辅助剂的组成为：蔗糖：2％，琼脂：8g/l，活性炭：0.3g/l，香蕉泥：140g/l。
生长调节剂选用萘乙酸，将萘乙酸的浓度分别选取4mg/l,4.2mg/l,4.4mg/l,4.6mg/l,4.8mg/l，5mg/l，5.2mg/l，5.4mg/l,5.6mg/l,5.8mg/l,6mg/l，分别根据如下方法做11个梯度实验，每个梯度实验用60个花梗，实验数据如表一。
培养方法，包括如下步骤：
步骤一，将花梗从母体切下，选取基部4节。
步骤二，再将花梗切成2cm带芽的小段，除去节间刨片。
步骤三，将花梗消毒后用解剖刀将两端各切去0.5cm，将芽体向上竖直插入培养基中；花梗的下端切成斜角；花梗消毒的具体过程为：先用75％的酒精漂洗30s，再用0.1％升汞消毒10min,无菌水冲洗4次，再放在干燥无菌滤纸上。
步骤四，置于光照1000lux，10h/d，温度25℃，60天后统计其萌芽率。
表二
实验三：
培养基包含：基础培养基，生长调节剂，辅助剂；每升的培养基内的基础培养基的组成为：kno3:525mg/l，(nh4)2so4:500mg/l，kh2po4:250mg/l，mgso4﹒7h2o:250mg/l，ca3(po4):200mg/l，mnso4﹒4h2o:7.5mg/l，na2﹒edta:37.3mg/l。
辅助剂的成分包括：蔗糖，琼脂，活性炭，香蕉泥；每升的培养基内的辅助剂的组成为：蔗糖：2％，琼脂：8g/l，活性炭：0.3g/l，香蕉泥：140g/l。
生长调节剂选用吲哚乙酸，将吲哚乙酸的浓度分别选取4mg/l,4.2mg/l,4.4mg/l,4.6mg/l,4.8mg/l，5mg/l，5.2mg/l，5.4mg/l,5.6mg/l,5.8mg/l,6mg/l，分别根据如下方法做11个梯度实验，每个梯度实验用60个花梗，得到实验数据如表一。
培养方法，包括如下步骤：
步骤一，将花梗从母体切下，选取基部4节。
步骤二，再将花梗切成2cm带芽的小段，除去节间刨片。
步骤三，将花梗消毒后用解剖刀将两端各切去0.5cm，将芽体向上竖直插入培养基中；花梗的下端切成斜角；花梗消毒的具体过程为：先用75％的酒精漂洗30s，再用0.1％升汞消毒10min,无菌水冲洗4次，再放在干燥无菌滤纸上。
步骤四，置于光照1000lux，10h/d，温度25℃，60天后统计其萌芽率。
表三
由实验一、二、三能够看出，生长调节剂选用6-苄氨基腺嘌呤，蝴蝶兰花梗的诱导诱导率都在23％以上；选用萘乙酸，蝴蝶兰花梗的诱导诱导率最大的才18.33％；选用吲哚乙酸，蝴蝶兰花梗的诱导诱导率最大的才13.33％；由此看出6-苄氨基腺嘌呤能够很好的诱导花梗萌芽。
由表一能够看出，每升的培养基内的6-苄氨基腺嘌呤在5-6mg/l这个范围内时，诱导率大于等于65％。
由表一能够看出，每升的培养基内的6-苄氨基腺嘌呤在5.2-5.6mg/l这个范围内时，诱导率大于等于80％。
由表一能够看出，每升的培养基内的6-苄氨基腺嘌呤在5.2mg/l时，诱导率最优，为85％。
本发明提供一种利用蝴蝶兰花梗高效建立快繁体系的培养基及培养方法，本发明通过添加特定浓度的6-苄基嘌呤，提高了蝴蝶兰花梗诱导率,最高诱导率可达80％以上。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和优点。本行业的技术人员应该了解，所述实施例不以任何形式限制本发明，凡采用等同替换或等效变换的方式所获得的技术方案，均落在本发明的保护范围内。