本发明属于作物繁育领域，具体涉及一种灰木莲的组培繁育方法。
背景技术：
灰木莲（magnoliaceaeglancablume）是木兰科中的我国特有的单种属植物，国家一级保护、濒危植物。其为木兰科的木莲属与木兰属之间找到了一种相互衔接的链环，对研究木兰科的系统演化、探讨被子植物的起源有着极其重要的地位。灰木莲作为濒危植物，具有极大的研究价值，其作为园林用树，具有绿化、美化、净化的功能：灰木莲四季常绿，枝繁叶茂，生长快，适应性较强；干形通直，树形优美，花多且花期长，花大而洁白，并能散发清香，是优良的观赏绿化树种；此外，灰木莲还具有较强的杀菌保健能力。因此，适于在城镇市区街道、公园、庭院、路旁、草坪等地种植，在城市主干道作行道树效果甚佳。另外，作为木材，灰木莲木材纹理细致，易加工，切面光滑美丽，容易干燥，可供建筑、家具和胶合板等用。
灰木莲育苗主要为种子繁殖，因其种子不易保存，所以，最好能随采随播。播种前，将处理好的种子用0.2%～0.5%的高锰酸钾或多菌灵溶液浸种半小时，捞出沥干后播于沙床内进行催芽。待种子发芽，幼苗长出沙面，子叶完全展开且转绿时，将芽苗移植到装配好营养基质的育苗袋内，按照常规容器苗培育措施进行水肥管理和病虫害防治。苗木高度达到25cm以上，可出圃造林。
目前，有不少科技期刊和专利文献对灰木莲的种植方法进行了研究，现摘录了以下部分作为本发明的技术背景：
中国专利申请201710194071.3，发明名称为：一种灰木莲扦插繁殖的生根方法的发明，公开了如下步骤：（1）先用秋季扦插法，在当年10月底采集从灰木莲优树桩萌发的半木质化枝条；（2）扦插前1天，用质量分数为0.5%高锰酸钾对沙床淋洗消毒，扦插前用清水冲洗沙床；（3）将枝条剪成10cm长的穗条，直径7~10mm，上切口平口，聚下部最近的芽约为2cm，下切口为斜口，每个插穗都有饱满芽1~2个，保留1~2片叶子；（4）将穗条放入0.1%高锰酸钾溶液中浸泡10~20分钟，再放入80~120mg/l浓度abt溶液中浸泡1.5小时，取出穗条后插在基质中，株行距为5cm，扦插深度为2~3cm；（5）采用全光自控喷雾装置，遮阴网透光率为70%，扦插期间每隔7d喷施1次800倍多菌灵溶液，生根后每隔7d喷施0.5%磷酸二氢钾和0.1%尿素混合液。该方法虽然突破了灰木莲无性繁殖的技术难题，但是不利于实现灰木莲的大规模工程化育苗。
技术实现要素：
本发明提供一种灰木莲的组培繁育方法，实现灰木莲组织培养育苗，相对于传统的种子繁殖，更利于实现灰木莲的工程化育苗，该组培苗成活率高，对于保护我国濒危植物灰木莲有着极其重要的价值和意义。
本发明的技术方案是这样实现的：
灰木莲的组培繁育方法，包括如下步骤：
（1）外植体处理：以8年生灰木莲树为采集母本，选取无病虫危害的当年生嫩芽作为外植体，进行以下一系列处理：先用纯净水冲洗3~4次，吸水纸吸干后，用0.5%高锰酸钾溶液浸泡20~25min，再用无菌水冲洗2~3次，用吸水纸吸干后，用消毒过的解剖剪剪成3~3.5cm的小段，备用。
（2）诱导培养基培养：将剪成的小段放到诱导培养基上培养：先在23～25℃条件下全暗培养20～22天，然后置于每天光照15～17小时，光照强度为1200～1500lx，培养温度为26～28℃条件下培养，诱导生芽。
（3）增殖培养：将步骤（1）所得的芽转入增殖培养基上继续进行增殖培养，培养条件：温度：22～24℃条件下全暗培养直至叶腋处萌生一个侧芽，然后置于每天光照12～15小时，光照强度为2000～2500lx，培养温度为25～28℃的条件下培养至腋芽长至2～3cm。
（4）生根培养：将步骤（2）所获得腋芽无须切割，直接接种到生根培养基上进行生根培养，培养条件：温度28~30℃，光照强度1800~2500lux；培养35~38天后，主侧根明显时结束。
（5）炼苗：使用温室苗床炼苗，苗床基质按质量配比为：黄土：沙土：蛭石：腐殖酸为45:15:10:5，移栽至苗床后全暗培养，待苗定根后转移至阳光处，继续培养一个月后将苗床转移至自然环境下继续培养35~42天，炼苗完成。
步骤（2）所述诱导培养基配方为：ms+6-ba1～1.5mg/l+naa0.5～0.75mg/l+蔗糖3g/l+琼脂4g/l，ph值为5.8～6.0。
步骤（3）所述的增殖培养基配方为：ms+6-ba0.75～2mg/l+naa0.22～0.25mg/l+氨基寡糖素0.05~0.18mg/l+蔗糖3.5g/l+琼脂4g/l，ph值为5.6~5.8。
步骤（4）所述生根培养基配方为：ms+蔗糖4g/l+iaa0.10~0.12mg/l+iba0.18~0.22mg/l+naa0.5~1.1mg/l+琼脂5g/l，ph6.0~6.1。
本发明的有益效果为：灰木莲作为国家濒危植物，引种及繁育困难，扦插或其他繁育方法，难以大面积推广，导致灰木莲在我国的面积越来越少。本发明提供了一种灰木莲组培繁育方法，改变了灰木莲难以繁育的问题，组织培养繁育幼苗影响因素复杂，开发技术难度大，本发明通过对诱导培养基、增值培养基和生根培养基配方的筛选优化，培育出的灰木莲幼苗成活率高达90%以上，移栽成活率达85%以上，并在多处推广成功，对挽救我国的珍贵树种，进一步开发灰木莲的应用价值提供了帮助。
具体实施方式
实施例1
（1）外植体处理：以8年生灰木莲树为采集母本，选取无病虫危害的当年生嫩芽作为外植体，进行以下一系列处理：先用纯净水冲洗3~4次，吸水纸吸干后，用0.5%高锰酸钾溶液浸泡20~25min，再用无菌水冲洗2~3次，用吸水纸吸干后，用消毒过的解剖剪剪成3~3.5cm的小段，备用。
（2）诱导培养基培养：将剪成的小段放到诱导培养基上培养：先在23～25℃条件下全暗培养20～22天，然后置于每天光照15～17小时，光照强度为1200～1500lx，培养温度为26～28℃条件下培养，诱导生芽；诱导培养基配方为：ms+6-ba1～1.5mg/l+naa0.5～0.75mg/l+蔗糖3g/l+琼脂4g/l，ph值为5.8～6.0。本发明对诱导培养基配方的优化对比试验如下：
首先分别筛选6-ba和naa的最佳用量，确定6-ba1～1.5mg/l和naa0.5～0.75mg/l为最佳浓度，通过对最优组合的分别搭配试验表明：各组合成苗率均在90%以上，6-ba1.5mg/l和naa0.65～0.75mg/l为最佳浓度。
（3）增殖培养：将步骤（1）所得的芽转入增殖培养基上继续进行增殖培养，培养条件：温度：22～24℃条件下全暗培养直至叶腋处萌生一个侧芽，然后置于每天光照12～15小时，光照强度为2000～2500lx，培养温度为25～28℃的条件下培养至腋芽长至2～3cm；增殖培养基配方为：ms+6-ba0.75～2mg/l+naa0.22～0.25mg/l+氨基寡糖素0.05~0.18mg/l+蔗糖3.5g/l+琼脂4g/l，ph值为5.6~5.8。
本发明通过同样的优化方法确定培养基各因素对发芽的影响，确定6-ba0.75～2mg/l+naa0.22～0.25mg/l分化芽数最多，以下为最佳浓度范围内各组合对分化芽的对比实验：
（4）生根培养：将步骤（2）所获得腋芽无须切割，直接接种到生根培养基上进行生根培养，培养条件：温度28~30℃，光照强度1800~2500lux；培养35~38天后，主侧根明显时结束；生根培养基配方为：ms+蔗糖4g/l+iaa0.10~0.12mg/l+iba0.18~0.22mg/l+naa0.5~1.1mg/l+琼脂5g/l，ph6.0~6.1。
本发明通过上述试验方法对生根培养基的iaa、iba和naa分别进行了促生根影响试验，确定iaa0.10~0.12mg/l、iba0.18~0.22mg/l及naa0.5~1.1mg/l为优化浓度范围，通过对三者组合试验对比发现，同样均表现出良好的生根效果。
（5）炼苗：使用温室苗床炼苗，苗床基质按质量配比为：黄土：沙土：蛭石：腐殖酸为45:15:10:5，移栽至苗床后全暗培养，待苗定根后转移至阳光处，继续培养一个月后将苗床转移至自然环境下继续培养35~42天，炼苗完成。
苗床基质的各组分配比对炼苗影响很大，本发明对苗床基质各组分优化结果如下：