本发明涉及一种花生选育方法，尤其是涉及一种室内筛选花生耐寒种质的方法。
背景技术：
花生是我国重要的油料作物和经济作物，并且花生在我国种植范围较广，北方已种植到黑龙江省第一积温带，然而在我国东北花生产区，5月播种遇寒流，低温天气易使花生发生大面积低温冷害而烂种，生理表现为代谢弱，生长缓慢，根系吸水减少，蒸腾作用减弱，导致补种或毁种，导致严重减产。所以为了减少花生播种后由于低温造成的损失，有必要通过品种筛选，找到具有播种后抵御极端天气的种质资源，为耐寒花生新品种选育提供依据。
花生耐寒资源筛选最贴近生产的方法是在春季以早播试验进行，这样筛选出来的资源与生产实际相符合，但是受季节影响，每年只能在东北的春季方能开展，如果外界温度变化不稳定，试验结果也不同。因此，许多科研工作者采用室内水培方法进行耐寒资源筛选，该方法是采用低温培养箱、层析柜等仪器进行，然而，本课题组多年进行室内耐寒花生水培筛选，发现该方法重复性较差，获得的试验数据不稳定，并且与田间早播试验结果也存在较大差异。所以，急需寻找一种适合室内进行筛选花生耐寒种质的方法，加快耐寒花生新品种选育。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种室内筛选花生耐寒种质的方法，该方法利用沙培法结合低温胁迫花生发芽，模拟花生萌发期受到的低温胁迫，对花生种质进行耐寒资源筛选，该方法接近田间生产。
为了解决现有技术存在的问题，本发明采用的技术方案如下：
一种室内筛选花生耐寒种质的方法，包括以下步骤：
（1）种子精选：
选择整齐一致、饱满度好，无损伤、无裂纹、无大小粒，色泽鲜艳的花生种仁作种子，种仁出芽率达95%以上；
（2）沙子处理：
选择河沙，经粗筛处理后，进行高压灭菌，蒸馏水完全浇透后置于2℃培养箱中进行预冷处理；
（3）萌发处理：
25℃下用蒸馏水浸种12h，水份充分浸没种子；
（4）耐寒处理：
浸种后的种子播种在饱含水份的沙子中，单粒播种，种子间距离大于3cm，种子覆盖沙子0.5cm~1cm左右，2℃培养箱中培养2d~4d；
（5）耐寒鉴定：
转入25℃培养箱中正常发芽至7d，以发芽率和芽长/种长的比值作为耐寒性标准。
所述耐寒性标准为：发芽率在86%~100%时耐寒性最强，发芽率在61%~85%时耐寒性强，发芽率在46%~60%时耐寒性中等，发芽率在31%~45%时耐寒性弱，30%以下时发芽率耐寒性最弱；芽长/种长≥1.0耐寒性最强，1.0>芽长/种长≥0.5耐寒性强，0.5>芽长/种长≥0.1耐寒性弱，芽长/种长≤0.1耐寒性最弱。
本发明所具有的优点与有益效果是：
本发明一种室内筛选花生耐寒种质的方法，是由25℃下用蒸馏水浸种12h，而后转入2℃预冷的饱含水份的沙子容器中，2℃低温处理2d~4d，而后转入25℃培养箱中正常发芽至7d，以发芽率和芽长/种长的比值作为抗寒性标准，对花生萌发期的耐寒性进行鉴定。本发明由于是利用沙培法结合低温胁迫花生发芽，模拟花生萌发期受到的低温胁迫，对花生种质进行耐寒资源筛选，该方法接近田间生产。本发明通过两年早播试验结果，获得耐寒与不耐寒花生种质，采用水培法、沙培法和土培法进行对比试验，最终确定以沙培法进行室内筛选与早播试验结果接近，该方法最符合生产实际。
具体实施方式
为了进一步说明本发明，下面结合实施例对本发明进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
本发明一种室内筛选花生耐寒种质的方法，包括以下步骤：
（1）种子精选：
选择整齐一致、饱满度好，无损伤、无裂纹、无大小粒，色泽鲜艳的花生种仁作种子，种仁出芽率达95%以上；
（2）沙子处理：
选择河沙，经粗筛处理后，进行高压灭菌，蒸馏水完全浇透后置于2℃培养箱中进行预冷处理；
（3）萌发处理：
25℃下用蒸馏水浸种12h，水份充分浸没种子；
（4）耐寒处理：
浸种后的种子播种在饱含水份的沙子中，单粒播种，种子间距离大于3cm，种子覆盖沙子0.5cm~1cm左右，2℃培养箱中培养2d~6d；
（5）耐寒鉴定：
转入25℃培养箱中正常发芽至7d，以发芽率和芽长/种长的比值作为耐寒性标准。
结合田间早播试验，明确花生耐寒标准。
发芽率标准为：发芽率在86%~100%时耐寒性最强，发芽率在61%~85%时耐寒性强，发芽率在46%~60%时耐寒性中等，发芽率在31%~45%时耐寒性弱，30%以下时发芽率耐寒性最弱。芽长/种长标准为：芽长/种长≥1.0耐寒性最强，1.0>芽长/种长≥0.5耐寒性强，0.5>芽长/种长≥0.1耐寒性弱，芽长/种长≤0.1耐寒性最弱。
田间试验：
1、试验材料的田间重复性鉴定：
供试材料38份（表1），试验地点在辽宁省风沙地改良利用研究所旱作农业基地（121°70′e，42°06′n）进行。设置不同播期，分别于2016年设置3次播期：4月15日、4月26日、5月5日，和2017年设置5次播期：4月24日、5月1日、5月8日、5月15日、5月19日，进行重复性验证。每份材料选30粒种子，单粒播种，穴距12cm，播种10d后分别进行调查，记录出苗数。结合两年早播试验结果，以5月1日至5月5日时间段为标准，此时-5cm地温，最低温度平均为9℃。2016年5月3日，-5cm地温最低温度为5℃；2017年5月5日，-5cm地温最低温度为4℃，以最后一次调查的出苗率为准，候选出处于不同耐寒指标的种质作为试验材料。
表1早播供试的花生材料
2、试验材料的室内不同方法筛选：
选择田间候选的6份材料，采用水培、沙培和土培方法进行室内低温方法筛选。
（1）试验品种挑选整齐一致、饱满度好，无损伤、无裂纹、无大小粒，色泽鲜艳的花生种仁作种子，籽仁出芽率达95%以上，每个品种选择30粒种子，3次重复，25℃培养箱下用蒸馏水浸种12h，以水没过种子为宜。
（2）预处理：设置低温培养箱温度为2℃，放入充足的蒸馏水备用，同时用于水培法。
沙子处理：选择河沙，经粗筛处理后，进行高压灭菌，置于塑料盒中，蒸馏水完全浇透后，置于2℃培养箱中进行预冷。
土壤处理：选择耕层土，经粗筛处理后，进行高压灭菌，置于塑料盒中，处理方法同沙子，置于2℃培养箱中进行预冷。
（3）不同处理下播种方法：
水培法——将浸种后的种子放入铺一层滤纸的培养皿中，倒入预冷的蒸馏水，不超过种子的1/2位置，盖好培养皿。
沙培法——将浸种后的种子放入预处理的沙子中，单粒播种，种子间距离大于3cm，种子覆盖沙子0.5cm~1cm左右，盖好塑料盖。
土培法——将浸种后的种子放入预处理的土壤中，单粒播种，种子间距离大于2cm，种子覆盖沙子1cm左右，盖好塑料盖。
（4）胁迫处理方法：
将以上不同处理的花生置于2℃培养箱中，分别低温胁迫2d、4d和6d，最后转入25℃中正常发芽7d，分别测定发芽数、芽长和种长。
（5）不同处理方法发芽率结果比较：
25℃中正常发芽7d后，对低温胁迫2d和4d的发芽数、芽长和种长进行测量，整理3次重复，统计结果见表2和表3，需要说明的是低温胁迫6d处理后，多数花生出现烂种现象，所以这里不做统计。
表2不同试验方法下低温胁迫2d和4d下发芽率
表3不同试验方法下低温胁迫2d和4d下芽长/种长
通过水培、沙培和土培方法比较，最终候选出沙培法可在室内进行耐寒种质的筛选。
、耐寒标准的确定
依据本发明早播试验与室内沙培法获得的出苗率结果，推算出耐寒花生的标准为：发芽率在86%~100%时耐寒性最强，发芽率在61%~85%时耐寒性强，发芽率在46%~60%时耐寒性中等，发芽率在31%~45%时耐寒性弱，30%以下时发芽率耐寒性最弱。
从室内沙培法获得的芽长和种长的比值，推算出花生耐寒标准为：芽长/种长≥1.0耐寒性最强，1.0>芽长/种长≥0.5耐寒性强，0.5>芽长/种长≥0.1耐寒性弱，芽长/种长≤0.1耐寒性最弱。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。