一种黄芩良种繁育与栽培方法与流程

本发明属于新植物或获得新植物的方法技术领域，尤其涉及一种黄芩良种繁育与栽培方法。

背景技术

目前，业内常用的现有技术是这样的：黄芩是常用中药材，由于野生资源的日益减少及使用量的不断扩大，目前药用黄芩以栽培品为主，且栽培面积不断扩大。黄芩(scutellariabaicalensisgeorgi)为唇形科植物，以根入药，具有清热燥湿，泻火解毒，止血，安胎之功效。黄芩是一个广布种，跨越了多个气候带和土壤带。尽管在不同地区其植株高矮、分枝多少、花的颜色、叶片毛茸等特征有一些变化，但从总体上看，叶片和花果形态比较一致，未见有种下分类单位的记载。但调查发现不同产地黄芩在外观形态上有一些差异，如茎有青、紫两种，花有紫、粉、白色之分，并且株高，分枝数，地上部鲜重、根的粗细长短、有无枯心等生物学特征有较大区别，物候期也不尽相同，表明黄芩种内具有遗传差异。除此之外，不同种质的黄芩栽培适应性不同，对抗外界不良环境的能力有差异，更重要的是主要有效成分黄芩苷等的含量有较大区别。“鲁芩1号”黄芩(scutellariabaicalensisgeorgi)为多年生草本，株高45-50cm，茎较粗壮，主茎较明显，茎粗壮，主茎2-3条，其上有多数侧枝，绿色，被毛。叶表面深绿色，叶质略厚，叶片较大，长3-4.2cm，宽0.6-0.9cm，被毛。叶缘及下表面叶脉处毛长而密，呈睫毛。花序轴较长，且粗，长15-20cm，花排列较稀疏，花长约1.8cm，紫色到蓝紫色，基部带黄色，被毛。果实黑色，较大，长1.2-2.6mm，宽1.5-1.9mm，千粒重1.9-2.1g。根较粗大，一年生根单株均重6-7g，二年生单株均重16-17g。根中黄芩苷含量高，均大于10％。其栽培适应性较强，在抗病、抗逆等方面均较优良。

综上所述，现有技术存在的问题是：

(1)没有良种用于黄芩生产，黄芩种质混杂现象严重。

(2)黄芩药材质量不稳定。

(3)栽培适应性较弱，在抗病、抗逆不足。

解决上述技术问题的难度和意义：

黄芩是一个广布种，跨越了多个气候带和土壤带。尽管在不同地区其植株高矮、分枝多少、花的颜色、叶片毛茸等特征有一些变化，但从总体上看，叶片和花果形态比较一致，未见有种下分类单位的记载。但调查发现不同产地黄芩在外观形态上有一些差异，如茎有青、紫两种，花有紫、粉、白色之分，并且株高，分枝数，地上部鲜重等生物学特征有较大区别，物候期也不尽相同，表明黄芩种内具有遗传差异。

目前，由于黄芩药用量的不断增加，野生资源破坏严重，药用黄芩以栽培品为主。尽管人工栽培已取得了一些成绩，但目前还没有培育出品质优良的品种或农家类型。有些黄芩经过几代栽培后形成了一些变异，如根的粗细长短、有无枯心等有差别，主要有效成分黄芩苷的含量也有差异。种质间质量参差不齐，并且还有品质退化现象。

此外，由于大部分栽培黄芩仅经过短期引种和驯化，药农引种时又存在盲目性，从而造成栽培群体种质混杂，植株间良莠不齐，商品质量不稳定。严重影响了临床疗效。

鉴于上述情况，进行黄芩良种筛选工作迫在眉睫。中药材良种选育的难度远远大于一般农作物，主要原因是除了要有农产品良种的高产量、高抗性外，对于药效的要求也较高，要求中药材良种有效成分含量高，药效好。因此必须在对国内黄芩种质资源的调研、收集、整理、引进和栽培的基础上，通过系统的品比试验，筛选出品质优良的种质，并利用现代分子生物学等方法检测种群间、种群内的遗传差异，为进一步开展黄芩的良种产业化生产，极大提高黄芩的产量与质量，打下坚实的基础。

技术实现要素：

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种黄芩良种繁育与栽培方法。

本发明是这样实现的，该种黄苓良种繁育与栽培方法黄芩，所述黄芩良种繁育与栽培方法包括：黄芩成熟种子采收后，种子采收，黄芩果期7上旬～8月下旬，采收后先置于通风处晾1～2天，待种子继续熟化，然后晒干，脱粒，精选；

黄芩栽培选地整地、播种、田间管理、摘除花蕾、病虫害防治；采收加工，在栽培后第二年10月地上部分枯萎时采收。

进一步，所述黄芩良种繁育方法包括：

步骤一：选取品种；

步骤二：苗田环境选择；

步骤三：黄芩株高45～50cm，主茎2～3条上有多数侧枝，绿色，被毛；

步骤四：黄芩成熟种子采收后，精选色泽光亮、籽粒饱满的种子，纯度95％以上，千粒重1.93g以上，发芽率80％以上，干燥无杂质；

步骤五：苗田管理：选地整地、种子育苗、留种田管理、病虫害防治；

步骤六：种子采收，黄芩果期7上旬～8月下旬，果实呈淡棕色时采收，采收后先置于通风处晾1～2天，待种子继续熟化，然后晒干，脱粒，精选；

步骤七：包装贮藏，种子装布袋保存。

进一步，所述留种田管理包括：苗期管理、中耕除草、追肥、灌溉。

进一步，所述病虫害防治包括：防治原则、根腐病防治、叶枯病防治、白粉病防治、根结线虫防治。

进一步，所述黄芩良种栽培方法包括：

步骤一：选取品种；

步骤二：苗田环境；

步骤三：黄芩为多年生草本，株高45～50cm，茎较粗壮，主茎较明显，茎粗壮，主茎2～3条，其上有多数侧枝，绿色，被毛；

步骤四：选地整地、播种、田间管理、摘除花蕾、病虫害防治；

步骤五：采收加工，在栽培后第二年10月地上部分枯萎时采收，要深挖，取全根，避免伤根和断根，去除泥土及残茎，迅速晒干或者烘干；

步骤六：包装贮藏，包装材料采用干燥、清洁、无异味以及不影响品质的材料制成。

进一步，所述播种包括：直播、育苗移栽。

进一步，所述苗田管理：苗期管理、中耕除草、追肥、灌溉。

进一步，所述病虫害防治包括：防治原则、根腐病防治、叶枯病防治、白粉病防治、根结线虫防治。

综上所述，本发明的优点及积极效果为：“鲁芩1号”根较粗大，单一或中下部分为二枝，表面深棕色，皮孔横向，零星分布。纵皱纹细密。长23～29cm，直径1.5～2cm，断面深棕黄色，韧皮部面积较大，约占1/2。韧皮部与木质部颜色较相近。纤维性较强。质脆，易折断，断面鲜黄色，不平坦，略呈板片状。“鲁芩1号”有效成分黄芩苷含量高，2013、2014年经济南市药检所检测，黄芩苷平均含量为17.1％(2年生)和11.6％(1年生)，分别比对照增加22.7％和8.1％。

此外，本发明已经取得了济南市食品药品检测中心的药品检验报告，文件编号为jlo3-5.10-2012。

附图说明

图1是本发明实施例提供的黄芩良种繁育方法流程图。

图2是本发明实施例提供的黄芩良种栽培方法流程图。

图3是本发明实施例提供的不同种质黄芩的rapd鉴别流程图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

下面结合附图对本发明的应用原理作详细的描述。

用于种子生产的田块不重茬连作。种子田连片种植，与其他作物之间的距离要足够大。栽培田要肥沃，单粒稀植，提高繁殖系数。及时拔除田中的混杂株或突变株。原种在3月底播种，留种植株应是2～3年植株。次年的7月上旬到8月下旬，当果皮变淡棕色时分批采收，打下种子，在通风阴凉处干燥，存放于阴凉干燥处

如图1所示，本发明实施例提供的黄芩良种繁育方法包括：

s101：选取品种，鲁芩1号；

s102：苗田环境，“鲁芩1号”黄芩育苗地环境条件应符合水质、空气质量、土壤质量国家标准；

s103：品种特征，“鲁芩1号”黄芩为多年生草本，株高45～50cm，茎较粗壮，主茎较明显，茎粗壮，主茎2～3条，其上有多数侧枝，绿色，被毛；

s104：种子质量标准，“鲁芩1号”黄芩成熟种子采收后，精选色泽光亮、籽粒饱满的种子，纯度95％以上，千粒重1.93g以上，发芽率80％以上，干燥无杂质；

s105：苗田管理：选地整地、种子育苗、留种田管理、病虫害防治；

s106：种子采收，黄芩果期7上旬～8月下旬，果实呈淡棕色时采收，采收后先置于通风处晾1～2天，待种子继续熟化，然后晒干，脱粒，精选；

s107：包装贮藏，种子装布袋保存。

本发明实施例提供的“鲁芩1号”黄芩育苗地环境条件应符合以下规定：水质达到农田灌溉水质标准gb5084二级以上标准；大气环境达到环境空气质量标准gb3095二级以上标准；土壤达到土壤环境质量标准gb15618二级以上标准；

本发明实施例提供的留种田管理包括：苗期管理、中耕除草、追肥、灌溉；

本发明实施例提供的病虫害防治包括：防治原则、根腐病防治、叶枯病防治、白粉病防治、根结线虫防治。

“鲁芩1号”宜用种子繁殖，直播或育苗移栽均可。直播在3月下旬，按行距30～35cm，在垄上开1cm的浅沟直播。播前种子经催芽处理，每亩用种量0.5～0.8kg，覆盖地膜，10～15天出全苗。育苗移栽的在种子收获后的9月份播种，次年3月下旬到4月上旬移栽，按株距12cm定植于大田，栽培密度每亩10000株左右。出苗至封垄期间，除草3～4次。结合中耕及时间苗、定苗、补苗。生长期每年施n、p、k复合肥1～2次。雨季及时排水。栽后第二年10月下旬采收，深挖，取全根，去泥土及残茎，迅速晒干或烘干。

如图2所示，本发明实施例提供的黄芩良种栽培方法包括：

s201：选取品种，鲁芩1号；

s202：苗田环境，“鲁芩1号”黄芩育苗地环境条件应符合水质、空气质量、土壤质量国家标准；

s203：品种特征，“鲁芩1号”黄芩为多年生草本，株高45～50cm，茎较粗壮，主茎较明显，茎粗壮，主茎2～3条，其上有多数侧枝，绿色，被毛；

s204：栽培技术：选地整地、播种、田间管理、摘除花蕾、病虫害防治；

s205：采收加工，在栽培后第二年10月地上部分枯萎时采收，要深挖，取全根，避免伤根和断根，去除泥土及残茎，迅速晒干或者烘干；

s206：包装贮藏，包装材料采用干燥、清洁、无异味以及不影响品质的材料制成。

本发明实施例提供的“鲁芩1号”黄芩育苗地环境条件应符合以下规定：水质达到农田灌溉水质标准gb5084二级以上标准；大气环境达到环境空气质量标准gb3095二级以上标准；土壤达到土壤环境质量标准gb15618二级以上标准；

本发明实施例提供的播种包括：直播、育苗移栽；

本发明实施例提供的苗田管理：苗期管理、中耕除草、追肥、灌溉；

本发明实施例提供的病虫害防治包括：防治原则、根腐病防治、叶枯病防治、白粉病防治、根结线虫防治。

本发明提供的不同种质黄芩的rapd鉴别包括：

s301，采集不同种质的黄芩嫩叶，提取黄芩总染色体：摘取不同种质黄芩的幼嫩组织0.3g，在液氮中研磨成粉末状，加入预热至65℃的dna提取缓冲液(100mmoll-1tris×hcl，1.4moll-1nacl，20mmoll-1edta，2％(w/v)ctab，2％(v/v)2-巯基乙醇0.4％)，混匀，65℃温浴15min；放至室温，加入等体积氯仿：异戊醇(24:1)，混合，放置10min；4℃，12000rpm离心15min，回收上清液，加入1/10体积已预热至65℃的ctab/nacl溶液(10％ctab，0.7mnacl)，颠倒混匀。等体积氯仿：异戊醇(24:1)抽提，混匀，4℃，12000rpm离心15min，回收上清液。加入等体积的ctab沉淀液(1％(w/v)ctab，50mmoll-1tris×hcl，10mmoll-1edta，ph8.0)，4℃，3000rpm离心5min，弃上清，用高盐te缓冲液(10mmoll-1tris×hcl，1moll-1nacl，0.1mmoll-1edta)，重溶沉淀。加入2倍体积无水乙醇沉淀核酸，充分混匀，-20℃放置30min，4℃，12000rpm离心15min。弃上清，70％乙醇洗涤沉淀，室温干燥20min，用含有无dna酶的胰rna酶(20ml/ml)的te(ph8.0)重溶dna，4℃贮存。

s302，紫外分光光度法检测黄芩dna样品dna完整性：紫外分光光度法检测dna样品浓度，0.7％琼脂糖凝胶电泳检测dna完整性；

s303，采用适宜的rapd程序扩增，每个反应重复3次：采用25l反应体系，内含：ddh2o：19.4μl，10×easytaqdnapolymerasebuffer：2.5μl，模板：0.3μl，dntps：2μl，引物：0.3μl，easytaqdnapolymerase：0.5μl。反应条件为：95℃预变性10min，再进行40个循环：95℃变性1min，36℃退火1min，72℃延伸90s。35个循环后，72℃延伸10min。每个反应至少重复3次；

s304，电泳并照相，分析不同种质黄芩dna结果：采用琼脂糖凝胶电泳：电泳缓冲液为tris-醋酸缓冲液(tae)：40mmoll-1tris-hcl，2mmoll-1edta，20mmoll-1醋酸钠，ph8.0；1％(w/v)琼脂糖凝胶，含0.5mgl-1eb，85v电泳1.5h。电泳结束后浸于0.5μgml-1eb溶液中染色5～10min，在凝胶成像仪下观察并照相。

由于不同种质的黄芩在外观形态上比较相似，常规的鉴别方法对同种不同种质黄芩的准确鉴别难以凑效。目前，随着生物技术的日益发展和完善，新的分析和检测技术大量涌现，基于pcr技术的rapd、aflp、sst等生物技术越来越多地应用到种质鉴定、亲缘关系分析等众多领域。其中rapd是一种有效的分子标记方法，在亲缘关系很近的种质分析方面取得了良好效果。本发明采用rapd技术对不同种质的黄芩进行了分析，为黄芩种质的鉴定提供依据。

下面结合具体实施例对本发明进行进一步说明；

实施例1；

2012年区域试验中，2年生药材(干品)亩产平均592公斤，比对照莒县农家品种增产13.8％；2013年生产试验，1年生药材(干品)亩产平均340公斤，比对照莒县农家品种增产22％。

“鲁芩1号”栽培适应性较强，在抗病、抗逆等方面均较优良。本标准适用于山东地区“鲁芩1号”黄芩的生产。

表1山东蒙阴区试“鲁芩1号”产量与质量调查表

表2药材产量与品质测定

蒙阴区试结果显示，鲁芩1号生长发育期明显早于对照品种，开花及种子成熟提前9～10天。药材产量比对照品种增产9.7％，黄芩苷含量高于对照30.7％。

表3山东泰安区试“鲁芩1号”产量与质量调查表

表4药材产量与品质测定

泰安基地区试结果表明，鲁芩1号生长发育期比对照品种提前8天，产量比对照品种增产16.0％，黄芩苷含量高于对照25.9％。

通过山东3个区试点的栽培试验，证实“鲁芩1号”在植物抗性、药材产量与品质上均优于对照品种，结果见表5、6。

表5“鲁芩1号”区试药材(2年生)产量

表6“鲁芩1号”区试药材(2年生)主要有效成分黄芩苷含量

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。