一种铁皮石斛内生真菌的育苗方法与流程

本发明涉及种植栽培领域，特别涉及一种铁皮石斛种子的育苗方法。

背景技术：

铁皮石斛具有多种药用功效，其茎入药，属补益药中的补阴药：益胃生津，滋阴清热。历代医家都认为“铁皮石斛”具有滋养肝阴的作用，是治疗各种肝胆病的要药，可用于治疗肝炎、胆囊炎、胆结石等肝胆疾病。

铁皮石斛与菌根真菌存在着天然的共生关系，种子非常细小，是分化不完全的胚细胞，其内部不含胚乳，在自然条件下不能正常萌发,只有真菌与种子或根形成共生的菌根关系后，才能正常地萌发和生长发育。目前铁皮石斛种子萌发和育苗的传统方法是通过组培来完成，而组建一个可以运行的接种室和组培室是需要不少的成本投入来购买设备，并需要花上大量工时来完成培养基的制作、种子萌发后的分瓶培育等一系列工时。本发明的方法是一种简单快速、在正常环境中就可以完成种子的萌发和育苗，省去了用组培方法的设备和工时，极大的减少了铁皮石斛种苗的生产成本。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种铁皮石斛种子的培育方法，本发明的培育方法能很好的促进铁皮石斛种子的萌发和育苗，这可省去繁琐的人工组培的一系列工作及其产生的费用，具有显著的应用价值。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明利用铁皮石斛内生真菌菌肥培育铁皮石斛种子，使真菌与种子形成共生关系，从而不需要通过组培即可实现种子的萌发和育苗。

上述方法的具体步骤如下：

（1）种子采摘：将成熟的铁皮石斛果荚采摘后，轻轻用水冲洗果荚表皮，放在干净的白纸上于阴凉处晾干，直到果荚开裂，收集种子装于种子播撒器中；

（2）基质制备：将育苗基质泥炭土装入育苗盘的1/2-3/4处，再用内生真菌菌肥填满，整平，浇水至基质湿润；

（3）种子播种：轻轻摇动播撒器使石斛种子均匀播撒在基质表面，播撒完后盖上一层保鲜膜具有保湿效果并在保鲜膜上打若干个小洞；

（4）播后管理：播种后苗盘放置常温下的阴凉处即可，播种后第5天种子膨大转绿萌发（图1），保持表层育苗基质的含水量为30-35%，发芽后每20-30天喷雾一次过滤后的菌液液体，得初生石斛苗；

（5）炼苗：待初生石斛苗长至3片真叶，对初生石斛苗进行炼苗，连续炼苗15天，得到铁皮石斛苗（图2）。

所述步骤（4）中菌液液体的制备方法如下：用接种针从瘤菌根菌固体培养基上挑取0.7cm²的瘤菌根菌菌种，接入400ml的pda液体培养基中，28℃，200rpm培养10天后，用0.22μm滤膜过滤除去菌体，即得到菌液液体。

所述内生真菌菌肥的制备方法如下：

（1）用接种针从瘤菌根菌固体培养基上挑取0.7cm²的瘤菌根菌菌种，接入400ml的pda液体培养基中，28℃，200rpm培养10天，得到菌液；

（2）将泥炭土与pda液体培养基按照质量比2:1混合，灭菌，得到泥炭土混合物；

（3）将步骤（2）获得的泥炭土混合物与步骤（1）的菌液按质量比2：1混合，得到菌肥。

本发明的优点在于：目前铁皮石斛种子萌发和育苗的传统方法是通过组培来完成，而组建一个可以运行的接种室和组培室是需要不少的成本投入来购买设备，并需要花上大量工时来完成培养基的制作、种子萌发后的分瓶培育等一系列工时。本发明的方法是一种简单快速、在正常环境中就可以完成种子的萌发和育苗，省去了用组培方法的设备和工时，极大的减少了铁皮石斛种苗的生产成本。

附图说明

图1为播种后第5天种子膨大转绿萌发。

图2为铁皮石斛苗。

具体实施方式

实施例1

1、瘤菌根菌固体培养基的制备

将瘤菌根菌接入pda培养基中，该pda培养基的制备为：将马铃薯去皮，称取200g切成小块，放入1000ml水中煮烂捣碎，用四层纱布过滤，滤液加入20g葡萄糖和10g琼脂粉，定容至1000ml，分装灭菌，冷却后倒入无菌的培养皿中，每皿20ml。

2、制备内生真菌菌肥

（1）用接种针从瘤菌根菌固体培养基上挑取0.7cm²的瘤菌根菌菌种，接入400ml的pda液体培养基中，28℃，200rpm培养10天，得到菌液；

（2）将泥炭土与pda液体培养基按照质量比2:1混合，灭菌，得到泥炭土混合物；

（3）将步骤（2）获得的泥炭土混合物与步骤（1）的菌液按质量比2：1混合，得到菌肥。

3、制备菌液液体

用接种针从瘤菌根菌固体培养基上挑取0.7cm²的瘤菌根菌菌种，接入400ml的pda液体培养基中，28℃，200rpm培养10天后，用0.22μm滤膜过滤除去菌体，即得到菌液液体。

4、铁皮石斛育苗

（1）种子采摘：将成熟的铁皮石斛果荚采摘后，轻轻用水冲洗果荚表皮，放在干净的白纸上于阴凉处晾干，直到果荚开裂，收集种子装于种子播撒器中；

（2）基质制备：将育苗基质泥炭土装入育苗盘的2/3处，再装入1/3的内生真菌菌肥，整平，浇水至基质湿润；

（3）种子播种：在播撒器中装入10颗石斛果荚的种子，轻轻摇动播撒器使石斛种子均匀播撒在基质表面，播撒完后盖上一层保鲜膜具有保湿效果并在保鲜膜上打若干个小洞；

（4）播后管理：播种后苗盘放置常温下的阴凉处即可，播种后第5天种子膨大转绿萌发，保持表层育苗基质的含水量为30-35%，发芽后每30天喷雾一次过滤后的菌液液体，得初生石斛苗；

（5）炼苗：待初生石斛苗长至3片真叶，对初生石斛苗进行炼苗，连续炼苗15天，得到铁皮石斛苗，计算得到发芽率为95%，成活率为90%。

实施例2

1、瘤菌根菌固体培养基的制备

将瘤菌根菌接入pda培养基中，该pda培养基的制备为：将马铃薯去皮，称取200g切成小块，放入1000ml水中煮烂捣碎，用四层纱布过滤，滤液加入20g葡萄糖和10g琼脂粉，定容至1000ml，分装灭菌，冷却后倒入无菌的培养皿中，每皿20ml。

2、制备内生真菌菌肥

（1）用接种针从瘤菌根菌固体培养基上挑取0.7cm²的瘤菌根菌菌种，接入400ml的pda液体培养基中，28℃，200rpm培养10天，得到菌液；

（2）将泥炭土与pda液体培养基按照质量比2:1混合，灭菌，得到泥炭土混合物；

（3）将步骤（2）获得的泥炭土混合物与步骤（1）的菌液按质量比2：1混合，得到菌肥。

3、制备菌液液体

用接种针从瘤菌根菌固体培养基上挑取0.7cm²的瘤菌根菌菌种，接入400ml的pda液体培养基中，28℃，200rpm培养10天后，用0.22μm滤膜过滤除去菌体，即得到菌液液体。

4、铁皮石斛育苗

（1）种子采摘：将成熟的铁皮石斛果荚采摘后，轻轻用水冲洗果荚表皮，放在干净的白纸上于阴凉处晾干，直到果荚开裂，收集种子装于种子播撒器中；

（2）基质制备：将育苗基质泥炭土装入育苗盘的1/2处，再装入1/2的内生真菌菌肥，整平，浇水至基质湿润；

（3）种子播种：在播撒器中装入10颗石斛果荚的种子，轻轻摇动播撒器使石斛种子均匀播撒在基质表面，播撒完后盖上一层保鲜膜具有保湿效果并在保鲜膜上打若干个小洞；

（4）播后管理：播种后苗盘放置常温下的阴凉处即可，播种后第5天种子膨大转绿萌发，保持表层育苗基质的含水量为30-35%，发芽后每30天喷雾一次过滤后的菌液液体，得初生石斛苗；

（5）炼苗：待初生石斛苗长至3片真叶，对初生石斛苗进行炼苗，连续炼苗15天，得到铁皮石斛苗，计算得到发芽率为87%，成活率为90%。

实施例3

1、瘤菌根菌固体培养基的制备

将瘤菌根菌接入pda培养基中，该pda培养基的制备为：将马铃薯去皮，称取200g切成小块，放入1000ml水中煮烂捣碎，用四层纱布过滤，滤液加入20g葡萄糖和10g琼脂粉，定容至1000ml，分装灭菌，冷却后倒入无菌的培养皿中，每皿20ml。

2、制备内生真菌菌肥

（1）用接种针从瘤菌根菌固体培养基上挑取0.7cm²的瘤菌根菌菌种，接入400ml的pda液体培养基中，28℃，200rpm培养10天，得到菌液；

（2）将泥炭土与pda液体培养基按照质量比2:1混合，灭菌，得到泥炭土混合物；

（3）将步骤（2）获得的泥炭土混合物与步骤（1）的菌液按质量比2：1混合，得到菌肥。

3、制备菌液液体

用接种针从瘤菌根菌固体培养基上挑取0.7cm²的瘤菌根菌菌种，接入400ml的pda液体培养基中，28℃，200rpm培养10天后，用0.22μm滤膜过滤除去菌体，即得到菌液液体。

4、铁皮石斛育苗

（1）种子采摘：将成熟的铁皮石斛果荚采摘后，轻轻用水冲洗果荚表皮，放在干净的白纸上于阴凉处晾干，直到果荚开裂，收集种子装于种子播撒器中；

（2）基质制备：将育苗基质泥炭土装入育苗盘的3/4处，再装入1/4的内生真菌菌肥，整平，浇水至基质湿润；

（3）种子播种：在播撒器中装入10颗石斛果荚的种子，轻轻摇动播撒器使石斛种子均匀播撒在基质表面，播撒完后盖上一层保鲜膜具有保湿效果并在保鲜膜上打若干个小洞；

（4）播后管理：播种后苗盘放置常温下的阴凉处即可，播种后第5天种子膨大转绿萌发，保持表层育苗基质的含水量为30-35%，发芽后每20天喷雾一次过滤后的菌液液体，得初生石斛苗；

（5）炼苗：待初生石斛苗长至3片真叶，对初生石斛苗进行炼苗，连续炼苗15天，得到铁皮石斛苗，计算得到发芽率为91%，成活率为89%。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。