本发明涉及植物组织培养技术领域，具体来说，涉及一种紫花三叉白芨组培快繁培养基及方法。
背景技术：
白芨为兰科白芨属多年生草本球根植物,别名良姜、白根、白及、紫兰、连及草、甘根等,干燥根入药,性苦、甘、涩,微寒,归肺、肝、胃经。主治:收敛止血,消肿生肌；用于咳血吐血,外伤出血,疮疡肿毒,皮肤皲裂；肺结核咳血,溃疡病出血等。此外,白芨还有很高的观赏价值与经济价值。
白芨种子萌发率与成活率低、生长缓慢,加之用途广泛、需求量大,目前人工繁育主要为块茎切块繁殖,繁殖系数低不易于大规模生产，因此难以满足市场的需求。
针对相关技术中的问题，目前尚未提出有效的解决方案。
技术实现要素：
针对相关技术中的上述技术问题，本发明提出一种紫花三叉白芨组培快繁培养基及方法，能够解决上述技术问题。
为实现上述技术目的，本发明的技术方案是这样实现的：
一种紫花三叉白芨组培快繁方法，包括以下步骤：
s1.种子萌发：将紫花三叉白芨蒴果进行清洗、消毒、杀菌后，将紫花三叉白芨蒴果内种子撒到ms基础培养基上，促使发芽；
s2.丛生芽诱导培养:待紫花三叉白芨子叶展开以后,分单株转接在丛生芽诱导培养基上诱导出丛生芽；
s3.增殖培养：将紫花三叉白芨丛生芽在超净工作台上分离成单株,转接在增殖培养基上进行增殖培养，培养30-40天；
s4.生根培养：将生长长度为2-3cm的紫花三叉白芨苗转接在生根培养基上进行生根诱导。
进一步地，丛生芽诱导培养基的配方为：ms基础培养基，0.1mg/l噻苯隆,0.1mg/l萘乙酸。
进一步地，所述增殖培养基的配方为：ms基础培养基，1.2mg/l6-苄氨基腺嘌呤,0.5mg/l萘乙酸。
进一步地，所述生根培养基的配方为：ms基础培养基，1.2mg/l6-苄氨基腺嘌呤,0.5mg/l萘乙酸，0.2g/l活性炭。
进一步地，每升培养基中加蔗糖30g，琼脂5.8g，ph值调至5.80-5.90，在121℃下灭菌20min，光照2000lx下培养12h，培养温度为24±2℃，其中所述培养基包括丛生芽诱导培养基、增殖培养基、生根培养基。
进一步地，步骤s1所述清洗、消毒、杀菌的具体步骤为：挑选成熟饱满且无虫眼完整的紫花三叉白芨蒴果,洗洁精清洗干净后,75％酒精消毒30s,无菌蒸馏水冲洗3次,0.1％升汞震摇8-18min,无菌蒸馏水冲洗4-6次,5min/次,用灭菌纸吸干蒴果皮上的多余水分。
进一步地，步骤s4所述在生根培养基上进行生根诱导后，培养20天后,转接在无糖盒中进行无糖生根或培养40天后，放置在温室先进行不开盖练苗15天，再开盖练苗至少15天后移栽至穴盘。
进一步地，用以下步骤代替步骤s4：将步骤s3得到的增殖苗大小分级后，转接到无糖培养盒中，接种完以后用保鲜膜密封5个自然通气孔，只保留容器本身的1个自然透气孔进行气体交换，待紫花三叉大白芨苗长约为5-8cm后逐个揭开其余5个自然通气孔进行气体交换，7天后往培养容器内通co2气体，25-35天后，出苗移栽。
一种紫花三叉白芨组培快繁培养基，包括丛生芽诱导培养基、增殖培养基、生根培养基；其中，
丛生芽诱导培养基的配方为：ms基础培养基，0.1mg/l噻苯隆,0.1mg/l萘乙酸；
增殖培养基的配方为：ms基础培养基，1.2mg/l6-苄氨基腺嘌呤,0.5mg/l萘乙酸；
生根培养基的配方为：ms基础培养基，1.2mg/l6-苄氨基腺嘌呤,0.5mg/l萘乙酸，0.2g/l活性炭。
本发明的有益效果：通过以紫花三叉白芨蒴果作为外植体进行消毒，可降低消毒过程中对种子的直接伤害，调整灭菌时间可降低污染率提高成活率；合理的培养基配方，提高发芽率与成活率，加快繁殖，不仅加快了规模化的生产速度，还提高了紫花三叉白芨生产质量，解决紫花三叉白芨市场供不应求的现状。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
一种紫花三叉白芨组培快繁方法，包括以下步骤：
s1.种子萌发：挑选成熟饱满且无虫眼完整的紫花三叉大白芨蒴果,洗洁精清洗干净后,75％酒精消毒30s,无菌蒸馏水冲洗3次,0.1％升汞震摇8-18min,无菌蒸馏水冲洗4-6次,5min/次,用灭菌纸吸干蒴果皮上的多余水分,剪刀在蒴果的一端剪口后用镊子夹蒴果将种子抖落在ms养基和培养液上培养20-30d。待紫花三叉白芨种子发芽(培养基翠绿)以后，生长空间不足、部分上部的胚芽吸收不到底部营养，所以将其转入ms培养基上继续培养20-30天。每升培养基中加蔗糖30g，琼脂5.8g，ph值调至5.80-5.90之间，在121℃下灭菌20min(以下培养基均同此处理)，光照下培养(12h，2000lx)，培养温度为24±2℃(下同)。以紫花三叉白芨蒴果作为外植体进行消毒，可降低消毒过程中对种子的直接伤害，调整灭菌时间可降低污染率提高成活率。
s2.丛生芽诱导培养:待紫花三叉白芨子叶展开以后，即长0.3-0.8cm时,分单株转接在丛生芽诱导培养基上，接10瓶，每瓶接14株,3次重复，丛生芽诱导培养基的配方为：ms基础培养基，0.1mg/l噻苯隆,0.1mg/l萘乙酸，培养15天后明显诱导出丛生芽，30天后丛生芽可达4倍以上；
s3.增殖培养：将紫花三叉白芨丛生芽在超净工作台上分离成单株,转接在增殖培养基上进行增殖培养，增殖培养基的配方为：ms基础培养基，1.2mg/l6-苄氨基腺嘌呤,0.5mg/l萘乙酸，接10瓶，每瓶接10株,3次重复，培养30-40天，增殖倍数高、周期短、增殖苗长势好；
s4.生根培养：生根培养分为两种方式，一种是将生长长度为2-3cm的紫花三叉白芨苗转接在加了活性炭的生根培养基上,增殖的同时进行生根诱导，生根培养基的配方为：ms基础培养基，1.2mg/l6-苄氨基腺嘌呤,0.5mg/l萘乙酸，0.2g/l活性炭。培养20d以后,可转接在无糖盒中进行无糖生根，也可培养40天以后，放置在温室先进行不开盖练苗15天，再开盖练苗15天以上后移栽至穴盘。
另一种是无糖培养生根方法，将步骤s3得到的增殖苗大小分级后，转接到无糖培养盒中，接种完以后用保鲜膜密封5个自然通气孔，只保留容器本身的1个自然透气孔进行气体交换，待紫花三叉大白芨苗长约为5-8cm后逐个揭开其余5个自然通气孔进行气体交换，7天后往培养容器内通co2气体，25-35天后，出苗移栽。移栽前无需长时间练苗，1-3天即可。
生根培养基与无糖培养生根相结合，大大缩短了生根练苗的天数，且无糖组培半封闭式培养环境完善了叶片功能，提高了紫花三叉白芨组培苗的光合作用能力，继而提高了移栽成活率。
ms基础培养基，所含有的组分及含量如表1：
表1ms基础培养基
按照实施例的方法栽培紫花三叉白芨，改变其中0.1％升汞震摇灭菌的时间，时间分别设置为8min、12min、15min和18min，检测不同灭菌时间对紫花三叉白芨种子污染率与存活率的影响，结果如表2所示。
表2不同消毒时间对种子污染率与存活率的影响
从表2可以分析得到，到升汞灭菌时间18分钟，存活率开始有下降的趋势，污染率保持与灭菌15分钟的效果一直，所以升汞灭菌时间保持在8-18分钟，可以既保持高的存活率又可以保持最低的污染率。
按照实施例的方法栽培紫花三叉白芨，改变其中丛生芽诱导培养基的配方，同时做8组实验，8组实验分别采用不同的丛生芽诱导培养基配方如表3所示，对比8组实验培养后的丛生芽数量及增殖率，结果如表4所示。
表38组实验对应的丛生芽诱导培养基配方
表4不同培养基配方对丛生芽诱导的影响
其中，“根基部发黑++”中的“+”代表发黑程度，“+”越多代表根基部发黑情况越严重。
从表4分析可知，采用丛生芽诱导培养基的配方为：ms基础培养基，0.1mg/l噻苯隆,0.1mg/l萘乙酸培养的紫花三叉白芨总从生芽数及增殖率最好，并且植株呈深绿、丛生芽健壮、有根，根基部无发黑现象。
将步骤s1中，种子分别撒在ms基础培养基和ms营养液中，对比种子的成活率与畸形苗的概率，实验结果显示，将种子撒在ms基础培养基可显著提高种子的成活率同时降低畸形苗的概率。
综上所述，借助于本发明的上述技术方案，通过以紫花三叉白芨蒴果作为外植体进行消毒，可降低消毒过程中对种子的直接伤害，调整灭菌时间可降低污染率提高成活率；合理的培养基配方，提高发芽率与成活率，加快繁殖，不仅加快了规模化的生产速度，还提高了紫花三叉白芨生产质量，解决紫花三叉白芨市场供不应求的现状。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。