本发明属于植物繁殖技术领域，涉及组织培养育苗技术，具体涉及一种河北杨组培苗微枝试管外生根方法。
背景技术：
河北杨（学名：populushopeiensishuetchow）是杨柳科杨属植物，乔木，高达30米。树皮黄绿色至灰白色，光滑；树冠圆大。叶卵形或近圆形，长3-8厘米，宽2-7厘米。雄花序长约5厘米，花序轴被密毛；雌花序长3-5厘米。蒴果长卵形，有短柄。花期4月，果期5-6月。
分布于华北、西北各省区，为河北省山区常见杨树之一，各地有栽培，多生长于海拔700-1600米的河流两岸、沟谷阴坡及冲积阶地上。
木材可供建筑、农具、箱板等用，做蒸笼材更为合适。为华北、西北黄土丘陵峁顶、梁坡、沟谷及沙滩地的水土保持或用材林造林树种。也为庭院、行道优良树种。
河北杨组培苗在常规的试管外生根培养过程中，存在移栽效率低和生根率低的技术问题，常规培养操作仅能保持78%左右的生根率。
技术实现要素：
本发明的目的是针对现有技术中存在的不足，提供一种可提高移栽效率和生根率的河北杨组培苗微枝试管外生根方法。
为实现上述目的本发明采用的技术方案是：
一种河北杨组培苗微枝试管外生根方法，包括以下步骤：
a、外植体建立：优选干型通直、生长健壮、无病虫害的优良株系一年生休眠枝条，处理后接种到芽诱导培养基中进行培养，用以形成嫩茎；
b、增殖培养；将诱导的嫩茎剪段转接入培养基中进行诱导丛枝分化，增殖培养产生微枝；
c、壮苗培养；将嫩茎剪成1.5~2cm小段，接入培养基中进行培养，30d后多数试管苗微枝长到3~5条根以上；
d、打顶促茎炼苗；在河北杨组培苗微枝繁殖到所需生产量时，在超净台上，将组培苗顶芽剪取，将打破顶端优势的组培苗继续盖好瓶盖后转移到炼苗环境中边炼苗边培养，炼苗时间控制在10天左右，等到新顶芽形成，茎干粗壮，叶片加厚，颜色浓绿，苗木健壮整齐时开瓶盖，剪取粗壮微枝，剪取微枝时使组培苗基部留1-2个芽；
e、促生菌蘸根移栽；将高5cm左右的河北杨粗壮微枝，用镊子轻轻夹取，基部1-2厘米速蘸植物促生菌营广宝原液，再扦插入用63#育苗穴盘装丹麦品氏育苗基质中进行移栽，在智能温室条件下，相对湿度控制在85%左右，光照控制制在1000lx，温度控制在25℃左右生根培养；
f、喷施二氧化碳捕集剂培养；移栽完河北杨组培苗保湿到相对湿度85%，喷施1000倍液二氧化碳捕集剂-光碳核肥，形成河北杨组培苗良好气体环境，以后每15天喷施一次，每天早晨通风换气20分钟；控制光照8000lx逐步提高至15000lx。
进一步，所述步骤d中，剪取的顶芽接种在需要生根出苗培养基1/2ms+iba0.5+蔗糖15g/l+琼脂5%g/l中进行培养。
进一步，所述步骤d中，基部留有1-2个芽的组培苗试管内添加适量无菌液体培养基1/2ms+iaa0.5继续盖瓶盖培养。
河北杨组培苗微枝炼苗移栽生根中，组培苗顶端幼嫩、微枝在清洗基部粘连培养基时易受损折断、在移栽培养中易萎蔫、易滋生菌类导致炼苗失败，而本发明在步骤d中剪取组培苗顶芽并对失去顶端优势的组培苗进行培养，这样利于获得整齐的苗木，培养后的组培苗剪取微枝时使组培苗基部留1~2个芽，这样剪取的微枝无根系，相较于常规操作不存在清理基部培养基操作，且移栽生根前微枝只形成顶芽，不展幼叶，没有嫩茎、嫩尖，炼苗移栽损伤率小，利于移栽效率的提高；在步骤e中对组培苗顶芽采用速蘸植物促生菌营广宝原液操作，其利于组培苗微枝迅速生根生长和防治其他菌类滋生感染，形成保护优势的定植菌和促生菌；在步骤f中对组培苗采用喷施二氧化碳捕集剂按操作，其利于抑制暗呼吸，促进光呼吸，并形成较高浓度无糖培养二氧化碳气体环境，其不利于菌类和虫害滋生，使植物组培苗微枝有充分的光合环境，促进植物光合产物的充分形成，利于将养分输送到基部，促进生根和植株的进一步发育生长，达到以叶促根的目的，促进生根率的提高。
本发明步骤d中将剪取的顶芽接种在需要生根出苗培养基中进行培养，这样可利用顶芽脱毒效果好的特点，实现下在一代培养中获得高质量组培苗。
本发明步骤d中将基部留有1-2个芽的组培苗试管内添加适量无菌液体培养基1/2ms+iaa0.5继续盖瓶盖培养，这样可通过留有的芽继续形成微枝，并在步骤d的操作下快速获得可移栽微枝，该操作可在再次需要获取组培苗时，无需再次进行接种操作，利于节省获取组培苗操作时间。
具体实施方式
以下结合具体操作对本发明做进一步说明：
一种河北杨组培苗微枝试管外生根方法，包括以下步骤：
a、外植体建立：优选干型通直，生长健壮，无病虫害的优良株系一年生休眠枝条，自来水冲洗20min，剪段带1个芽。在超净工作台上，用75%的酒精浸泡20s，再置于0.1%升汞溶液中消毒15min，然后用无菌水冲洗5次，用消毒滤纸吸干茎段表面水分；接种到芽诱导培养基ms+6-ba0.5mg.l-1光照培养30d后，可有嫩茎形成。
b、增殖培养；1个月后，将诱导的嫩茎剪段转接入培养基ms+6-ba0.3+naa0.05中，约20d后丛生芽产生，40d后，有5～6个芽体长至5～6cm，此时可转瓶剪段在培养基ms+6-ba0.3+naa0.05中继续扩繁。
c、壮苗培养；将嫩茎剪成1.5~2cm小段，接入培养基1/2ms+iaa0.5中进行培养，约30d后多数试管苗3~5条根以上。
d、打顶促茎炼苗；在河北杨组培苗微枝繁殖到所需生产量时，在超净台上，将顶芽剪取，将打破顶端优势的组培苗继续盖好瓶盖后转移到炼苗环境中边炼苗边培养，最好换用透气盖培养，1～5d置于设有两个灯管的5000lx光照培养条件下，培养6～10d置于设有三个灯管的8000lx光照条件下进行培养，炼苗时间控制在10天左右，等到新顶芽形成，茎干粗壮，叶片加厚，颜色浓绿，苗木健壮整齐时开瓶盖，剪取粗壮微枝，剪取微枝时使位于培养基中的组培苗基部留1-2个芽，剪取的微枝可用于移栽；剪取后的顶芽接种在需要生根出苗培养基1/2ms+iba0.5+蔗糖15gl-1+琼脂5%gl-1中，培养基ph6.0，培养温度23～25℃，光照时间12h.d-1，光照强度40umol.m-2.s-1，顶芽脱毒效果好，培养后利于获得高质量的组培苗，组培苗可继续去顶芽操作后再获得移栽微枝；剪取微枝后的试管添加适量无菌液体培养基1/2ms+iaa0.5继续盖瓶盖培养，基部留有的1-2个芽可继续培养形成新的微枝，在需要获得新的微枝进行移栽时，该操作无需进行接种操作，可快速获得移栽微枝，利于节约时间。
e、促生菌蘸根移栽；将剪取的高5cm左右的河北杨粗壮微枝，用镊子轻轻夹取，基部1-2厘米速蘸植物促生菌营广宝原液，再扦插入用63#育苗穴盘装丹麦品氏育苗基质中进行移栽，在智能温室条件下中，相对湿度控制在85%左右，光照控制制在1000lx，温度控制在25℃左右生根培养，速蘸营广宝原液利于试管苗微枝迅速生根生长和防治其他菌类滋生感染，形成保护优势的定植菌和促生菌。
f、喷施二氧化碳捕集剂培养；移栽完河北杨组培苗保湿到相对湿度85%，喷施1000倍液二氧化碳捕集剂-光碳核肥，形成河北杨组培苗良好气体环境，以后每15天喷施一次，每天早晨通风换气20分钟。控制光照8000lx逐步提高至15000lx,加速提高河北杨组培苗微枝光合自养能力，促进生根，形成完整植株；移栽后喷施二氧化碳捕集剂，利于叶片进行光合作用，创造高浓度二氧化碳微枝周围空气环境，抑制有氧呼吸菌类和虫害，利用河北杨试管苗微枝气孔闭合差的有利条件，利于让捕集二氧化碳的小球藻通过气孔，促进二氧化碳捕集，达到或接近饱和，促进河北杨微枝叶片光合作用，产生光合产物，输送养分，这样从根部、茎部、叶片都保障了试管苗不受外界其他菌类侵染，同时创造了良好的光合环境，利于植株迅速生根生长。这样培养的河北杨组培苗猝倒病和根癌病的几率大大降低，促进了生根率的提高。
采用本发明方法，实践中生产河北杨组培苗52万株，实际生根存活49.6万株以上，平均生根率可提高到95%以上；常规移栽操作过程中每个人平均处理组培苗在800株左右，采用本方法可以提升到1700株以上，生产中移栽效率比原来提高45%以上，且苗木整齐健壮，商品性好；本发明方法全程不使用杀菌杀虫剂和植物生长调节剂，绿色环保无污染，可保护生态环境。