一种杂交建兰瓶内开花的培养方法与流程

本发明涉及植物培养
技术领域：
，具体来说是一种杂交建兰瓶内开花的培养方法。
背景技术：
：建兰是地生植物，生于疏林下、灌丛中、山谷旁或草丛中，海拔600-1800米。产于中国安徽、浙江、江西、福建、台湾、湖南、广东、海南、广西、四川西南部、贵州和云南，广泛分布于东南亚和南亚各国，北至日本。兰花在自然条件下繁殖率极低且开花较困难，因此试管开花也越来越多地运用到兰花培养中去。申请公布号为cn106171983a的中国发明专利公开了一种建兰试管开花的培养方法，包括以下步骤：(1)材料初选：选取无病虫害长势良好的建兰试管苗，试管苗高为3～6cm，根3～6条，叶2～3片；(2)预培养：将选取后的建兰试管苗放置在初代培养基中进行培养，培养时间为50～60d，培养温度为22～25℃，光照时间为14h/d，光照强度为1600～2000lx，每10天更换一次初代培养基，所述初代培养基为：ms+1～3mg/l6-ba+0.1～0.2mg/lnaa+28～32g/l蔗糖+5～9g/l琼脂+0.1～0.2g/l活性炭；（3）花芽诱导预处理：选取预培养后生长一致、长势健康、无虫害污染的建兰苗株放置在预培养基中进行预培养，培养时间为22～27d，培养温度为22～25℃，光照时间为14h/d，光照强度为1600～2000lx，所述预培养基为：ms+2～4mg/lpp333+28～32g/l蔗糖+5～9g/l琼脂+0.1～0.2g/l活性炭；(4)诱导开花：对花芽诱导预处理后的苗株根部进行修剪，然后放置在诱导开花培养基中进行培养，培养时间为100～120d，培养温度为22～25℃，光照时间为14h/d，光照强度为1600～2000lx，每30天更换一次诱导开花培养基，所述诱导开花培养基为：ms+0.3～0.5mg/ltdz+0.1～0.2mg/l2，4-d+0.8～1.2mg/lzt+28～32g/l蔗糖+5～9g/l琼脂+0.1～0.2g/l活性炭。该培养方法通过tdz、2，4-d和zt之间的组合，能够促进花芽的形成，花芽形成较快且花芽开放正常、花期长，长势良好，虽然可提高试管开关诱导率，但其变异性大。而且该专利直接以试管苗作为试管开花的培养材料，而优良形状的试管苗筛选时间通常需要5个月甚至更长时间。技术实现要素：本发明提供一种杂交建兰瓶内开花的培养方法，其主要目的在于克服现有建兰试管开花培养方法诱导开花的变异性大、试管苗筛选时间长等缺陷。本发明采用如下技术方案：一种杂交建兰瓶内开花的培养方法，包括以下步骤：（1）材料选取与处理：选取大且饱满的建兰杂交果荚，采用0.1%升汞浸泡消毒处理，并用硫代硫酸钠中和升汞残液；（2）果荚播种：将处理好的果荚切开、接种到初代培养基，并放置在培养室培养，培养室温度为22±2℃，暗光下培养至4～6个月，所述初代培养基为：1/2ms+naa0.5～0.7mg/l+6-ba0.1～0.2mg/l+abt0.1～0.2mg/l+白砂糖25g/l+活性炭0.3～0.5g/l+蛋白胨1～3g/l+卡拉胶7～8g/l；（3）增值培养：选取步骤（2）中长势健康的龙根转接至增殖培养基继续进行培养，培养室温度22±2℃，光照强度为2000～2200lx，光照时间为8～10h/d；（4）生根培养：增殖培养3～4个月后转至生根培养基中继续培养，培养室温度22±2℃，光照强度为2000～2200lx，光照时间为10～14h/d；（5）诱导开花培养：生根培养2～3个月后转至诱导开花培养基中培养3～5个月，培养室温度22±2℃，光照强度为2000～2200lx，光照时间为8～10h/d，所述诱导开花培养基为：1/2ms+naa0.2mg/l+6-ba0.5mg/l+花宝2号1～3g/l+kh2po40.3～0.8g/l+白砂糖25g/l+活性炭0.5g/l+蛋白胨1～3g/l+卡拉胶7～8g/l。具体地，所述建兰杂交果荚为明玉与晶龙奇蝶的杂交果荚。进一步地，所述步骤（3）中增值培养基为：1/2ms+naa0.2～0.5mg/l+6-ba3～5mg/l+白砂糖30g/l+活性炭0.3g/l+蛋白胨1～3g/l+卡拉胶7～8g/l。进一步地，所述步骤（4）中生根培养基为：1/2ms+naa0.8～1mg/l+6-ba0～0.5mg/l+白砂糖25g/l+活性炭0.5g/l+蛋白胨1～3g/l+卡拉胶7～8g/l。进一步地，所述初代培养基、所述增值培养基、所述生根培养基、所述诱导开花培养基中均添加有核黄素。进一步地，所述初代培养基、所述增值培养基、所述生根培养基以及所述诱导开花培养基的ph值均调节至5.4～5.6。由上述对本发明的描述可知，本发明杂交建兰瓶内开花的培养方法的优点在于：1、本发明采用杂交种子直接播种在培养基中进行培养，然后促其开花，可在瓶内直接观察到杂交后代性状的分离情况，大大缩短了优良性状的筛选时间。而且直接采用种子播种组培，其操作性更强，大大缩短了培育筛选时间。2、本发明的诱导开花培养基中添加了kh2po4，其中p离子的浓度为0.3～0.8g/l，可较大程度地促进了花芽的诱导，花芽诱导率达80%～90%。3、本发明的所有培养基均不添加香蕉、土豆和椰子汁等添加物，而是以蛋白胨浓度1～3g/l来代替，减少了培养基配制的工作量，降低了培养基成本，同时也减少了污染率。附图说明图1为本发明诱导开花培养中处理号f的开花图。具体实施方式以下结合实施例对本发明作详细说明。本发明的杂交建兰瓶内开花的培养方法，包括以下步骤：1、材料选取与处理：选取大且饱满的建兰杂交果荚，采用0.1%升汞浸泡消毒处理，并用硫代硫酸钠中和升汞残液。其中，建兰杂交果荚为明玉与晶龙奇蝶的杂交果荚。2、果荚播种：将处理好的果荚切开、接种到初代培养基，并放置在培养室培养，所述初代培养基为：1/2ms+naa0.5～0.7mg/l+6-ba0.1～0.2mg/l+abt0.1～0.2mg/l+白砂糖25g/l+活性炭0.3～0.5g/l+蛋白胨1～3g/l+卡拉胶7～8g/l，ph值5.4～5.6。培养条件：培养室温度为22±2℃，暗光下培养4～6个月。表1不同初代培养基对果荚萌发的影响处理号培养基播种数（瓶）萌发时间（天）11/2ms+naa0.5mg/l+6ba0.1mg/l+abt0.1mg/l+白砂糖25g/l+活性炭0.3g/l+蛋白胨1g/l+卡拉胶7g/l2011021/2ms+naa0.5mg/l+6ba0.2mg/l+abt0.1mg/l+白砂糖25g/l+活性炭0.4g/l+蛋白胨2g/l+卡拉胶7.5g/l2011231/2ms+naa0.6mg/l+6-ba0.1mg/l+abt0.1mg/l+白砂糖25g/l+活性炭0.4g/l+蛋白胨2g/l+卡拉胶7g/l2012041/2ms+naa0.6mg/l+6-ba0.2mg/l+abt0.2mg/l+白砂糖25g/l+活性炭0.4g/l+蛋白胨2g/l+卡拉胶7g/l2010051/2ms+naa0.7mg/l+6-ba0.1mg/l+abt0.2mg/l+白砂糖25g/l+活性炭0.5g/l+蛋白胨3g/l+卡拉胶8g/l2010861/2ms+naa0.7mg/l+6-ba0.2mg/l+abt0.2mg/l+白砂糖25g/l+活性炭0.5g/l+蛋白胨3g/l+卡拉胶8g/l2011071/2ms+naa0.5mg/l+6-ba0.1mg/l+白砂糖25g/l+活性炭0.3g/l+蛋白胨1g/l+卡拉胶7g/l2015081/2ms+naa0.6mg/l+6-ba0.2mg/l+白砂糖25g/l+活性炭0.4g/l+蛋白胨2g/l+卡拉胶7g/l2016591/2ms+naa0.7mg/l+6-ba0.1mg/l+白砂糖25g/l+活性炭0.5g/l+蛋白胨3g/l+卡拉胶8g/l20160从表1来看，建兰果荚在处理号4的培养基上相对较早萌发，100天观察时就有很漂亮的龙根，在处理号7、8、9上相对较迟，要五个多月左右，而其它有添加abt的处理号上建兰果荚的萌芽时间与处理号4相差不是很大。由此可以看出，abt对建兰果荚的萌发还是有较大的影响的，它能促使建兰果荚里的种子更早的萌发。3、增值培养选取步骤（2）中长势健康的龙根转接至增殖培养基继续进行培养。增值培养基为：1/2ms+naa0.2～0.5mg/l+6-ba3～5mg/l+白砂糖30g/l+活性炭0.3g/l+蛋白胨1～3g/l+卡拉胶7～8g/l。培养条件：培养室温度22±2℃，光照强度为2000～2200lx，光照时间为8～10h/d，光源为日光灯，培养3～4个月。4、生根培养增殖培养3～4个月后转至生根培养基中继续培养。生根培养基为：1/2ms+naa0.8～1mg/l+6-ba0～0.5mg/l+白砂糖25g/l+活性炭0.5g/l+蛋白胨1～3g/l+卡拉胶7～8g/l。培养条件：培养室温度22±2℃，光照强度为2000～2200lx，光照时间为10～14h/d，光源为日光灯，培养2～3个月。5、诱导开花培养：生根培养2～3个月后转至诱导开花培养基中培养3～5个月，所述诱导开花培养基为：1/2ms+naa0.2mg/l+6-ba0.5mg/l+花宝2号1～3g/l+kh2po40.3～0.8g/l+白砂糖25g/l+活性炭0.5g/l+蛋白胨1～3g/l+卡拉胶7～8g/l。培养条件：培养室温度22±2℃，光照强度为2000～2200lx，光照时间为8～10h/d，光源为日光灯，培养3～5个月。表2不同成分及不同浓度的诱导开花培养基对培养苗诱导开花的影响处理号培养基接种数（株）花芽数（个）花芽诱导率（%）a1/2ms+naa0.2mg/l+6-ba0.5mg/l+花宝2号1g/l+白砂糖25g/l+活性炭0.5g/l+蛋白胨1g/l+卡拉胶7g/l502550b1/2ms+naa0.2mg/l+6-ba0.5mg/ll+花宝2号3g/l+白砂糖25g/l+活性炭0.5g/l+蛋白胨3g/l+卡拉胶8g/l503060c1/2ms+naa0.2mg/l+6-ba0.5mg/l+花宝2号1g/l+kh2po40.3g/l+白砂糖25g/l+活性炭0.5g/l+蛋白胨1g/l+卡拉胶7g/l504080d1/2ms+naa0.2mg/l+6-ba0.5mg/l+花宝2号1g/l+kh2po40.5g/l+白砂糖25g/l+活性炭0.5g/l+蛋白胨1g/l+卡拉胶7g/l504284e1/2ms+naa0.2mg/l+6-ba0.5mg/l+花宝2号1g/l+kh2po40.8g/l+白砂糖25g/l+活性炭0.5g/l+蛋白胨2g/l+卡拉胶7g/l504386f1/2ms+naa0.2mg/l+6-ba0.5mg/l+花宝2号2g/l+kh2po40.5g/l+白砂糖25g/l+活性炭0.5g/l+蛋白胨3g/l+卡拉胶8g/l504590g1/2ms+naa0.2mg/l+6-ba0.5mg/l+花宝2号3g/l+kh2po40.5g/l+白砂糖25g/l+活性炭0.5g/l+蛋白胨3g/l+卡拉胶8g/l504386h1/2ms+naa0.2mg/l+6-ba0.5mg/l+花宝2号2g/l+kh2po40.8g/l+白砂糖25g/l+活性炭0.5g/l+蛋白胨3g/l+卡拉胶8g/l504488i1/2ms+naa0.2mg/l+6-ba0.5mg/l+花宝2号3g/l+kh2po40.8g/l+白砂糖25g/l+活性炭0.5g/l+蛋白胨3g/l+卡拉胶8g/l504284从表2可以看出，处理号a、b没有添加kh2po4，花芽诱导率明显较低；处理号c加了kh2po4花芽诱导率明显提高，处理号f增殖的同时，它的花芽诱导率达到最高值90%（如图1）。由此可以看出，培养基中添加kh2po4，p离子的浓度为0.3～0.8g/l，较大程度的促进了花芽的诱导，花芽诱导率达80%～90%。以上各阶段的培养基中均添加少许核黄素，避免培养基褐化。各阶段培养基的ph值均调至5.6左右。上述仅为本发明的具体实施方式，但本发明的设计构思并不局限于此，凡利用此构思对本发明进行非实质性的改动，均应属于侵犯本发明保护范围的行为。当前第1页12