一种薰衣草精油的应用的制作方法

本发明属于生物农药
技术领域：
，具体涉及一种薰衣草精油的应用。
背景技术：
：烟草疫霉（phytophtoraparasiticavar.nicotianaetucker）是一种土传病原菌，具有广泛的寄主范围，在世界范围内严重危害烟草和其他茄科作物，特别在云南烟区，给烟农带来严重的经济损失。烟草疫霉可引起根、茎腐烂以及叶片枯萎，在烟草生长的各个生育期均可侵染引起发病。目前对该病的防治主要采取连续、大量使用化学农药的方法，由此导致病原菌抗性生理小种的产生、土壤微生物群落的破坏、农田生态环境的破坏以及农产品农药残留超标对人的健康带来危害。因此，研发安全、有效、环境友好型的生物源农药替代化学农药极为重要。植物精油是来源于植物不同部位的次生代谢产物。近年来，随着对绿色安全农产品需求的增加，应用植物精油作为传统化学农药的替代品成为研究农业病害的热点。植物精油在抗细菌、抗真菌以及抗病毒等领域均取得一定的进展，但尚未见关于利用芳香植物薰衣草精油防治烟草疫霉的报道。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种薰衣草精油的应用。本发明的目的是这样实现的，所述的薰衣草精油在制备防治烟草疫霉杀菌剂中的应用。本发明为实现作物病害的绿色防控，从芳香植物源中筛选高效的杀菌活性成分，采用菌丝生长法测定了薰衣草精油对烟草疫霉的抑菌活性。结果表明，当精油浓度达到250μl/l时，薰衣草精油对烟草疫霉有显著的抑制作用。剂量效应实验结果表明，在熏蒸方式下，薰衣草精油对烟草疫霉抑制的ec50值255.20μg/ml。插片法实验结果表明，薰衣草精油对烟草疫霉菌丝生长形态有一定的影响。本发明结果表明薰衣草精油有望成为防治烟草疫霉的环境友好型杀菌剂。附图说明图1为薰衣草精油对烟草疫霉菌落大小的影响；图2为不同浓度的薰衣草精油对烟草疫霉的抑制效率；图3为薰衣草精油对烟草疫霉菌丝形态的影响。具体实施方式下面结合实施例和附图对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变换或替换，均属于本发明的保护范围。本发明所述的薰衣草精油的应用为所述的薰衣草精油在制备防治烟草疫霉杀菌剂中的应用。所述的薰衣草精油浓度为250μl/l以上。本发明所述的防治烟草疫霉杀菌剂由薰衣草精油和有机溶剂组成。所述的薰衣草精油和有机溶剂的体积配比为1：（1～10）。所述的有机溶剂为吐温-20、丙酮或乙醇。本发明所述的薰衣草精油在制备防治烟草疫霉杀菌剂时包括精油药剂的制备、薰衣草药剂的使用以及薰衣草精油药剂抗病形态的观察等步骤，具体包括：1、薰衣草精油药剂配制：将薰衣草精油按照1：1～10倍的比例与吐温-20或丙酮或乙醇混合，充分混匀后，待用；2、培养基精油药剂熏蒸处理用打孔器在无菌条件下取直径为5mm的烟草疫霉菌饼接入20mlpda培养基的培养皿(直径90mm)中央。将平板倒置，取1片直径为5mm的无菌滤纸置于皿盖中央，分别吸取1、2、3、4和5μl的不同芳香植物精油滴于滤纸片上，以滤纸片上不添加植物精油的平板为对照。封口膜密封后置于28℃温度下培养7d左右，测量菌落直径并计算抑菌率。3、回归方程和ec50测定对于以上5种精油，分别稀释成系列浓度梯度的含精油培养基。按上述方法测定不同质量浓度精油对烟草疫霉的抑菌活性，并求其回归方程y=a+bx及有效中浓度(ec50值)。4、薰衣草精油药剂对菌丝形态生长的影响采用插片法观察菌丝形态。将培养3d后的菌饼分别接种在pda培养基上，以不含精油的为对照。待对照菌落直径达到2cm左右,在菌落四周插入4个盖玻片(盖玻片需在乙醇浸泡后在酒精灯火焰上灼烧或灭菌后使用)，待菌丝“爬”至盖玻片上，将盖玻片取下，显微镜下观察菌丝形态。下面以具体实施案例对本发明做进一步说明：实施例1薰衣草精油药剂配制：将薰衣草精油按照1：1～10倍的比例与吐温-20混合，充分混匀后，再用蒸馏水稀释，使薰衣草精油的终浓度为100μg/ml；实施例2薰衣草精油药剂配制：将薰衣草精油按照1：1～10倍的比例与丙酮混合，充分混匀后，再用蒸馏水稀释，使薰衣草精油的终浓度为200μg/ml；实施例3薰衣草精油药剂配制：将薰衣草精油按照1：1～10倍的比例与乙醇混合，充分混匀后，再用蒸馏水稀释，使薰衣草精油的终浓度为300μg/ml；实施例4精油药剂熏蒸处理的烟草疫霉菌斑观察：用打孔器在无菌条件下取直径为5mm的烟草疫霉菌饼接入20mlpda培养基的培养皿(直径90mm)中央。将平板倒置，取1片直径为5mm的无菌滤纸置于皿盖中央，吸取5μl薰衣草精油滴于滤纸片上，以滤纸片上不添加精油的平板为对照。封口膜密封后置于28℃温度下培养7d左右，观察烟草疫霉菌斑大小及形状。结果如图1所示：薰衣草精油对烟草疫霉有一定的体外抑制作用，限制了烟草疫霉菌丝的生长。与空白对照相比，薰衣草精油处理导致烟草疫霉菌落显著变小。实施例5精油药剂熏蒸处理对烟草疫霉的抑制率计算：用打孔器在无菌条件下取直径为5mm的烟草疫霉菌饼接入20mlpda培养基的培养皿(直径90mm)中央。将平板倒置，取1片直径为5mm的无菌滤纸置于皿盖中央，分别吸取1、2、3、4和5μl的不同芳香植物精油滴于滤纸片上，以滤纸片上不添加植物精油的平板为对照。封口膜密封后置于28℃温度下培养7d左右，测量菌落直径并计算抑菌率，每处理3次重复。按如下公式计算抑菌率：抑菌率(%)=(dc-dt)/(dc-5)×100。式中：dc为对照菌落直径；dt为不同处理条件下的菌落直径。结果如图2所示，通过计算菌落生长抑制率发现，薰衣草精油对烟草疫霉有显著的抑制效果，且具有浓度依赖性，随着浓度的增加，其抑制效率有所提高，在较高浓度（5μl）时，薰衣草精油药剂的抑制效率达到了41.5%。实施例6回归方程和ec50测定：对于以上薰衣草精油，分别稀释成系列浓度梯度的含精油培养基。测定不同质量浓度精油对烟草疫霉的抑菌活性，并求其回归方程y=a+bx及有效中浓度(ec50值)。结果（表1）显示，在熏蒸法方法中，薰衣草精油对烟草疫霉的ec50值为255.20μg/ml，表明其对烟草疫霉的抑制效果较好。表1薰衣草精油对烟草疫霉抑制的回归方程及ec50值精油回归方程r²ec50(μg/ml）薰衣草油y=6.9264x+9.61620.95255.20实施例7薰衣草精油药剂对菌丝形态生长的影响：采用插片法观察菌丝形态。将培养3d后的菌饼接种在pda培养基上，以不含精油的为对照。待对照菌落直径达到2cm左右,在菌落四周插入4个盖玻片(盖玻片需在乙醇浸泡后在酒精灯火焰上灼烧或灭菌后使用)，待菌丝“爬”至盖玻片上，将盖玻片取下，显微镜下观察菌丝形态。结果如图3显示，薰衣草精油对烟草疫霉菌丝生长状态有较大的影响。空白对照组的菌丝形态成均匀的丝状，内部物质分布均匀，菌丝长度较长，而且分叉较少，无明显的异常膨大；经过薰衣草精油处理的烟草疫霉菌丝表面不再平滑，菌丝弯曲增多，而且菌丝上发芽增多，菌丝分支明显增多。部分菌丝结节出现膨胀，内部出现空泡，可能是薰衣草精油处理后菌丝细胞内部结构遭到破坏，细胞膜受损，内溶物释放到细胞外所致。当前第1页12