本发明涉及三叶青栽培领域，具体地，涉及一种提高产量与硒含量的三叶青林下种植方法。
背景技术：
：三叶青(tetrastigmahemsleyanumdielsetgilg)，又名三叶崖爬藤、金线吊葫芦、蛇附子、石老鼠，属鼠李目，葡萄科草质藤本。三叶青是我国一种名贵植物药材，全草均可入药，以地下块根和果实的药用效果最好，全年可进行采收，晒干或鲜用均可。其性平、味微苦，具有清热解毒、祛风化痰、活血止痛等功效，主治毒蛇咬伤、扁桃体炎、淋巴结结核、跌打损伤、小儿高热惊厥等疾病。现代医学发现，三叶青还可以用来治疗病毒性脑膜炎、治疗急性交气管炎、肺炎、咽喉炎、肠炎、胆道感染及眼险蜂窝织炎等感染性疾病，甚至预防及治疗癌症。目前市场上销售的三叶青产品，大多都是采用野生的品种为原料药材，由于人工栽培的技术条件要求高，生长条件苛刻，导致产量有限。因此，中药材市场上出现供不应求状况。三叶青因其药效显著，开发潜力巨大。霍昕（2008）在三叶青块根乙醚提取物中共分离出21个化合物，检测出18个组分，其中含量较高的是亚油酸、棕榈酸、油酸、二苯胺、亚麻酸甲酯和硬脂酸。李瑛琦（2003）从块根的乙酸乙酯萃取物中分离到7个化合物。毛一亮（2008）分离到4个化合物，鉴定为：β-谷甾醇、山柰酚、槲皮素和山柰酚-3-o-新橙皮糖苷。liud（2002报道从三叶青中得到一种新的黄酮碳苷。刘东（1999）从其地上部分的石油醚萃取物中分离到4个化合物：蒲公英萜酮、蒲公英萜醇、β-谷甾醇和麦角甾醇。槲皮素可诱导肿瘤细胞凋亡，又可阻止非肿瘤细胞凋亡；其提取物能通过增强单核-巨噬细胞的吞噬功能而发挥抗肿瘤功能。以三叶青为主要成分的金丝地甲胶囊，可明显抑制lewis肺肿瘤细胞、smmc-7721肝肿瘤细胞、ht-60人淋巴母细胞性白血病细胞、scg-7901胃肿瘤细胞及hct-116结肠肿瘤细胞生长。按《保健食品检验与评价技术规范》（2003版）“食品安全性毒理学评价试验”载：“三叶青无毒，无致突变性”，其提取物对人肝癌细胞hepg2有较强的抑制作用。用三叶青研制出的一种创新中药，有抑制和清除乙肝病毒，调整机体免疫、保护肝细胞、阻断肝纤维化等作用。恶性肿瘤病人口服金芪片（含三叶青），总有效率达78.33%。以清热解毒为主、健脾行气活血为辅的中肝合剂（含三叶青），配合西药治疗ⅲ期原发性肝癌，可提高患者生活质量，延长生存期。鉴于三叶青的良好药用价值，其进一步开发利用具有十分广阔的前景。目前，三叶青野生资源处于稀缺状态，其入药部位的特殊和用量的扩大，必然导致市场上三叶青的场供不应求，但大量采用野生三叶青必定对其野生资源造成极大的破坏。一方面，三叶青在药材市场上已经呈现出供不应求的状况，加上这些年药材价格不断攀升，新鲜三叶青块根的市场价格已经达到600~800元/斤，这是导致野生三叶青被过度开采的原因之一。另一方面，近年来毁林开荒种植茶树活动日益频繁，使三叶青野生资源蕴藏量急剧下降。20世纪90年代开始，随着三叶青栽培技术研究的不断深入，对三叶青人工培育种植的技术得到快速发展。2009年钱丽华、阮松林、马华升等人通过不同温度处理对三叶青试管无菌苗生长的影响进行试验，得出结果：在30~35℃时最适宜三叶青试管组培苗生长，平均鲜重增加达到4.4027~5.1493g，可溶性蛋白含量增加，若40℃以上或10℃以下温度则影响三叶青苗的生长。同年，刘杰书、李泳锋、余劲松提出三叶青的驯化技术，将三叶青从山林与杂草丛中采掘回来,从野生到家养，其对场地、光照、温度、湿度、养分等方面的差异,需要1个较长时间的驯化过程才能适应。2010年浦锦宝、郑军献和梁卫青三人公开了三叶青人工栽培方法，选择田间的沙壤土耕作，可成功繁殖和栽培三叶青。2011年吉庆勇、程文亮、华金渭等人通过对生根剂、插穗年龄和基质对插穗生根的影响进行研究，在三叶青扦插繁殖技术上提出生根剂、插穗年龄对插穗生根的影响明显，基质对插穗生根的影响不明显。2012年10月吉庆勇、程文亮和季炳招等又提出一种三叶青的高效仿野生栽培技术方法，选择山区良田或朝北的梯田种植，实现人工大田种植三叶青。2012年12月胡馨尹发明了一种盆栽种植三叶青的方法，在盆土或直接在田地土壤中加硬物，搭建三叶青攀援藤架以及遮荫棚种植法。技术实现要素：本发明的目的是为了提供一种提高产量与硒含量的三叶青林下种植方法。为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：一种三叶青林下种植方法，包括林地选择、选苗、育苗、移栽、日常管理、病虫害防治与采收管理，所述选苗与育苗步骤中，采用扦插繁殖法，在每年3~6月份挖取3~5年生的野生三叶青，选择无病害、生长健壮、带腋芽的枝条，剪成10cm长，带2节嫩腋芽段的插穗，插穗斜下切口用富含培养液的第一基质包裹于温室中进行培养10-15天，并早中晚三次对三叶青幼苗根部滴加培养液；然后将其移至第二基质中，进行育苗30-40天；最后将其移栽至选定的林地，移栽株距为10-15cm，在幼苗间距中分散栽种川穹、金银花与艾草。作为优选，所述培养液含有质量分数为0.3-0.8%的壳寡糖、0.6-0.8%的有机质腐植酸、0.01-0.03%的细胞分裂素、0.3-0.5%的激动素、0.05-0.2%的富硒酵母与0.3-0.5%的菌菇，余量为水。作为优选，壳聚糖的分子量在10000da以下，脱乙酰度大于70%。作为优选，育苗时，光照强度1700lux-2200lux。作为优选，第一基质包括以下重量份数的原料：65-75份黄泥、15-25份秸秆粉、10-15份麸皮、1-5份玉米粉与1-3份石灰。作为优选，第二基质按重量份数计包括：食用菌渣20-30份，草炭700-800份，腐殖土500-700份、贝壳粉200-400份，大豆渣90-100份，促根生长组合物7-14份，甘蔗渣10-15份、β-胡萝卜素5-8份以及活性多肽钙铈螯合物15-20份。作为优选，活性多肽钙铈螯合物的制备方法为：a）发酵：用奥默柯达酵母菌与富硒酵母发酵制备活性多肽；发酵步骤为：称取银杏粉50份、酵母膏7份、氯化钠1份、蛋白胨4份、碳酸钙3份、葡萄糖20份、蒸馏水300份，调节ph7.2，112℃灭菌10分钟得发酵培养液；接种以发酵培养液质量的0.5%奥默柯达酵母菌和以发酵培养液质量的0.02%的富硒酵母，在45℃通风条件下发酵2小时得发酵液；b）提纯：通过离心提纯与硫酸铵沉淀提纯活性多肽；提纯步骤为：将发酵液置于离心机中，于15℃温度在8000r/min条件下离心5分钟，取上清液a；将上清液a在4℃下冷冻离心，在转速4500r/min条件下离心10分钟，取上清液b；将研细的硫酸铵按照75%的饱和度加入到上述上清液b中，4℃下保存过夜后用9500r/min离心30~45分钟，取沉淀加入4~5倍的蒸馏水搅拌得活性多肽溶液；c）螯合：制备活性多肽钙铈螯合物；螯合步骤为：取提纯后的活性多肽溶液，在搅拌下加入6倍质量的含有15%质量分数的氯化钙水溶液与1.1倍质量的含有12%质量分数的硝酸铈水溶液，以盐酸和氢氧化钠溶液调节ph为7，在55℃温度下震荡合成20分钟后干燥粉碎，得活性多肽钙铈螯合物。本发明的有益效果是：1）本发明通过第一基质来打破植株的休眠，促进植株根茎的生长，避免地上部分徒长，提高三叶青块根的产量；2）通过第二基质来丰富三叶青的营养所需，有效提高碳氮比，增加作物在夜间呼吸强度，促进根，茎，叶的生长；可帮助被土壤固定磷的释放，减少钾、镁流失，降低氮分解速度，从而提高营养成分的吸收效率，减少化肥用量；3）本发明的培养液与第一基质的联动，可以有效的促进三叶青根系的生长，提高其成活率，提升三叶青块根中有益成分的含量，增加其硒含量；4）可促进三叶青植株的生长，大幅提升三叶青的产量和药用活性成分含量，并使三叶青富硒，从而实现三叶青的增产增效。具体实施方式以下结合具体实施例，对本发明做进一步的解释：实施例1一种三叶青林下种植方法，包括林地选择、选苗、育苗、移栽、日常管理、病虫害防治与采收管理，所述选苗与育苗步骤中，采用扦插繁殖法，在每年3~6月份挖取3~5年生的野生三叶青，选择无病害、生长健壮、带腋芽的枝条，剪成10cm长，带2节嫩腋芽段的插穗，插穗斜下切口用富含培养液的第一基质包裹于温室中进行培养10-15天，并早中晚三次对三叶青幼苗根部滴加培养液；然后将其移至第二基质中，进行育苗30-40天；最后将其移栽至选定的林地，移栽株距为10-15cm，在幼苗间距中分散栽种川穹、金银花与艾草。林地的选择：腐殖质丰富的林下土壤，且自然光照基本1700lux-2200lux的地块，将土壤深耕55cm，除去杂草与枯枝；其余步骤可为常规方法。所述培养液含有质量分数为0.3%的壳寡糖、0.6%的有机质腐植酸、0.01%的细胞分裂素、0.3%的激动素、0.05%的富硒酵母与0.3%的菌菇，余量为水。壳聚糖的分子量在10000da以下，脱乙酰度大于70%。第一基质包括以下重量份数的原料：65份黄泥、15份秸秆粉、10份麸皮、1份玉米粉与1份石灰。第二基质按重量份数计包括：食用菌渣20份，草炭700份，腐殖土500份、贝壳粉200份，大豆渣90份，促根生长组合物7份，甘蔗渣10份、β-胡萝卜素5份以及活性多肽钙铈螯合物15份。活性多肽钙铈螯合物的制备方法为：a）发酵：用奥默柯达酵母菌与富硒酵母发酵制备活性多肽；发酵步骤为：称取银杏粉50份、酵母膏7份、氯化钠1份、蛋白胨4份、碳酸钙3份、葡萄糖20份、蒸馏水300份，调节ph7.2，112℃灭菌10分钟得发酵培养液；接种以发酵培养液质量的0.5%奥默柯达酵母菌和以发酵培养液质量的0.02%的富硒酵母，在45℃通风条件下发酵2小时得发酵液；b）提纯：通过离心提纯与硫酸铵沉淀提纯活性多肽；提纯步骤为：将发酵液置于离心机中，于15℃温度在8000r/min条件下离心5分钟，取上清液a；将上清液a在4℃下冷冻离心，在转速4500r/min条件下离心10分钟，取上清液b；将研细的硫酸铵按照75%的饱和度加入到上述上清液b中，4℃下保存过夜后用9500r/min离心30~45分钟，取沉淀加入4~5倍的蒸馏水搅拌得活性多肽溶液；c）螯合：制备活性多肽钙铈螯合物；螯合步骤为：取提纯后的活性多肽溶液，在搅拌下加入6倍质量的含有15%质量分数的氯化钙水溶液与1.1倍质量的含有12%质量分数的硝酸铈水溶液，以盐酸和氢氧化钠溶液调节ph为7，在55℃温度下震荡合成20分钟后干燥粉碎，得活性多肽钙铈螯合物。实施例2一种三叶青林下种植方法，包括林地选择、选苗、育苗、移栽、日常管理、病虫害防治与采收管理，所述选苗与育苗步骤中，采用扦插繁殖法，在每年3~6月份挖取3~5年生的野生三叶青，选择无病害、生长健壮、带腋芽的枝条，剪成10cm长，带2节嫩腋芽段的插穗，插穗斜下切口用富含培养液的第一基质包裹于温室中进行培养10-15天，并早中晚三次对三叶青幼苗根部滴加培养液；然后将其移至第二基质中，进行育苗30-40天；最后将其移栽至选定的林地，移栽株距为10-15cm，在幼苗间距中分散栽种川穹、金银花与艾草。林地的选择：腐殖质丰富的林下土壤，且自然光照基本1700lux-2200lux的地块，将土壤深耕55cm，除去杂草与枯枝；其余步骤可为常规方法。所述培养液含有质量分数为0.5%的壳寡糖、0.65%的有机质腐植酸、0.02%的细胞分裂素、0.35%的激动素、0.12%的富硒酵母与0.4%的菌菇，余量为水。壳聚糖的分子量在10000da以下，脱乙酰度大于70%。第一基质包括以下重量份数的原料：70份黄泥、22份秸秆粉、13份麸皮、2份玉米粉与2.2份石灰。第二基质按重量份数计包括：食用菌渣24份，草炭780份，腐殖土650份、贝壳粉350份，大豆渣93份，促根生长组合物8份，甘蔗渣12份、β-胡萝卜素6.5份以及活性多肽钙铈螯合物118份。活性多肽钙铈螯合物的制备方法为：a）发酵：用奥默柯达酵母菌与富硒酵母发酵制备活性多肽；发酵步骤为：称取银杏粉50份、酵母膏7份、氯化钠1份、蛋白胨4份、碳酸钙3份、葡萄糖20份、蒸馏水300份，调节ph7.2，112℃灭菌10分钟得发酵培养液；接种以发酵培养液质量的0.5%奥默柯达酵母菌和以发酵培养液质量的0.02%的富硒酵母，在45℃通风条件下发酵2小时得发酵液；b）提纯：通过离心提纯与硫酸铵沉淀提纯活性多肽；提纯步骤为：将发酵液置于离心机中，于15℃温度在8000r/min条件下离心5分钟，取上清液a；将上清液a在4℃下冷冻离心，在转速4500r/min条件下离心10分钟，取上清液b；将研细的硫酸铵按照75%的饱和度加入到上述上清液b中，4℃下保存过夜后用9500r/min离心30~45分钟，取沉淀加入4~5倍的蒸馏水搅拌得活性多肽溶液；c）螯合：制备活性多肽钙铈螯合物；螯合步骤为：取提纯后的活性多肽溶液，在搅拌下加入6倍质量的含有15%质量分数的氯化钙水溶液与1.1倍质量的含有12%质量分数的硝酸铈水溶液，以盐酸和氢氧化钠溶液调节ph为7，在55℃温度下震荡合成20分钟后干燥粉碎，得活性多肽钙铈螯合物。实施例3一种三叶青林下种植方法，包括林地选择、选苗、育苗、移栽、日常管理、病虫害防治与采收管理，所述选苗与育苗步骤中，采用扦插繁殖法，在每年3~6月份挖取3~5年生的野生三叶青，选择无病害、生长健壮、带腋芽的枝条，剪成10cm长，带2节嫩腋芽段的插穗，插穗斜下切口用富含培养液的第一基质包裹于温室中进行培养10-15天，并早中晚三次对三叶青幼苗根部滴加培养液；然后将其移至第二基质中，进行育苗30-40天；最后将其移栽至选定的林地，移栽株距为10-15cm，在幼苗间距中分散栽种川穹、金银花与艾草。林地的选择：腐殖质丰富的林下土壤，且自然光照基本1700lux-2200lux的地块，将土壤深耕55cm，除去杂草与枯枝；其余步骤可为常规方法。所述培养液含有质量分数为0.8%的壳寡糖、0.8%的有机质腐植酸、0.03%的细胞分裂素、0.5%的激动素、0.2%的富硒酵母与0.5%的菌菇，余量为水。壳聚糖的分子量在10000da以下，脱乙酰度大于70%。第一基质包括以下重量份数的原料：75份黄泥、25份秸秆粉、15份麸皮、5份玉米粉与3份石灰。第二基质按重量份数计包括：食用菌渣30份，草炭800份，腐殖土700份、贝壳粉400份，大豆渣100份，促根生长组合物14份，甘蔗渣15份、β-胡萝卜素8份以及活性多肽钙铈螯合物20份。活性多肽钙铈螯合物的制备方法为：a）发酵：用奥默柯达酵母菌与富硒酵母发酵制备活性多肽；发酵步骤为：称取银杏粉50份、酵母膏7份、氯化钠1份、蛋白胨4份、碳酸钙3份、葡萄糖20份、蒸馏水300份，调节ph7.2，112℃灭菌10分钟得发酵培养液；接种以发酵培养液质量的0.5%奥默柯达酵母菌和以发酵培养液质量的0.02%的富硒酵母，在45℃通风条件下发酵2小时得发酵液；b）提纯：通过离心提纯与硫酸铵沉淀提纯活性多肽；提纯步骤为：将发酵液置于离心机中，于15℃温度在8000r/min条件下离心5分钟，取上清液a；将上清液a在4℃下冷冻离心，在转速4500r/min条件下离心10分钟，取上清液b；将研细的硫酸铵按照75%的饱和度加入到上述上清液b中，4℃下保存过夜后用9500r/min离心30~45分钟，取沉淀加入4~5倍的蒸馏水搅拌得活性多肽溶液；c）螯合：制备活性多肽钙铈螯合物；螯合步骤为：取提纯后的活性多肽溶液，在搅拌下加入6倍质量的含有15%质量分数的氯化钙水溶液与1.1倍质量的含有12%质量分数的硝酸铈水溶液，以盐酸和氢氧化钠溶液调节ph为7，在55℃温度下震荡合成20分钟后干燥粉碎，得活性多肽钙铈螯合物。在同一符合条件的地块，选取不相邻的3块地，每块1亩，通过实施例1-3的方法种植三叶青，2年后收获，与市售三年产的三叶青块根进行对比，结果见表1。表1.结果产量（kg/亩）总黄酮含量（mg/g）硒含量（μg/kg）实施例171712.46192实施例274213.13198实施例376914.56203市售三年产三叶青块根6.02102上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受所述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。当前第1页1 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