一种大西洋鲑三倍体连续批量诱导的方法与流程

文档序号:20873384发布日期:2020-05-26 16:07阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种大西洋鲑三倍体连续批量诱导的方法,其特征在于:收集大西洋鲑精卵进行人工授精,将受精卵分成2-3组,依次连续对每组进行静水压诱导处理,抑制其第二极体排放,从而获得大西洋鲑三倍体;所述静水压诱导为,在受精后300-400度分(温度℃×时间min),对第1组受精卵进行静水压处理,获得三倍体大西洋鲑;第1组受精卵诱导结束取出后,立即将第2组受精卵按照上述过程进行静水压诱导,如此可以连续诱导处理同批受精卵。

2.按权利要求1所述大西洋鲑三倍体连续批量诱导的方法,其特征在于:

1)精卵采集及孵育

采集大西洋鲑精、卵,按精卵体积比1:100比例人工授精,受精后2-3min,用清水多次洗卵,去除未受精卵和血块,分组,而后流水孵育;

2)静水压连续诱导

诱导加倍的处理时刻为受精后300-400度分,静水压处理压力为66-70mpa,处理时间为4-5min。每组静水压处理后按1-2mpa/s的速率缓慢降压至0mpa取出,之后加入同批的下一组受精卵,并重复上述过程,由此可以对同批受精卵进行静水压连续诱导处理,诱导后受精卵通过流水孵育获得三倍体大西洋鲑鱼苗。

3.按权利要求2所述大西洋鲑三倍体连续批量诱导的方法,其特征在于:所述步骤1)中人工授精、步骤2)诱导及孵育的水温均为7-10℃。

4.按权利要求2所述大西洋鲑三倍体连续批量诱导的方法,其特征在于:所述步骤2)中,静水压处理前1min将受精卵装入有7-10℃清水的容器中,并放入加压腔内,到处理时刻时进行处理;每组受精卵处理结束缓慢降压时,将下一组受精卵装入有7-10℃清水的容器中,受精卵取出后,迅速将下一组受精卵放入加压腔内进行处理;在300-400度分时间范围内,按上述步骤静水压连续诱导处理同批次分组的受精卵。

5.按权利要求2所述大西洋鲑三倍体连续批量诱导的方法,其特征在于:所述步骤2)中,静水压处理在15s内迅速加压到66-70mpa。

6.按权利要求2所述大西洋鲑三倍体连续批量诱导的方法,其特征在于:所述获得三倍体大西洋鲑在250度日发眼时,将发眼卵用70%乙醇在-20℃固定4h,剥掉卵膜、去除卵黄后,将胚体经蒸馏水冲洗后用流式细胞仪检测倍性。


技术总结
本发明涉及染色体操作技术,具体地说是一种大西洋鲑三倍体连续批量诱导的方法。收集大西洋鲑精卵进行人工授精,将受精卵分成2‑3组,依次连续对每组进行静水压诱导处理,抑制其第二极体排放,从而获得大西洋鲑三倍体;所述静水压诱导为,在受精后300‑400度分(温度℃×时间min),对第1组受精卵进行静水压处理,获得三倍体大西洋鲑;第1组受精卵诱导结束取出后,立即将第2组受精卵按照上述过程进行静水压诱导,如此可以连续诱导处理同批受精卵。采用本发明方法可连续、高效诱导获得100%的大西洋鲑三倍体。

技术研发人员:吴志昊;尤锋;徐世宏;李军;刘豪
受保护的技术使用者:中国科学院海洋研究所
技术研发日:2020.02.10
技术公布日:2020.05.26
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