一种牛精液稀释液的配制方法与流程

1.本发明属于牛人工授精技术领域，尤其涉及一种牛精液稀释液的配制方法。


背景技术：

2.人工授精技术是养牛业进行品种改良的重要技术，通过充分利用优良牛种的遗传资源，实现良种比例的快速扩增。精液保存是人工授精技术中的重要环节，采集的鲜精液需经过稀释、降温等一系列处理，以提高精子的体外存活率、精液冻后活力和受胎率，稀释液能够供给养分、维持ph、抑制细菌生长等，通过向鲜精液中加入一定的稀释液，能够避免细胞膜受到损害，实现精液的长时间保存，为后续精液的冷冻提供基础。
3.常规的卵黄稀释液包括缓冲剂非电解质或弱电解质、抗冻保护剂、抗生素、抗氧化剂等，常用的配比方法为：蒸馏水1000ml，柠檬酸钠13g、果糖10g、tris24g配置溶液，煮沸消毒。降至室温取上液670ml加卵黄200ml、维生素b
12 40ml、维生素e 20ml、甘油70ml、青霉素10万iu、链霉素10万iu。上述配比方法操作过程复杂，所用试剂数量多，精子的抗冻性能和冻后存活率低，解冻后精子的存活时间较短。


技术实现要素：

4.针对上述背景技术中指出的不足，本发明提供了一种牛精液稀释液的配制方法，旨在解决上述背景技术中现有技术存在的问题。
5.为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：
6.一种牛精液稀释液的配制方法，稀释液包括蒸馏水、柠檬酸钠、果糖、卵黄、抗菌素和甘油，配制方法如下：
7.首先将包括蒸馏水、柠檬酸钠、果糖、卵黄和抗菌素的基础液分为等体积的a液和b液，然后根据甘油的用量，从b液中取出与甘油等体积的量加入a液中形成第一液，再将甘油加入剩余的b液中形成第二液。
8.其中，蒸馏水与卵黄的体积比为4:1；抗菌素为等体积的青霉素和链霉素。
9.所述基础液的制备方法为：
10.(1)将蒸馏水加热至100℃，降温至50℃后加入柠檬酸钠，用磁力搅拌器搅拌均匀，过滤后备用。
11.(2)“倒蛋法”提取卵黄：将新鲜鸡蛋用酒精消毒后打开，左右倾倒鸡蛋将蛋清倾倒干净，刺破卵黄膜后让卵黄液缓慢流入量筒内，量取一定体积的卵黄。
12.优选地，所述稀释液中，所述蒸馏水、卵黄、甘油的体积百分含量分别为80％、20％、7％，所述柠檬酸钠和果糖浓度分别为23.2g/l、5g/l，所述抗菌素的用量为50万单位/l。
13.相比于现有技术的缺点和不足，本发明具有以下有益效果：
14.本发明公开的牛精液稀释液的配制方法操作过程简单，大大减少了所用试剂的数量；本发明配制的稀释液能有效提高精子的抗冻性能，使精子的冻后存活率提高20％，解冻
后延长精子的存活时间70分钟以上，同时，降低了微生物群落数。
具体实施方式
15.为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
16.一、原料准备
17.蒸馏水、柠檬酸钠(分析纯)、果糖(分析纯)、新鲜鸡蛋、抗生素(青霉素和链霉素)、甘油(分析纯)。
18.二、配制本发明稀释液
19.1、将800ml蒸馏水加热至100℃，降温至50℃后加入23.2g柠檬酸钠、5g果糖，用磁力搅拌器搅拌均匀，果糖用18cm滤纸(对折后打开，滤纸呈“锥”形状)过滤后备用。
20.2、“倒蛋法”提取卵黄：将新鲜鸡蛋用酒精消毒后打开，左右倾倒鸡蛋将蛋清倾倒干净，刺破卵黄膜后用量筒量取200ml的卵黄。
21.3、在柠檬酸钠和果糖所配溶液中加入200ml卵黄液，用磁力搅拌器搅拌均匀后，再加入抗生素(青霉素和链霉素各5ul/ml)，制成基础液。
22.4、将包括蒸馏水、柠檬酸钠、果糖、卵黄和抗菌素的基础液分为等体积的a液和b液，然后根据甘油的用量，从b液中取出与甘油等体积的量加入a液中形成第一液，再将甘油加入剩余的b液中形成第二液。
23.为了优化稀释液中各成分的用量，同时配制了多组稀释液，具体组成如表1和表2所示，表1所示为传统的稀释液配制方法，作对照组。具体方法如下：1、传统的稀释液的配比方法：在1000ml蒸馏水中加入柠檬酸钠13g、果糖10g、tris24g用磁力搅拌器搅拌均匀，煮沸消毒，为一液。将一液降至室温，取一液670ml加卵黄200ml(卵黄的取法为“倒蛋法”)、维生素b
12 40ml、维生素e 20ml、甘油7ml、青霉素10万iu、链霉素10万iu，为二液，用磁力搅拌器搅拌均匀。稀释时，先用一液稀释1/2，再用二液稀释1/2。表2所示为采用本发明的方法配制的稀释液。
24.表1对照组稀释液组成成分用量
[0025][0026]
表2测试组稀释液组成成分用量
[0027][0028]
试验用的种公牛精液是甘肃省家畜繁育改良管理站种公牛站的种公牛，选取种公牛5头，将采得的精液分别分为3等份，用表1和表2中的三种稀释液进行稀释进行比较，结果如表3所示：
[0029]
表3稀释液测试对比
[0030][0031]
通过上述试验说明：在相同条件下稀释液
③
配比方法简单，所用试剂少，稀释后
③
的活率基本无变化，
②
和
①
的活率都有不同程度的下降，特别是
②
的活率下降特别明显。冷冻后
③
的精子复苏率最高，
①
次之，
②
最低。说明在同等的条件下，
③
稀释液的效果最好，最适宜对鲜精进行稀释和冷冻。
[0032]
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。


技术特征：
1.一种牛精液稀释液的配制方法，其特征在于，稀释液包括蒸馏水、柠檬酸钠、果糖、卵黄、抗菌素和甘油，配制方法如下：首先将包括蒸馏水、柠檬酸钠、果糖、卵黄和抗菌素的基础液分为等体积的a液和b液，然后根据甘油的用量，从b液中取出与甘油等体积的量加入a液中形成第一液，再将甘油加入剩余的b液中形成第二液。2.如权利要求1所述的牛精液稀释液的配制方法，其特征在于，所述蒸馏水与卵黄的体积比为4:1；抗菌素为等体积的青霉素和链霉素。3.如权利要求1所述的牛精液稀释液的配制方法，其特征在于，所述基础液的制备方法为：(1)将蒸馏水加热至100℃，降温至50℃后加入柠檬酸钠，用磁力搅拌器搅拌均匀，过滤后备用。(2)“倒蛋法”提取卵黄：将新鲜鸡蛋用酒精消毒后打开，左右倾倒鸡蛋将蛋清倾倒干净，刺破卵黄膜后让卵黄液缓慢流入量筒内，量取一定体积的卵黄。4.如权利要求2所述的牛精液稀释液的配制方法，其特征在于，所述稀释液中，所述蒸馏水、卵黄、甘油的体积百分含量分别为80％、20％、7％，所述柠檬酸钠和果糖浓度分别为23.2g/l、5g/l，所述抗菌素的用量为50万单位/l。

技术总结
本发明公开了一种牛精液稀释液的配制方法，步骤如下：首先将包括蒸馏水、柠檬酸钠、果糖、卵黄和抗菌素的基础液分为等体积的A液和B液，然后根据甘油的用量，从B液中取出与甘油等体积的量加入A液中形成第一液，再将甘油加入剩余的B液中形成第二液。本发明操作简单，所用试剂数量少，本发明配制的稀释液能有效提高精子的抗冻性能，使精子的冻后存活率提高20％，冷冻后精子复苏率提高，解冻后延长精子的存活时间，同时，降低了微生物群落数，本发明的稀释液适宜对鲜精进行稀释和冷冻。液适宜对鲜精进行稀释和冷冻。


技术研发人员：李刚 强文军 马强 贠静文 罗宝军 王朝阳
受保护的技术使用者：甘肃省家畜繁育改良管理站
技术研发日：2022.10.11
技术公布日：2022/12/22