一种观察统计桔全爪螨发育历期与产卵量的简便方法与流程

1.本发明涉及植物病虫害防治技术领域，具体涉及一种观察统计桔全爪螨发育历期与产卵量的简便方法。


背景技术：

2.桔全爪螨panonychus citri(mcgregor)，属真螨目叶螨科，是危害柑橘、樱桃、月季、美人蕉等植物的一种主要害螨。成螨、若螨和幼螨以口器刺吸叶片、绿色枝梢及果实表皮汁液，以叶片受害最重。被害叶片表面呈现许多灰白色小斑点，失去光泽，严重时全叶灰白，大量落叶，影响树势和产量，猖獗时，果实表面布满灰白色失绿斑点，全果苍白，影响产量。由于该螨螨体小、繁殖力强、代数多、对药剂的抗性强，给防治带来较大难度，是柑橘、樱桃、月季、美人蕉、红掌等生产中关心的热点、难点问题。在开展防治药剂试验示范之前，准确判断桔全爪螨为害症状，摸清桔全爪螨的发生为害规律尤为重要，而发育历期与产卵量是研究桔全爪螨发生为害规律的两个关键指标。
3.由于田间植株病虫害发生往往不是单一因素导致，病原、寄主植物、环境条件相互结合导致病害发生，气候因子、生物因子、土壤因子、人为因子等导致虫害发生。多因子导致的病虫害致使田间植株症状表现复杂，对准确判断桔全爪螨为害症状与对症下药带来了一定难度。同时桔全爪螨具有螨体小、繁殖力强、代数多、活动空间广、移动速度快等特点，严重时在田间植株上有数以万计的卵与各发育历期的螨态，无法厘清卵期、幼螨期、若螨期、成螨期各阶段所经历的时间与桔全爪螨产卵量等重要信息，很难为田间药剂防治间隔时间提供技术参考，致使药剂盲施，导致管理成本浪费且污染环境。
4.为了准确判断桔全爪螨为害症状，厘清卵期、幼螨期、若螨期、成螨期各阶段所经历的时间与桔全爪螨产卵量等重要信息，研究人员将桔全爪螨置于盆栽植株叶片上进行室内观察，但因该螨活动空间广、移动速度快导致找不到螨体，试验无疾而终。于是出现了目前常用的方法“离体接螨”，具体为：田间采集供试植株叶片，洗净擦干后置于盛水并垫有泡沫海绵(其上垫滤纸)的培养皿内，叶背向上，用湿脱脂棉条压住叶沿，并将每张叶片用脱脂棉条分成4～6格，1cm2格，每格接1头初孵幼螨，室内温、湿度设置为田间参数。为了保持叶片新鲜，每隔3天更换一次叶片，培养皿内有适量清水使海绵滤纸浸在水中，每天记载螨态变化。进入雌成螨后，每天记录其孤雌产卵量，直至成螨死亡。但实操过程中，该方法存在如下弊端：1.与桔全爪螨真实生境相悖，桔全爪螨在大田多为高温干旱环境，而该方法需要用湿脱脂棉条压住叶缘，且为了保持叶片新鲜须定期加适量清水，使得培养皿内环境湿度增加，桔全爪螨还会触水，对厘清卵期、幼螨期、若螨期、成螨期各阶段所经历的时间与获得桔全爪螨产卵量等重要信息具有较大干扰；2.桔全爪螨本身活动轨迹会涉及到叶面、叶背，而该方法采取叶背向上置于培养皿内，与田间叶背向下的事实相反，且留给桔全爪螨的活动空间仅为叶背，不能真实反应其在叶面、叶背的活跃度；3.桔全爪螨极易被困于脱脂棉条内，导致提前死亡或找不到螨体；4.操作繁琐，为了保持叶片新鲜须每隔3天更换一次叶片，这样极易造成桔全爪螨逃跑或找不到螨体，同时会破坏卵的卵柄及柄端细丝结构。


技术实现要素：

5.针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种观察统计桔全爪螨发育历期与产卵量的简便方法。本发明方法在最大程度模仿桔全爪螨真实生存环境的同时，能实现观察统计桔全爪螨发育历期与产卵量的目的。
6.为实现上述的目的，本发明采用的技术方案为：
7.一种观察统计桔全爪螨发育历期与产卵量的简便方法，包括以下步骤：
8.将离体红掌叶片叶背面朝下置于培养皿内，加入桔全爪螨若螨；用封口膜密封培养皿后放入人工气候箱中进行培养；待若螨发育为成螨时，及时淘汰雄成螨，留下雌成螨，记录每天产卵量至雌成螨死亡，并留取部分第一代卵继续饲养至成螨以记录其发育历期。
9.优选的，上述方法中，每培养皿中放入1片离体红掌叶片，每片离体红掌叶片挑入1头桔全爪螨若螨。
10.优选的，上述方法中，所述的人工气候箱的培养条件为：温度27～29℃，相对湿度65％～75％、光周期l/d＝14/10h。
11.本发明具有如下有益效果：
12.1.离体红掌叶片采自长势良好的小娇红掌，健康、成熟度相近、大小一致、留约1厘米叶柄，用无菌水清洗后自然晾干，于体式显微镜下确认无桔全爪螨为害。将离体叶片叶背面朝下置于培养皿内，待接入桔全爪螨后加盖培养皿上盖，此时叶柄与培养皿底部形成夹角，叶面最高位置与培养皿上盖有两个接触点，使得叶面、叶背与培养皿之间几乎无接触，确保了桔全爪螨充足的活动空间，最大程度地还原了桔全爪螨真实生境。
13.2.采用parafilm封口膜(2in x 250ft)进行密封，该封口膜具有保湿透气的特点，在有效防止桔全爪螨外逃的前提下，可以维持红掌叶片新鲜状态约15天，期间无需更换叶片与加水，减小了对卵柄及柄端细丝结构的破坏。
14.3.本方法培养皿内只有桔全爪螨与叶片，没有泡沫海绵、滤纸、脱脂棉条等杂物，避免了桔全爪螨藏匿其中或被困死，确保了桔全爪螨卵期、幼螨期、若螨期、成螨期的顺利发育。
附图说明
15.图1为桔全爪螨卵期、幼螨、若螨、蜕皮、成螨照片。图中，a：左：卵初产时为鲜红色；右：卵发育后期变白；b：卵顶中央有刚毛状卵柄；c：卵分布在叶脉上；d：幼螨；e：若螨；f：蜕皮；g：雌成螨俯视图；h：雌成螨侧视图；i：雄成螨。
16.图2为培养皿内离体红掌叶片放置图。图中，a：侧视图、b：俯视图。
具体实施方式
17.以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
18.实施例1
19.1、试验地点
20.广州花卉研究中心从化基地。该试验地位于广东省广州市东北面，地理坐标东经113
°
17
′
—114
°
04
′
，北纬23
°
22
′
—23
°
56
′
，属亚热带季风气候，气候温和，雨量充沛。全年平均气温21.6℃，年降雨量1892.2毫米，年日照时数1588.9小时。
21.2、试验材料
22.供试桔全爪螨采自岭南花卉市场，从红掌叶片上挑取大小一致、行动活泼的若螨100头。
23.离体红掌叶片采自广州花卉研究中心从化基地生产示范区的长势良好的小娇红掌，剪取健康成熟度相近、大小一致、留约1厘米叶柄的叶片，用无菌水清洗后自然晾干，于体式显微镜下确认无桔全爪螨为害。
24.一次性塑料培养皿规格为90
×
15mm。封口膜为购自生工生物工程(上海)股份有限公司的parafilm封口膜(2in x 250ft)，该封口膜具有保湿透气的特点，可有效防止桔全爪螨外逃和叶片干枯。
25.3、试验方法
26.将离体红掌叶片叶背面朝下置于培养皿内(图2)，每培养皿放1叶片，每叶片上挑入1头桔全爪螨若螨，用封口膜密封培养皿后放入温度28
±
1℃、相对湿度65％～75％、光周期l/d＝14/10h的人工气候箱中进行培养。待发育为成螨时，及时淘汰雄成螨，留下雌成螨，记录每天产卵量至雌成螨死亡，并留取部分第一代卵继续饲养至成螨以记录其发育历期。
27.4、结果与分析
28.由表1可知，若螨刚发育为雌成螨的当天不产卵，于第2天开始每天产卵3～4粒，多则5粒；成螨期约为7～9d；每雌总产卵量达22～29粒。留取部分第一代卵继续饲养至成螨以记录其发育历期，结果表明以小娇红掌叶片为食的桔全爪螨，其发育历期从卵期、幼螨期、若螨期、成螨期分别为5.56、1.42、2.52、8.40d，总寿命约为17.90d(表2)，桔全爪螨卵期、幼螨、若螨、蜕皮、成螨照片见图1。
29.表1桔全爪螨产卵量统计
[0030][0031]
表2桔全爪螨发育历期
[0032][0033]
桔全爪螨各发育历期形态特征如下：
[0034]
卵：直径133～160μm，扁球形，初产时为鲜红色，发育后期变白。卵顶中央有刚毛状卵柄，柄端有10～12条细丝，向四周散射伸出，附着于产卵处。其主要分布在红掌叶正面的叶脉上、叶脉附近、叶边缘卷曲处。
[0035]
幼螨：体长180～290μm，初孵时淡红色，后渐褪色，足3对。
[0036]
若螨：若螨形状色泽均同成螨相似，但个体略小，足4对。幼螨第一次蜕皮则为前若螨，第二次蜕皮则为后若螨。后若螨再蜕皮则为成螨。蜕皮为白色。
[0037]
成螨：雌成螨体广卵圆形，背面隆起，侧面呈半球形，紫红色，背部有红色疣状突起，背毛呈刚毛状，着生在疣突上，足4对；雄成螨体小于雌成螨，腹末略呈楔形，橘红色或棕褐色，足略长于雌成螨。
[0038]
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。