一种闭鞘姜离体培养与快速繁殖方法

本发明涉及了闭鞘姜培育，尤其涉及一种闭鞘姜离体培养与快速繁殖方法。

背景技术：

1、闭鞘姜(hellenia speciosa)为闭鞘姜科(costaceae)闭鞘姜属(hellenia)多年生草本植物，国内野生资源主要分布于海南、广东、广西、云南等热带亚热带地区。喜温暖湿润环境，其嫩茎似笋，遇雨季长势旺，故又称为“雷公笋”。闭鞘姜作为一种野生蔬菜，常用来腌制或鲜菜食用均受欢迎；该资源富含甾类、萜类、黄酮类等化合物，具有降糖活性、抗炎解热、抗菌护肝作用；此外，闭鞘姜红色革质状穗状花序独特雅致，可作鲜切花、绿化等，是极具应用价值与开发前景的一类野生资源。

2、现有技术：红闭鞘姜其繁殖主要依靠分切根状茎进行营养繁殖，繁殖速度慢，生产成本高，种质品质易退化，导致栽培规模难以扩大。并且以茎和根茎片为外植体，消毒灭菌难度大，污染率高。

3、为了解决上述问题，申请号2020106426747的专利公开了一种红闭鞘姜愈伤诱导和植株再生的方法，包括如下步骤：1)外植体的消毒和愈伤诱导；2)愈伤增殖培养；3)丛生芽的诱导和增殖培养；4)生根壮苗培养。该发明通过选用红闭鞘姜未成熟花序苞片内的小花作为外植体，简化常规的组织培养消毒程序，选择改良ms培养基代替ms培养基，在连续光照下进行丛生芽的诱导和增殖培养及生根壮苗培养，显著提高了红闭鞘姜的愈伤诱导率。但是上述技术方案需要采用红闭鞘姜的新鲜植株，不便于长途运输及受季节限制，其培育范围受到很大的限制。

技术实现思路

1、本发明的目的是为了克服现有技术的不足，提供一种野生资源闭鞘姜离体培养与快速繁殖方法，采用闭鞘姜种子作为外植体，进行培养和繁殖，发芽率高，能够显著提高闭鞘姜的繁殖效果。

2、本发明涉及的一种闭鞘姜离体培养与快速繁殖方法，包括以下步骤：

3、s1、对闭鞘姜种子进行消毒处理；

4、s2、以ms+naa0.2 mg/l作为基础培养基加入2.0mg/l-4.0mg/l的6-ba，诱导闭鞘姜种子发芽；

5、s3、采用细胞分裂素对闭鞘姜进行不定芽增殖；

6、s4、采用生长激素刺激闭鞘姜生根壮苗；

7、在步骤s1中，对闭鞘姜种子进行消毒处理包括，以闭鞘姜种子作为外植体，纱布将种子包好，自来水冲洗干净，洗洁精稀释液摇荡1min，自来水冲洗，沥干水后在超净工作台上，无菌水冲洗3次，75％酒精处理15s，无菌水冲洗1次；用5.0％naclo浸泡摇晃，摇晃时间8-12min，无菌水冲洗5次；步骤s2，将消毒后的种子接种至以ms+naa 0.2mg/l作为基本培养基，添加不同6-ba浓度梯度，设置2.0、3.0和4.0mg/l处理，诱导闭鞘姜种子发芽。步骤s3所述细胞分裂素配方为以ms+naa 0.2mg/l作为基本培养基，添加不同细胞分裂素6-ba2.0mg/l、tdz 2.0mg/l和kt 2.0mg/l，筛选出适宜细胞分裂素为6-ba，进一步探索细胞分裂素6-ba不同浓度配比对闭鞘姜不定芽增殖影响，包括，1.0、2.0、3.0、4.0和5.0mg/l6-ba；步骤s4所述生长激素以ms+iba0.5 mg/l作为基本培养基并添加不同naa浓度梯度，设置1.0、2.0、3.0、4.0和5.0mg/l处理。

8、进一步地，在步骤s1中，用5.0％naclo浸泡摇晃，摇晃时间为8min，污染率、发芽势和发芽率分别为11.11％、34.96％和90.24％。

9、进一步地，在步骤s2中，以ms+naa0.2 mg/l作为基础培养基加入6-ba，加入的6-ba的含量为2.0mg/l，增殖系数为4.97，鲜重达2.27g。

10、进一步地，所述细胞分裂素2.0mg/l-3.0mg/l6-ba，增殖系数达6.10-6.23。

11、进一步地，所述生长激素包括1.0mg/l-5.0mg/l的naa，添加naa 1.0mg/l，生根率、根数、最长根长、株高达到最大值，分别为99.26％、5.53条、7.51cm和7.53cm。

12、本发明的有益之处在于：

13、1.采用闭鞘姜种子作为外植体，由于种子的胚芽部分被种皮包裹，在通过酒精以及naclo消毒的过程中，能够避免对胚芽部分的破坏，种子的发芽率达到90％以上，能够克服现有技术中只能通过活体植株实现对闭鞘姜的培育的缺陷，闭鞘姜种子便于运输，方便规划培育场地，扩展培育范围。

14、2.培育过程基于ms培养基，ms培养基是目前使用最普遍的培养基。其具有较高的无机盐浓度，能够保证组织生长所需的矿质营养还能加速愈伤组织的生长，并且市面上有成熟的产品，无需单独配置，操作简单，成本低。

15、3.本发明中的外植体、消毒方法、细胞分裂素和生长激素均是根据闭鞘姜种子的特点进行的首创，闭鞘姜种子的操作难度低，不易被破坏，培育环境易控制。

16、为让本发明的上述和其他目的、特征和优点能更明显易懂，下文特举较佳实施例，并配合，作详细说明如下。

技术特征：

1.一种闭鞘姜离体培养与快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的闭鞘姜离体培养与快速繁殖方法，其特征在于，在步骤s1中，用5.0％naclo浸泡摇晃，摇晃时间为8min。

3.根据权利要求1所述的闭鞘姜离体培养与快速繁殖方法，其特征在于，在步骤s2中，以ms+naa0.2mg/l作为基础培养基加入6-ba，加入的6-ba的含量为2.0mg/l。

4.根据权利要求1所述的闭鞘姜离体培养与快速繁殖方法，其特征在于，在步骤s3中，所述细胞分裂素为2.0mg/l-3.0mg/l的6-ba。

5.根据权利要求1所述的闭鞘姜离体培养与快速繁殖方法，其特征在于，在步骤s4中，所述生长激素包括naa1.0mg/l+iba0.5mg/l。

技术总结
本发明涉及的一种：闭鞘姜培育技术领域，尤其涉及一种闭鞘姜离体培养与快速繁殖方法，种子消毒：纱布将种子包好，自来水冲洗干净，洗洁精稀释液摇荡1min，自来水冲洗，沥干水后在超净工作台上，无菌水冲洗3次，75％酒精处理15s，无菌水冲洗1次；用5.0％NaClO浸泡摇晃，摇晃时间8‑12min，无菌水冲洗5次；种子萌发和芽诱导培养；芽增殖继代培养；生根壮苗培养。本发明需要少量的种子进行无菌材料的获得试验；培养基配方简单、成分来源广泛、易于操作和配制；种苗的繁育不受时间季节的限制可周年生产。本发明具有资源离体培养与快速繁殖效果较好的特点。在珍稀植物闭鞘姜的开发利用工作中具有较高的实用价值。

技术研发人员：郑道君,戚华沙,王春梅,孙秀秀,夏腾飞,陈业光,陈加利,陈宣
受保护的技术使用者：海南省农业科学院热带园艺研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15