专利名称：：白菜花与绿菜花的杂种新品系试管苗的组织培养快繁方法
技术领域：
：本发明涉及一种植物的生物技术育苗方法。绿菜花(BrassicaoleraceaVaritalcaplanch)因其颜色碧绿及很高的营养价值被推崇为名贵蔬菜。但是绿菜花也因其采收后易开花，保鲜、储藏、运输困难及产量低、口感差等缺点而阻碍其种植业的发展。而白菜花虽营养价值低色泽不鲜艳，但其易保鲜、储藏、运输且产量高。于是发明者将上述两者的基因重组结合致使其优良的园艺性状迭加，培育出一种克服了上述两种菜花缺点并兼有两种菜花优点的新菜花品系。但是该新品系的基因型是杂合体，通过有性繁殖获得的种子基因发生分离则改变了性状，因此不能用种子繁殖。本发明的目的在于提供一种利用组织培养技术快速无性繁殖绿菜花与白菜花杂交出的新品系试管苗的方法以及试管苗工厂化生产的工艺。本发明的目的可通过以下措施来实现一种白菜花与绿菜花的杂种新品系试管苗的组织培养快繁方法，其特征在于①制备白菜花与绿菜花的杂种新品系外植体，②不定芽分化诱导培养将外植体接种在基本培养基中加有0.5～6.0mg/L分裂素和0.1～1.0mg/L生长素，且分裂素/生长素＝1/1～60/1的不定芽分化诱导培养基中，于培养室内培养约一个月，将生成的不定芽移入与上述成分相同的芽扩繁培养基中培养，③芽生长培养将不定芽转入基本培养基中加有0.1～1.0mg/L分裂素、0.1～1.0mg/L生长素、0.5～1.0mg/L赤霉素，且分裂素/生长素＝1/10～10/1的生长培养基中，于培养室内培养约一个月，④培育试管苗，将从基部剪断的无根试管苗插入基本培养基中加有0.01～0.5mg/L生长素的生根培养基中，于培养室内培养10～15天。最好不定芽分化诱导培养基＝MS或B5+BA1.0～2.0mg/L+NAA0.1～0.5mg/L，且BA/NAA＝2/1～20/1；芽生长培养基＝MS或B5+KT0.2～1.0mg/L+IAA0.2～1.0mg/L，且KT/IAA＝1/5～5/1；生根培养基＝1/2MS或1/2B5+NAA0.015～0.15mg/L。一种白菜花与绿菜花的杂种新品系试管苗的组织培养快繁方法，其特征在于①制备白菜花与绿菜花的杂种新品系外植体，②愈伤组织诱导培养将外植体接种在基本培养基中加有0.05～0.5mg/L分裂素、0.5～4.0mg/L生长素，且分裂素/生长素＝1/80～1/1的愈伤组织诱导培养基中，于培养室内培养约一个月，将生成的愈伤组织移入与上述相同成分的继代培养基中培养约一个月，③愈伤组织分化芽培养将愈伤组织剪切成小块转入基本培养基中加有0.5～4.0mg/L分裂素、0.1～0.5mg/L生长素、0.5～1.0mg/L赤霉素，且分裂素/生长素＝1/1～40/1的愈伤组织分化培养基中，于培养室内培养约一个月，将生成的不定芽移入与上述不定芽诱导培养基相同成分的芽扩繁培养基中培养。④芽生长培养将不定芽转入基本培养基中加有0.1～1.0mg/L分裂素、0.1～1.0mg/L生长素、0.5～1.0mg/L赤霉素，且分裂素/生长素＝1/10～10/1的生长培养基中，于培养室内培养约一个月，⑤培育试管苗将从基部剪断的无根试管苗插入基本培养基中加有0.01～0.5mg/L生长素的生根培养基中，于培养室内培养10～15天。最好愈伤组织诱导培养基＝MS或B5+BA0.1～0.25mg/L+NAA1.0～2.0mg/L，且BA/NAA＝1/20～1/4，愈伤组织分化培养基＝MS或B5+BA1.0～2.0mg/L+NAA0.1～0.5mg/L+GA0.5～1.0mg/L，且BA/NAA＝2/1～20/1，芽生长培养基＝MS或B5+KT0.2～1.0mg/L+IAA0.2～1.0mg/L，且KT/IAA＝1/5～5/1，生根培养基＝1/2MS或1/2B5+NAA0.015～0.15mg/L。一种白菜花与绿菜花的杂种新品系试管苗的组织培养快繁方法，其特征在于①制备白菜花与绿菜花的杂种新品系外植体，②愈伤组织诱导培养将外植体接种在上述愈伤组织诱导培养基中，于培养室内培养约一个月，③胚状体诱导培养；将外植体切口上的愈伤组织转入基本培养基中加有0.2～2.0mg/L分裂素、0～0.2mg/L生长素及500mg/L水解乳蛋白，且分裂素/生长素＝1/1～2/0胚状体诱导培养基中，于培养室内培养约一个月，④芽生长和生根培养将胚状体接种到芽生长培养基中，于培养室内培养。最好胚状体诱导培养基＝MS或B5+BA0.5～1.0mg/L+NAA0～0.1mg/L+HL500mg/L，且BA/NAA＝5/1～1/0。一种将上述方法培育出的试管苗工厂化生产的方法，其特征在于①将试管苗打开棉塞炼苗一周，②移栽在温室内的蛭石、珍珠岩或土∶砂＝1∶3的混合土壤中，③在温室中约一个月再定植大田中。最好温室的湿度在70～80％、温度在15～20℃。本发明主要是从培育出的新品系植株上取其叶片、幼芽、幼茎及花蕾等组织器官进行体外组织培养得到试管苗以及试管苗工厂化生产的工艺。本发明方法工艺流程如图1。本发明的具体工艺过程如下一、外植体的制备从白菜花与绿菜化杂交出的新品系植株上取叶片、幼芽、幼茎、幼根及花蕾中的一种组织器官，用75％乙醇和0.1％氯化汞消毒，再用无菌水冲洗。然后在超净工作台上将取下的植株部分剪切成小块即为外植体备用。二、试管苗的制备利用植物组织培养技术可以有三种方法生产试管苗即诱导愈伤组织方法，直接诱导不定芽方法及诱导胚状体方法。1、诱导愈伤组织方法将外植体接种在愈伤组织诱导培养基上。该愈伤组织诱导培养基包括有基本培养基和激素。本发明所采用的基本培养基为MS或B5，这两种培养基的成分如下表表1MS和B5培养基的成分(mg/L)试剂MSB5NH4NO31650--KNO319002500CaCl2·2H2O440150MgSO4·7H2O370250KH2PO4170--(NH4)2SO4--134NaH2PO4·H2O--150FeSO4·7H2O27.827.8Na2EDTA37.337.3KI0.830.75H3BO36.23.0MnSO44H2O22.3--MnSO4·H2O--10ZnSO4·7H2O8.62.0Na2MoO4·2H2O0.250.25CuSO4·5H2O0.0250.025CoCl2·6H2OO.0250.025肌醇100100烟酸0.51.0甘氨酸2.0--盐酸硫胺0.110.0盐酸吡哆素0.51.0蔗糖3000030000琼脂80008000PH5.85.8上表中包括的无机营养物质是生命活动的基本物质，也是植物新陈代谢活动的主要成分。上表包括的碳源为培养基提供能量并调节渗透压。上表包括的有机成分是植物代谢必须的调节剂及核酸代谢的原料，上表包括的琼脂起支持作用。激素在培养基中含量很少但起的作用很大，它调控细胞的分裂和生长以及调控细胞的愈伤组织产生和芽根的分化。本发明所用的激素包括有细胞分裂素和生长素两大类，其中细胞分裂的同类激素有6卞基嘌呤(BA)、激动素(KT)、玉米素(ZT)；生长素的同类激素有萘乙酸(NAA)、吲哚乙酸(IAA)、吲哚丁酸(IBA)2.4-D。分裂素在培养基中所占的比例为0.05～0.5mg/L，生长素在培养基所占的比例为0.5～4.0mg/L，且分裂素与生长素的比例为1/80～1/1。最佳的愈伤组织诱导培养基＝MS或B5+BA0.1～0.25mg/L+NAA1.0～2.0mg/L，且BA/NAA＝1/20～1/4。接种在上述培养基中的外植体在培养室内培养。一个月左右即在切面产生许多愈伤组织，将愈伤组织转入愈伤组织继代培养基中(该培养基成分、比例与愈伤组织诱导培养基相同)进行增殖培养约一个月，然后将愈伤组织剪切成小块转入愈伤组织分化培养基中。该培养基的基本培养基为MS或B5，另外还加有细胞分裂素、生长素和促进芽生长的其它调节成分赤霉素(GA)。它们在培养基中所占的浓度依次为0.5～4.0mg/L、0.1～0.5mg/L及0.5～1.0mg/L，且分裂素与生长素的比例为1/1～40/1。最佳的愈伤组织分化培养基＝MS或B5+BA1.0～2.0mg/L+NAA0.1～0.5mg/L+GA0.5～1.0mg/L，且BA/NAA＝2/1～20/1。愈伤组织在上述培养基中于培养室内培养，约一个月即在愈伤组织上分化出许多不定芽。2、直接诱导不定芽方法将外植体直接接种在不定芽诱导培养基上。该培养基的基本培养基为MS或B5，另外还加有分裂素(BA、KT、ZT)、生长素(NAA、IAA)和其它调节成分(GA)。它们在培养基所占的浓度依次为0.5～6.0mg/L、0.1～1.0mg/L，且分裂素与生长素的比例为1/1～60/1.最佳的不定芽分化诱导培养基＝MS或B5+BA1.0～2.0mg/L+NAA0.1～0.5mg/L，且BA/NAA＝2/1～20/1。外植体在上述培养基中于培养室内培养约一个月在外植体的切口上长出许多不定芽。不定芽的扩增培养将上述从愈伤组织分化的芽或从外植体直接分化的芽接种在芽扩繁培养基上。该培养基与不定芽诱导培养基的成分及比例相同。在上述培养基中于培养室内培养芽不断地扩增，其数量为10n(n为继代扩繁的代数)一个月可扩繁一代，即一个芽经一年的扩繁可达1012个芽。芽生长培养当需要生产苗术时，提前一个月将不定芽转入生长培养基中。该生长培养基的基本培养基为MS或B5，另外还加有细胞分裂素(BA、KT)和生长素(NAA、IAA)及其它调节成分(GA)，它们在培养基所占的浓度依次为0.1～1.0mg/L、0.1～1.0mg/L及0.5～1.0mg/L，且分裂素与生长素的比例为1/10～10/1。最佳的生长培养基＝MS或B5+KT0.2～1.0mg/L+IAA0.2～1.0mg/L，且KT/IAA＝1/5～5/1。不定芽在上述培养基中于培养室内培养一个月左右生长为3～6厘米无根试管苗。培育试管苗将无根试管苗从基部剪断插入生根培养基中。该培养基的基本培养基仍为MS或B5，只是各组分的含量是上述各配方中的1/2。激素部分不采用细胞分裂素，只采用生长素(NAA、IAA、IBA)，其在培养基中所占的浓度为0.01～0.5mg/L。最佳的生根培养基＝1/2MS或1/2B5+NAA0.015～0.15mg/L。上述无根试管苗在该培养基中于培养室内培养10～15天即可生出许多根成为完整的试管苗产品。3、诱导胚状体方法将外植体接种在上述第一方法的愈伤组织诱导培养基中。外植体在培养其中于培养室培养一个月左右，在外植体的切口上长出许多愈伤组织后将其转入胚状体诱导培养基中。该培养基的基本培养基为MS或B5，另外还加有细胞分裂素(BA、KT、ZT)、生长素(NAA、IAA)和其它调节成分水解乳蛋白(HL)。它们在培养基中所占的浓度依次为0.2～2.0mg/L。0～0.2mg/L，且细胞分裂素与生长素的比例为1/1～2/0。最佳的胚状体诱导培养基＝MS或B5+BA0.5～1.0mg/L+NAA0～0.1mg/L+HL500mg/L，且BA/NAA＝5/1～1/0。在上述培养基中于培养室培养一个月左右原来的薄壁细胞愈伤组织表面分化出许多颗粒状的不同发育阶段的胚状体，即为胚状体诱导。将上述胚状体剥离下来接种到生长培养基中，其与上述的生长培养基相同。在该培养基中于培养室培养很快长出一个具有根的完整试管苗。三、试管苗的移栽将试管苗打开棉塞炼苗一周，然后移栽在温室内的蛭石、珍珠岩或土∶砂＝1∶3的混合土壤中，温室的温度在15～20℃、湿度在70～80％为最佳。经过一个月即可定植于大田中。本发明具有如下优点1、扩繁量大速度快，可在短期内繁殖大量苗木。2、生产的试管苗脱病毒、无病害。3、试管苗种植后生产旺盛、病害少、产量高。4、能保持遗传稳定性，植物的基因型不变。5、利用本发明的方法得到的新品系营养价值高，适合性好、食用后有利于健康。6、胚状体途径可进一步生产人工种子，即把胚状体外面包上一层具有营养和保护双重功能的人工种皮则可播种到土壤中。图面说明如下图1是本发明工艺流程简图。图2是三种蔬菜花球形态比较图片。图3是三种蔬菜花球纵切面形态比较图片。在图2和图3所示的图片中，中间一个为新品系华缘I号。例1外植体制备从白菜花(荷兰雪球)与绿菜花(绿岑)杂交出的新品系植株华绿I号上分别取其幼根、幼茎、幼芽、花蕾及叶片等组织，用75％乙醇消毒1分钟，用0.1％氯化汞消毒5～10分钟，再用无菌水冲洗5次。然后在超净工作台上将取下的组织剪切成约5mm的小块即为外植体。例2诱导愈伤组织途径培育试管苗将例1制得的外植体接种在愈伤组织诱导培养基上。该培养基的配方＝MS+0.1mg/LBA+2.0mg/LNAA。于25℃左右的温度、光强2000勒克斯、光照约10小时的培养室进行培养。一个月后将切面产生的愈伤组织转入与上述培养基相同的愈伤组织继代培养基中增殖培养一个月。然后将愈伤组织剪切成约5mm的小块，植入愈伤组织分化培养基中。该培养基的配方＝MS+1.0mg/LBA+0.5mg/LIAA+0.5mg/LGA。于25℃左右的温度、光强2000勒克斯、光照10小时的培养室进行培养，一个月即在愈伤组织上分化出来许多不定芽。将不定芽接种在芽扩繁培养基上。该培养基与不定芽诱导培养基相同，该培养基的配方＝MS+2.0mg/LBA+0.1mg/LNAA+0.5mg/LGA。于25℃左右温度、光强2000勒克斯，光照10小时的培养室进行培养扩增。需要生产苗术时，提前一个月将不定芽转入生长培养基中。该生长培养基的配方＝MS+0.1mg/LBA+0.2mg/LIAA。于25℃温度、光强2000勒克斯、光照10小时的培养室进行培养，一个月生长为3～6厘米无根试管苗。将无根试管从基部剪断插入生根培养基中。该生根培养基的配方＝1/2MS+0.015mg/NAA。于25℃温度、光强2000勒克斯、光照10小时的培养室进行培养，15天即生出有4～6个根的试管苗。例3重复例2的操作，其中愈伤组织诱导培养基＝B5+0.25mg/LBA+1.0mg/LNAA。愈伤组织分化培养基＝B5+2.0mg/LBA+0.2mg/LIAA+1.0mg/lGA不定芽诱导培养基＝B5+1.0mg/LBA+0.5mg/LNAA+1.0mg/LGA生长培养基＝B5+0.5mg/LBA+1.0mg/LIAA生根培养基＝1/2B5+0.15mg/LNAA例4重复例2的操作，其中愈伤组织诱导培养基＝MS+0.2mg/LKT+4.0mg/LIAA愈伤组织分化培养基＝MS+1.0mg/LKT+0.5mg/LIAA+0.5mg/LGA不定芽诱导培养基＝MS+2.0mg/LKT+1.0mg/LIAA+0.5mg/LGA生长培养基＝MS+0.2mg/LKT+1.0mg/LIAA生根培养基＝1/2MS+0.01mg/LNAA例5小时的培养室进行培养扩增。需要生产苗木时提前一个月将不定芽转入生长培养基中。该生长培养基的配方＝MS+0.1mg/LBA+0.2mg/LIAA，于25℃温度，光强2000勒克斯、光照约10小时的培养室进行培养，一个月生长为3～6厘米无根试管苗。将无根试管苗从基部剪断插入生根培养基中。该生根培养基的配方＝1/2MS+0.015mg/LNAA，于25℃温度、光强2000勒克斯、光照约10小时的培养室进行培养，15天即生出有4～6个根的试管苗。例9重复例8的操作，其中不定芽诱导培养基＝B5+1.0mg/LBA+0.5mg/LIAA+0.5mg/LGA生长培养基＝B5+0.5mg/LBA+1.0mg/LIAA+1.0mg/LGA生根培养基＝1/2B5+0.1mg/LIAA例10取外植体接种在愈伤组织诱导培养基中，该培养基的配方＝MS+0.5mg/LKT+1.0mg/L2.4-D，于25℃温度、光强2000勒克斯、光照约10小时的培养室培养一个月，将外植体切口上的愈伤组织转入胚状体诱导培养基中，该培养基的配方＝MS+0.5mg/LBA+0.1mg/LNAA+500mg/LHL，于25℃温度、光强2000勒克斯、光照约10小时的培养室进行培养。一个月后原来的薄壁细胞愈伤组织表面分化出许多胚状体。将这些胚状体剥离下来按种到生长培养基中，该培养基的配方＝MS+1.0mg/LKT+0.1mg/LNAA+0.5mg/LGA，于25℃温度、光强2000勒克斯、光照约10小时的培养室进行培养很快便长出有根的完整试管苗。例11重复例10的操作，其中愈伤组织诱导培养基＝B5+0.05mg/LZI+4.0mg/LIAA胚状体诱导培养基＝B5+1.0mg/LBA+500mg/LHL生长培养基＝B5+0.1mg/LBA+1.0mg/LIAA+0.5mg/LGA例12重复例10的操作，其中愈伤组织诱导培养基＝MS+0.2mg/LKT+0.5mg/L2.4-D胚状体诱导培养基＝MS+1.0mg/LKT+0.2mg/LIAA+500mg/LHL生长培养基＝MS+0.2mg/LKT+0.5mg/LIAA+0.5mg/LGA例13重复例10的操作，其中愈伤组织诱导培养基＝B5+0.125mg/LZT+2.0mg/LIM胚状体诱导培养基＝B5+2.0mg/LKT+500mg/LHL生长培养基＝B5+0.5mg/LBA+0.1mg/LNAA+1.0mg/LGA例14重复例10的操作，其中愈伤组织诱导培养基＝MS+0.1mg/LBA+1.0mg/LNAA胚状体诱导培养基＝MS+0.2mg/LZT+0.1mg/LNAA+500mg/LHL生长培养基＝MS+0.1mg/LBA+0.1mg/LNAA+0.5mg/LGA例15重复例10的操作，其中愈伤组织诱导培养基＝B5+0.25mg/LBA+2.0mg/LNAA胚状体诱导培养基＝B5+1.0mg/LZT+500mg/LHL生长培养基＝B5+0.2mg/LKT+0.1mg/LNAA+1.0mg/LGA例16试管苗的移栽将上述试管苗打开棉塞炼苗一周，然后移栽在温室内的蛭室中，经过一个月即可定植于大田中。例17重复例16的操作，其中将试管苗移栽在15～20℃温度、温度在70～80％的温室内的珍珠岩中。例18重复例17的操作，其中珍珠岩改换成土∶砂＝1∶3的混合土壤中。新品系植株的鉴别特征1、花球嫩绿色。2、花球紧密、坚实，由肉质化茎和幼花蕾组成。3、花蕾发育不全，无花萼、花蕊分化，花梗缩短变粗，肉质化。4、花球采收后不开花。下表为新品系植株(华绿I号)芽扩繁增殖统计表。实验组扩繁芽级数第一代第二代第三代第五代扩繁率I1972682767527.6×104II1085790110012050012×104III111120119513051113×104IV550489510050026010×104根据上表可归纳出扩繁量的计算公式W≈m×10n，其中W为扩繁值，m为用于扩繁的芽的基数，n为继代扩繁培养的代数。由于扩繁是以几何级数增加的，因此能实现试管苗工厂化生产。三种蔬菜花球的形态特征及经济性状比较性状白菜花绿菜花绿华9601花球形状球形半球形球形主花茎肥厚肉质化肉质化肥厚肉质化花梗″细长无肉质化缩短、肉质化花蕾未发育、无花蕾已发育、具典型花蕾结构花蕾发育不全花萼无发育完善未发育紧密度紧密松散紧密坚实度坚实松散坚实颜色白色深绿色嫩绿色花茎切面颜色白色深绿色嫩绿色采收后开花情况不开花易开花(2天即开花)长期不开花保鲜贮藏易保鲜贮藏不易保鲜贮藏易保鲜贮藏运输耐运输不能远距高运输耐运输菜肴不佳艳丽、上等菜肴艳丽、上等菜肴菜肴适口性脆嫩、味浅软而粗糙、味浓脆嫩、味浓白菜花、绿菜花、华绿I号三种菜花营养成分比较</tables>从上表可见新品系“华绿I号”的营养成分基本与绿菜花相当。对新品系“华绿I号”试管苗进行田间性状观察表明，植株生长整齐，现蕾期在熟期均基本一致，植株形态、叶型及花球颜色、大小和重量基本一致。由此说明其遗传稳定性较好。随机抽样10标植株取根尖进行染色体数目检查，10株均为2n＝2X＝18，可见其遗传基因型基本稳定。下表为白、绿菜花试管苗及种子植生苗与新品系试管苗的经济性状，比较表</tables></tables>注1.表中值为多次实验的平均值。由于新品系华绿I号难以获得大量种子实生苗，因此以绿菜花和白菜花作为对照实验观察试管苗的经济性状。从上表统计结果可见，试管苗的植株高度、开展度、主花球大小、重量均有明显增加，由此可推导出新品系试管苗每亩可比种子实生苗增产30％左右。权利要求1.一种白菜花与绿菜花的杂种新品系试管苗的组织培养快繁方法，其特征在于①制备白菜花与绿菜花的杂种新品系外植体，②不定芽分化诱导培养将外植体接种在基本培养基中加有0.5～6.0mg/L分裂素和0.1～1.0mg/L生长素，且分裂素/生长素＝1/1～60/1的不定芽分化诱导培养基中，于培养室内培养约一个月，将生成的不定芽移入与上述成分相同的芽扩繁培养基中培养，③芽生长培养将不定芽转入基本培养基中加有0.1～1.0mg/L分裂素、0.1～1.0mg/L生长素、0.5～1.0mg/L赤霉素，且分裂素/生长素＝1/10～10/1的生长培养基中，于培养室内培养约一个月，④培育试管苗，将从基部剪断的无根试管苗插入基本培养基中加有0.01～0.5mg/L生长素的生根培养基中，于培养室内培养10～15天。2.根据权利要求1所述的白菜花与绿菜花的杂种新品系试管苗的组织培养快繁方法，其特征在于不定芽分化诱导培养基＝MS或B5+BA1.0～2.0mg/L+NAA0.1～0.5mg/L，且BA/NAA＝2/1～20/1，芽生长培养基＝MS或B5+KT0.2～1.0mg/L+IAA0.2～1.0mg/L，且KT/IAA＝1/5～5/1，生根培养基＝1/2MS或1/2B5+NAA0.015～0.15mg/L。3.一种白菜花与绿菜花的杂种新品系试管苗的组织培养快繁方法，其特征在于①制备白菜花与绿菜花的杂种新品系外植体，②愈伤组织诱导培养将外植体接种在基本培养基中加有0.05～0.5mg/L分裂素、0.5～4.0mg/L生长素，且分裂素/生长素＝1/80～1/1的愈伤组织诱导培养基中，于培养室内培养约一个月，将生成的愈伤组织移入与上述相同成分的继代培养基中培养约一个月，③愈伤组织分化芽培养将愈伤组织剪切成小块转入基本培养基中加有0.5～4.0mg/L分裂素、0.1～0.5mg/L生长素、0.5～1.0mg/L赤霉素，且分裂素/生长素＝1/1～40/1的愈伤组织分化培养基中，于培养室内培养约一个月，将生成的不定芽移入与上述不定芽诱导培养基相同成分的芽扩繁培养基中培养。④芽生长培养将不定芽转入基本培养基中加有0.1～1.0mg/L分裂素、0.1～1.0mg/L生长素、0.5～1.0mg/L赤霉素，且分裂素/生长素＝1/10～10/1的生长培养基中，于培养室内培养约一个月，⑤培育试管苗将从基部剪断的无根试管苗插入基本培养基中加有0.01～0.5mg/L生长素的生根培养基中，于培养室内培养10～15天。4.根据权利要求3所述的白菜花与绿菜花的杂种新品系试管苗的组织培养快繁方法，其特征在于愈伤组织诱导培养基＝MS或B5+BA0.1～0.25mg/L+NAA1.0～2.0mg/L，且BA/NAA＝1/20～1/4；愈伤组织分化培养基＝MS或B5+BA1.0～2.0mg/L+NAA0.1～0.5mg/L+GA0.5～1.0mg/L，且BA/NAA＝2/1～20/1；芽生长培养基＝MS或B5+KT0.2～1.0mg/L+IAA0.2～1.0mg/L，且KT/IAA＝1/5～5/1；生根培养基＝1/2MS或1/2B5+NAA0.015～0.15mg/L。5.一种白菜花与绿菜花的杂种新品系试管苗的组织培养快繁方法，其特征在于①制备白菜花与绿菜花的杂种新品系外植体，②愈伤组织诱导培养将外植体接种在愈伤组织诱导培养基中，于培养室内培养约一个月，③胚状体诱导培养；将外植体切口上的愈伤组织转入基本培养基中加有0.2～2.0mg/L分裂素、0～0.2mg/L生长素及500mg/L水解乳蛋白，且分裂素/生长素＝1/1～2/0的胚状体诱导培养基中，于培养室内培养约一个月，④芽生长和生根培养将胚状体接种到芽生长培养基中，于培养室内培养。6.根据权利要求5所述的一种白菜花与绿菜花的杂种新品系试管苗的组织培养快繁方法，其特征在于胚状体诱导培养基＝MS或B5+BA0.5～1.0mg/L+NAA0～0.1mg/L+HL500mg/L，且BA/NAA＝5/1～1/0。7.一种将上述方法培育出的试管苗工厂化生产的方法，其特征在于①将试管苗打开棉塞炼苗一周，②移栽在温室内的蛭石、珍珠岩或土∶砂＝1∶3的混合土壤中，③在温室中约一个月再定植大田中。8.根据权利要求7所述的试管苗工厂化生产的方法，其特征在于温室的湿度在70～80％、温度在15～20℃。全文摘要一种白菜花与绿菜花的杂种新品系试管苗的组织培养快繁方法,它是将白菜花与绿菜花的杂种新品系制成外植体,分别在不定芽分化诱导培养基、愈伤组织诱导和分化培养基以及胚状体诱导培养基中培养,得到的不定芽再于芽生长培养基和生根培养基中培养获得完整试管苗。将该试管苗移栽在温室的蛭石、珍珠岩及砂土中,经一个月便可植入大田中。采用本发明方法可快速大量繁殖营养价值高、易保鲜的新品系幼苗,实现试管苗的工厂化生产。文档编号A01H4/00GK1180744SQ96119520公开日1998年5月6日申请日期1996年10月25日优先权日1996年10月25日发明者王关林申请人:辽宁师范大学生物工程研究所