述在2%次氯酸钠溶液中浸泡的时间为12min ;步骤(2)所得种子的发芽率为43.6%，污染率为9.6%。
[0037]实施例4
[0038]与实施例1相比，区别仅在于，步骤(3)所述培养基组成为:WPM培养基，TDZ0.2mg/L，吲哚乙酸lmg/L，蔗糖30mg/L，琼脂7.5mg/L ;该步骤丛生芽诱导率为74%，繁殖系数为2.3。
[0039]实施例5
[0040]与实施例1相比，区别仅在于，步骤(4)所述培养基组成为:WPM培养基，TDZ0.lmg/L,吲噪乙酸0.5mg/L，赤霉素3mg/L，鹿糖30mg/L，琼脂7.5mg/L ;该步骤单株可达2.5?3cm，繁殖系数为4.3。
[0041]根据以上实施例所得结果可知，本发明提供的方法可以成功实现露珠杜鹃的组培快速繁殖。
[0042]对比例I
[0043]与实施例1相比，区别仅在于:步骤⑴所述在2%次氯酸钠溶液中浸泡的时间为6min ;步骤(2)所得种子的发芽率为45.5%，污染率为59.7%。
[0044]对比例2
[0045]与实施例1相比，区别仅在于:步骤(I)所述在2%次氯酸钠溶液中浸泡的时间为14min ;步骤(2)所得种子的发芽率仅为28%。
[0046]对比例3
[0047]与实施例1相比，区别仅在于:步骤⑶所述培养基中，由ZT代替TDZ ；当ZT浓度为0.lmg/L时，该步骤丛生芽的诱导率仅为8.33%，当ZT浓度为lmg/L时，该步骤丛生芽的诱导率仅为25%。
[0048]对比例4
[0049]与实施例1相比，区别仅在于:步骤⑶所述培养基中，由浓度为0.5mg/L的2ip代替TDZ ;该步骤丛生芽的诱导率仅为7.7%.
[0050]对比例5
[0051]与实施例1相比，区别仅在于:降低步骤(4)所述培养基中赤霉素的浓度；当赤霉素浓度为O时，该步骤所得丛生芽不伸长；当培养基中赤霉素浓度为lmg/L，该步骤所得丛生芽高度仅可达0.5?lcm。
[0052]对比例6
[0053]与实施例1相比，区别仅在于，步骤(5)所述基质中，由蛭石代替草炭，该步骤所得生根率仅为37.5%，根长I?1.5cm。
[0054]虽然，上文中已经用一般性说明、【具体实施方式】及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
【主权项】
1.一种露珠杜鹃组培快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)在无菌条件下，将当年的露珠杜鹃种子在75%酒精中浸泡25?35s，用无菌水洗净种子表面残留的酒精，在2%次氯酸钠溶液中浸泡8?12min，用无菌水洗净种子表面残留的次氯酸钠溶液，用无菌滤纸吸干种子表面水分，备用； (2)在无菌条件下，将经步骤(I)处理后的种子抖撒在WPM培养基上，在温度24?26°C、光照时间11?13h/d、光照强度1950?20501x的条件下进行无菌培养，种子全部萌发至无菌苗长度为2?3cm ； (3)在无菌条件下，从步骤(2)所得无菌苗上剪取I?2cm的带芽茎段接入培养基中，所述培养基包含以下成分:WPM培养基，TDZ 0.2mg/L，吲哚乙酸0.1?lmg/L ;在温度24?26°C、光照时间11?13h/d、光照强度1950?20501x的条件下进行无菌培养，至长出丛生芽； (4)在无菌条件下，取步骤(3)所得丛生芽，切割成单芽，转接到培养基上，所述培养基包含以下成分:WPM培养基，TDZ0.1?0.2mg/L，吲哚乙酸0.1?0.5mg/L，赤霉素3mg/L ;在温度24?26°C、光照时间11?13h/d、光照强度1950?20501x的条件下进行无菌培养，丛生芽增殖、伸长； (5)从经步骤(4)培养后的丛生芽中选出健康芽苗，将内有芽苗的封口培养瓶在室内放置2?3天后，每天打开培养瓶口 I?2h并重复2?3天，将芽苗移至培养瓶外，将芽苗基部的培养基洗净，移栽入基质中，所述基质由等体积的草炭与珍珠岩组成；在温度19?21°C、湿度60?70%、光照时间11?13h/d、光照强度1950?20501x的条件下进行培养，至生根。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(I)所述在2%次氯酸钠溶液中浸泡的时间为lOmin。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述培养基由以下成分组成:WPM培养基，蔗糖30mg/L，琼脂7.5mg/L。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述培养基由以下成分组成:WPM 培养基，TDZ 0.2mg/L，吲哚乙酸 0.lmg/L，蔗糖 30mg/L，琼脂 7.5mg/L。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)所述培养基由以下成分组成:WPM 培养基，TDZ 0.2mg/L，吲哚乙酸 0.lmg/L，赤霉素 3mg/L，蔗糖 30mg/L，琼脂 7.5mg/L。
6.根据权利要求1?5任意一项所述的方法，其特征在于，步骤(2)、(3)、(4)所述培养基的pH值为5.4?5.6。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤(5)所述基质的pH值为5.4?5.6。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)在无菌条件下，将当年的露珠杜鹃种子在75%酒精中浸泡30s，用无菌水洗净种子表面残留的酒精，在2%次氯酸钠溶液中浸泡lOmin，用无菌水洗净种子表面残留的次氯酸钠溶液，用无菌滤纸吸干种子表面水分，备用； (2)在无菌条件下，将经步骤(I)处理后的种子抖撒在pH5.4?5.6的培养基上，所述培养基由以下成分组成:WPM培养基，蔗糖30mg/L，琼脂7.5mg/L ;在温度25°C、光照时间12h/d、光照强度20001x的条件下进行无菌培养，种子完全萌发至无菌苗长度为2?3cm ; (3)在无菌条件下，从步骤(2)所得无菌苗上剪取长I?2cm的带芽茎段接入pH5.4?.5.6的培养基中，所述培养基由以下成分组成:WPM培养基，TDZ 0.2mg/L，吲哚乙酸0.1mg/L，蔗糖30mg/L，琼脂7.5mg/L ;在温度25°C、光照时间12h/d、光照强度20001x的条件下进行无菌培养，至长出丛生芽； (4)在无菌条件下，取步骤(3)所得丛生芽，切割成单芽，转接到pH5.4?5.6的培养基上，所述培养基由以下成分组成:WPM培养基，TDZ 0.2mg/L，吲哚乙酸0.lmg/L，赤霉素3mg/L，蔗糖30mg/L，琼脂7.5mg/L ;温度25°C、光照时间12h/d、光照强度20001x的条件下进行无菌培养，丛生芽增殖、伸长； (5)从经步骤(4)培养后的丛生芽中选出健康芽苗，将内有芽苗的封口培养瓶在室内放置3天后，每天打开培养瓶口 Ih并重复3天，将芽苗移至培养瓶外，将芽苗基部的培养基洗净，移栽入PH5.4?5.6的基质中，所述基质由等体积的草炭与珍珠岩组成；温度25°C、湿度60?70%、光照时间12h/d、光照强度20001x的条件下进行培养，至生根。
【专利摘要】本发明提供了一种露珠杜鹃组培快速繁殖方法，该方法采用组织培养技术，对种子播种出的无菌苗的带芽茎段进行丛生芽诱导，继而长成完整植物。按照本发明提供的方法进行露珠杜鹃的组织培养，露珠杜鹃种子的萌发率可达45～60％，同时污染率可以控制在35％以下；在丛生芽的诱导阶段，20左右即开始出现不定芽，一个半月后，丛生芽明显增多，诱导率最高可达100％；在丛生芽的繁殖和伸长培养阶段，芽苗生长健壮，单株可高达3cm，繁殖系数高达4.6；在生根培养阶段，15天左右即开始有根长出，40天后生根率可达85％以上，根长可至3～4cm；可以成功实现露珠杜鹃的组培快速繁殖。
【IPC分类】A01H4-00
【公开号】CN104542284
【申请号】CN201410843970
【发明人】张启翔, 郭颖, 罗乐, 程堂仁, 潘会堂, 王佳
【申请人】北京林业大学
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2014年12月30日