一种生物防治抗红景天根腐病及促生的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物防治肥的制备领域，具体涉及一种生物防治抗红景天根腐病及促 生的方法。
【背景技术】
[0002] 红景天（学名：RhodiolaroseaL.)为多年生草本植物，高10-20厘米。根粗壮， 圆锥形，肉质，褐黄色，根颈部具多数须根，根茎短，粗状，圆柱形，被多数覆瓦状排列的鳞片 状的叶，生长在海拔1800-2500米高寒无污染地带，其生长环境恶劣，因而具有很强的生命 力和特殊的适应性。红景天可作药用，能够补气清肺，益智养心，是一味作用广泛的中药，亦 有美容效果，可作护肤品，也可食用。红景天根腐病是红景天病害中危害较为严重的一种， 病原菌是Fusariumoxysporum。
[0003] 植物病理真菌主要存在于土壤中，在植物生长中感染植物，引起植物病害、造成生 产损失。因此，要从生物防治的角度消除植物真菌病害，除了杀灭植株上的病理真菌，杀灭 或抑制土壤中的病理真菌也至关重要，而使用具有生物防治功效的生物肥是实现这一目的 的有效途径。在各种生物肥中，长久以来我国应用的都是无芽孢菌类。但是无芽孢菌抗逆 性低，对于干燥高温的抵抗能力差，所以当制成液体或者吸附剂时稳定性不高。生物肥发展 的新趋势应是大力发展抗逆性高、能够长期稳定生存的芽孢杆菌。特别是芽孢杆菌能够产 生多种抗真菌物质，对植物病原菌有显著抑制作用，并且对人畜无害，也不会污染环境，将 在防治植物真菌病害中起重要作用。
[0004] 芽孢杆菌形态上呈直或者近直的杆状，好氧或者兼性厌氧，革兰氏阳性，在特定环 境条件下能产生抗逆性内生孢子。芽孢杆菌在植物中广泛定殖，被认为是公认的食品级安 全微生物（generallyregardedassafety,GRAS)。枯草芽抱杆菌是一种典型的芽孢杆菌， 产生抗菌蛋白、多肽类物质、脂类物质及beta葡聚糖酶等抗菌物质，特别是beta葡聚糖酶 等水解酶类与其抗植物病理真菌能力有密切关系，因为真菌细胞壁的组成是葡聚糖。
【发明内容】
[0005] 本发明提供了一种生物防治抗红景天根腐病及促生的方法，通过将产beta葡聚 糖酶的枯草芽孢杆菌（CICC10339)融入红景天天然菌群中，制成能够通过生物防治途径 有效抑制杀灭红景天病理真菌的生物肥。
[0006] 一种生物防治抗红景天根腐病及促生的方法，包括以下步骤：
[0007] 1)将枯草芽孢杆菌（CICC10339)进行培养，制成密度IO9?10ltlCfuAiL的高密度 菌悬液；
[0008] 2)将红景天健康枝条剪成小段进行堆肥，堆肥过程中喷施步骤1)中的高密度菌 悬液，堆肥结束后进行发酵，经发酵后得到能有效抑制杀灭红景天病理真菌的生物肥，将该 生物肥用在生物防治抗红景天根腐病及促生上。
[0009] 本发明中，将红景天健康枝条剪成小节堆肥，使所制备生物肥中的菌群即为健康 红景天植株本身天然菌群，此菌群与红景天植株协同进化生长，形成了互益共生体系，对病 害真菌有一定生物防治作用。进一步地，将能够产beta葡聚糖酶的枯草芽孢杆菌（CICC 10339)加入堆肥中，显著加强对红景天病害真菌的生物防治作用。枯草芽孢杆菌（CICC 10339)由于产beta葡聚糖酶，对红景天植株纤维有良好分解作用，为堆肥发酵过程所必 须，故能够充分融入到堆肥菌群中稳定持久地增殖。如同乳酸菌对于动物的益生作用，抑制 杀灭植物病理真菌的微生物可以称之为植物益生菌。本发明所制备生物肥中，枯草芽孢杆 菌（CICC10339)即是红景天益生菌，对红景天病理真菌有显著生物防治作用。
[0010] 步骤1)中，枯草芽孢杆菌（CICC10339)采用现有技术，来自中国工业微生物菌 种保藏管理中心（CICC)，地址：北京市朝阳区酒仙桥中路24号院6号楼；保藏日期为2007 年，菌种保持编号为10339。枯草芽孢杆菌（CICC10339)可以向中国工业微生物菌种保藏 管理中心购买。
[0011] 将枯草芽孢杆菌（CICC10339)进行培养，包括：枯草芽孢杆菌（CICC10339)的出 发密度为IO6?IO7个/mL，接种至液体培养基中接种量为1 %?5%，33°C?39°C振荡培养 20?28h，至菌液密度为IO9?10 1(lcfu/mL的高密度菌悬液。
[0012] 进一步优选，将枯草芽孢杆菌（CICC10339)进行培养，包括：枯草芽孢杆菌（CICC 10339)的出发密度为IO6?10 7个/mL，接种至液体培养基中接种量为2%?3%，36°C? 37°C振荡培养22?26h，至菌液密度为IO9?10ltlCfuAiL的高密度菌悬液。
[0013] 所述的液体培养基，以IL计，包括以下组分：
[0014]
【主权项】
1. 一种生物防治抗红景天根腐病及促生的方法，其特征在于，包括以下步骤： 1) 将枯草芽孢杆菌CICC10339进行培养，制成密度109?10 1(lCfu/mL的高密度菌悬 液； 2) 将红景天健康枝条剪成小段进行堆肥，堆肥过程中喷施步骤1)中的高密度菌悬液， 堆肥结束后进行发酵，经发酵后得到能有效抑制杀灭红景天病理真菌的生物肥，将该生物 肥用在生物防治抗红景天根腐病及促生上。
2. 根据权利要求1所述的生物防治抗红景天根腐病及促生的方法，其特征在于，步骤 1)中，将枯草芽孢杆菌CICC10339进行培养，包括：枯草芽孢杆菌CICC10339的出发密度 为106?10 7个/mL，接种至液体培养基中接种量为1 %?5%，33°C?39°C振荡培养20? 28h，至菌液密度为109?10 1(lCfu/mL的高密度菌悬液。
3. 根据权利要求2所述的生物防治抗红景天根腐病及促生的方法，其特征在于，步骤 1) 中，将枯草芽孢杆菌CICC10339进行培养，包括：枯草芽孢杆菌CICC10339的出发密度 为106?10 7个/mL，接种至液体培养基中接种量为2%?3%，36°C?37°C振荡培养22? 26h，至菌液密度为109?10 1(lCfu/mL的高密度菌悬液。
4. 根据权利要求2或3所述的生物防治抗红景天根腐病及促生的方法，其特征在于，所 述的液体培养基，以1L计，包括以下组分： 葡萄糖 11?17g; 牛肉膏 20?30g; 磷酸二氢钾 1.5?3.5g; 花生饼粉 7?13g; 调节pH= 6. 5 ?7. 5。
5. 根据权利要求4所述的生物防治抗红景天根腐病及促生的方法，其特征在于，所述 的液体培养基，以1L计，包括以下组分： 葡萄糖 14g; 牛肉膏 25g; 磷酸二氢钾 2 45g， 花生饼粉 l〇p, 调节pH= 7. 0。
6. 根据权利要求1所述的生物防治抗红景天根腐病及促生的方法，其特征在于，步骤 2) 中，堆肥过程中喷施步骤1)中的高密度菌悬液，包括：在堆肥内部温度达到30°C?34°C 时，喷施步骤1)中的高密度菌悬液，继续堆肥，待堆肥内部温度达到41°C?45°C时堆肥结 束。
7. 根据权利要求6所述的生物防治抗红景天根腐病及促生的方法，其特征在于，步骤 2)中，堆肥过程中喷施步骤1)中的高密度菌悬液，包括：在堆肥内部温度达到32°C时，喷施 步骤1)中的高密度菌悬液，继续堆肥，待堆肥内部温度达到43°C时堆肥结束。
8. 根据权利要求1所述的生物防治抗红景天根腐病及促生的方法，其特征在于，步骤
【专利摘要】本发明公开了一种生物防治抗红景天根腐病及促生的方法，包括：将枯草芽孢杆菌制成密度109～1010cfu/mL的高密度菌悬液；将红景天健康枝条剪成小段进行堆肥，堆肥过程中喷施枯草芽孢杆菌高密度菌悬液，经发酵后得到能有效抑制杀灭红景天根腐病病害菌的生物肥，将该生物肥用在生物防治抗红景天根腐病及促生上。本发明中，产beta葡聚糖酶的枯草芽孢杆菌是对红景天起抗病促生作用的植物益生菌，将其加入堆肥中，显著加强对红景天根腐病病害菌的抑制杀灭作用，并显著提高红景天根鲜重。堆肥过程处理简便，无废水排放，投资少、能耗低、易操作，易于工业化大规模生产，具有良好的经济效益和广阔的应用前景。
【IPC分类】A01N63-00, A01P3-00, A01G1-00, A01G13-00, A01P21-00
【公开号】CN104604503
【申请号】CN201510058561
【发明人】吴渊, 胡慧雯, 徐薇薇, 阮晖, 梁莹, 许丽珍, 吴孔华, 莫建平, 史金昕波, 缪丹, 俞雨, 吴盛彬, 徐腾洋
【申请人】浙江大学
【公开日】2015年5月13日
【申请日】2015年2月4日