一种颅骨瓣储存方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及医学和生物工程领域，具体涉及一种颅骨瓣的储存方法。
【背景技术】
[0002] 神经外科去骨瓣减压术是解除因脑外伤、脑出血、脑肿瘤以及大面积脑梗塞等所 致颅内高压的有效手段。但是，手术中去除骨瓣所造成的颅骨缺损，使患者失去正常颅骨的 屏障作用，并严重影响外观，对患者将来回归社会的生理和心理均造成很大影响，因此，一 般在手术后3-6月，待颅内高压完全解除，患者基本康复后，大多数患者需要接受颅骨缺损 的修补手术。
[0003] 目前，在异质材料中，钛合金相对早年的有机玻璃、硅胶等材料，其组织相容性好， 排斥反应小，在临床上已被广泛应用，但钛合金的网板仍有诸多问题：（1)起皱、变形、边缘 翘曲和网板松动等是金属特有的缺陷，尤其当其受冲击时产生的塑性变形，不仅影响美观， 而且锐利的边缘易刺破皮肤，导致钛网外露和皮肤感染；(2)非自体组织，易使患者产生心 理障碍；（3)在影像学检查时会产生伪影；(4)钛网仅覆盖颅骨外表面，在颅骨较厚区域的 内表面，缺损的颅骨内缘可因棱角造成脑组织的切割伤；（5)导热性强，患者无法忍受长时 间阳光暴晒和严寒，不能起到隔热、隔冷、防震、隔音和缓冲的功能，容易出现头痛和癫痫发 作；(6)价格高。自体颅骨瓣作为颅骨缺损的修补材料，具有无需塑形，无排斥反应，患者心 理易接受，并能够再生复活，恢复颅骨隔温、隔音、防震和缓冲等自然属性，具有广阔的临床 应用前景。
[0004] 然而，自体颅骨的储存方法仍是困扰业界的巨大难题。现有技术中，自体颅骨的储 存方法主要包括两种：体内储存和体外储存。所谓体内储存，是指将手术中取出的颅骨瓣直 接植入患者的大腿内侧或腹部皮下备用，待患者3-6月后需行颅骨修补时，再将颅骨瓣取 出。然而，由于"自体骨吸收现象"，颅骨瓣植入后，随时间的延长而逐渐缩小，以至于无法修 补原来的缺损。同时，这种储存方式必须经历两次创伤，不仅增加新的疤痕，还增加了感染 风险。因此，越来越多的研宄者将目标放在自体颅骨瓣的体外储存方法上。
[0005] 中国专利文献CN103623464A公开了一种自体颅骨瓣回植技术的制备方法，包括 如下步骤：（1)去污工艺：采用普通洗涤剂将骨表面的油污等杂质清洗干净，然后再用蒸馏 水冲洗干净，晾干后获得完全的自体颅骨基质；（2)病毒灭活工艺：在室温条件下，用IOg/ L过氧乙酸和体积分数24%乙醇组成的过氧乙酸-乙醇混合液，微波震荡浸泡自体颅骨基 质4-6小时；(3)去蛋白工艺：在室温条件下，将自体颅骨基质放入浓度为10-20%的双氧 水中微波震荡浸泡48-72小时，然后再用纯化水冲洗干净；(4)脱脂工艺：用95%的酒精、 乙醚，及洗洁净浸泡脱脂和纯化水冲洗，把自体颅骨基质放入离心机脱水后，在常温下自 然干燥；（5)脱细胞工艺：在2-5°C条件下，将上述去脂步骤后获得的骨头基质放入浓度为 0. 5-1. 0%的十二烷基硫酸钠和浓度为0. 8-1. 2%的蛋白酶抑制剂PMSF的混合液中采用搅 拌震荡的方式浸泡24-48小时，然后再用纯化水循环冲洗24-48小时；在2-5°C条件下，再 将自体颅骨基质放入浓度为〇. 1-0. 4%的胰蛋白酶中浸泡12-24小时，然后再用纯化水循 环冲洗20-28小时，获得脱细胞基骨；（6)冻干工艺：将经脱细胞工艺后制备好的自体颅骨， 放入冷冻干燥机冻干；（7)包装、灭菌工艺：在洁净间内封装，采用环氧乙烷或Co-60进行灭 菌。
[0006] 上述方法，为达到灭菌目的，需采用洗涤剂去污，过氧乙酸与乙醇的混合液病毒灭 活，双氧水去蛋白，乙酸和乙醚脱脂以及十二烷基硫酸钠、蛋白酶抑制剂脱细胞等工艺步 骤，不但工序复杂，无法实现规模化处理，而且，大量化学制剂的应用，使颅骨瓣中的活性物 质大量丧失，甚至使颅骨瓣完全丧失活性而成为死骨。更令人困惑的是，如何排尽那些残留 于颅骨瓣中的化学物质，以及这些化学物质是否对身体产生长远危害，目前尚无确凿的理 论依据和最终定论。
【发明内容】
[0007] 为此，本发明提供了一种工艺简单，保留骨瓣活性物质，无化学物质残留，易实现 标准化、规模化和可追溯化的自体颅骨瓣体外储存方法。
[0008] 为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：
[0009] 本发明所述的一种颅骨瓣储存方法，包括如下步骤：
[0010] S1、采用清洗液清洗取下的颅骨瓣；
[0011] S2、用所述清洗液浸没所述颅骨瓣；
[0012] S3、低温速冻，使得所述颅骨瓣固定在所述清洗液形成的冰块中；
[0013] S4、经所述冰块，钻取若干个颅骨瓣通孔；
[0014] S5、对所述颅骨瓣进行干燥处理；
[0015] S6、对所述颅骨瓣进行辐照灭菌；
[0016] S7、将辐照灭菌后的所述颅骨瓣置于低温环境下保存。
[0017] 优选地，所述步骤S2包括：
[0018] 在第一容器中放置所述清洗液形成的冰块；
[0019] 将所述颅骨瓣凸面朝上放置在所述冰块上；
[0020] 在所述第一容器中注入所述清洗液，以浸没所述颅骨瓣。
[0021] 所述步骤S6中采用电子束或γ射线进行辐照灭菌，并且所述电子束或所述γ射 线的灭菌剂量为25kGy~35kGy。
[0022] 所述步骤S3中所述低温速冻步骤的温度为-4°C~_80°C。
[0023] 所述步骤S5中对所述颅骨瓣进行干燥处理的步骤采用冷冻干燥工艺，将所述颅 骨瓣的水分含量干燥至不高于6wt %。
[0024] 在所述步骤S4与S5之间，或者在所述步骤S5与S6之间还包括：
[0025] 在所述颅骨瓣上方设置隔离盖；
[0026] 对所述第一容器进行密闭封盖。
[0027] 对所述第一容器进行密闭封盖之后还包括：
[0028] 将所述第一容器置于第二容器中；
[0029] 对所述第二容器进行封盖。
[0030] 优选地，通过特卫强? (Tyvek?)对所述第一容器进行密闭封盖；和/或
[0031] 通过铝塑复合膜和/或聚酰胺/聚乙烯（PA/PE)复合多层膜和/或铝箔和/或 特卫强? (Tyvek?)进行所述第二容器密闭封盖；
[0032] 其中，对所述第一容器和/或所述第二容器进行密闭封盖的步骤在氮气氛围或者 惰性气体氛围中进行。
[0033] 对所述第一容器进行密闭封盖之后还包括通过第一盖体与所述第一容器扣合封 盖；和/或
[0034] 对所述第二容器进行密闭封盖之后还包括通过所述第二盖体与所述第二容器扣 合封盖；
[0035] 其中，所述第一盖体或所述第二盖体为耐辐射的聚对苯二甲酸乙二醇酯-1，4-环 己烷二甲醇酯（PETG)、耐辐射的聚酰胺（PA)、耐辐射的聚乙烯（PE)中的至少一种。
[0036] 所述清洗液为氯化钠水溶液，或者包括氯化钠的水溶液以及乳酸钠、碳酸氢钠、硫 酸镁、氯化钾、碳酸钙、葡萄糖中的至少一种。
[0037] 本发明的上述技术方案相比现有技术具有以下优点：
[0038] 1、本发明所述的自体颅骨瓣体外储存方法，不使用任何化学制剂，既能有效避免 所述颅骨瓣在储存过程中容易遇到的微生物污染问题，又能彻底解决化学物质的残留问 题。
[0039] 2、本发明所述的颅骨瓣储存方法，能在最大程度上实现颅骨瓣回植后成为活骨。 由于自体颅骨的回植无抗原抗体的排斥反应，因而大大降低了回植的手术风险。同时，自体 颅骨瓣保留了有别于异质材料的生物学构造和成骨所需的活性物质，摆脱了对异质材料的 依赖，实现了颅骨缺损的再生修复。
[0040] 3、本发明所述的颅骨瓣储存方法，工艺简单、易实现标准化、规模化和可追溯化， 可人工、半自动化甚至全自动化实施，具有深远的社会价值和意义。
[0041 ] 4、本发明所述的颅骨瓣储存方法，利用清洗液的液态和固态之间的相互转换，将 不规则的颅骨瓣充分紧固在所述清洗液形成的冰块中，形